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纸片法检测革兰阴性杆菌产AmpC酶研究
目前临床实验室通常只能根据耐药表型综合判断推测产AmpC酶细菌,但其假阳性和假阴性较高.Coudron等[1]提出的改良三维试验法以及分子生物学方法等虽然准确可靠,但过程繁琐复杂,需要时间长,只适合实验室研究,难以在临床常规检测中开展.为此,我们采用乙二胺四乙胺(EDTA)浸润纸片法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便的优点.
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钩藤碱抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受性反射的研究
目的 研究钩藤碱(Rhy)对颈动脉窦压力感受性反射(CSB)的作用并探讨其作用机制.方法 利用隔离灌流大鼠颈动脉窦技术,确定各项功能参数,如阈压(TP)、饱和压(SP)、平衡压(EP)、工作范围(OR)、大斜率(PS)和平均动脉压反射性下降幅度(RD)等.Rhy(10、50、100 μmol/L)溶于K-H液后灌流窦区,以斜坡方式升降窦内压来观察Rhy对CSB的影响.分别预先灌流一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,钾通道阻断剂四乙铵(TEA)和L-型钙通道开放剂Bay K8644后再给予Rhy,观察它们对Rhy作用的影响.结果 Rhy浓度依赖性地抑制了CSB, 使其各功能参数改变, TP和SP增大,PS和RD均减小.Rhy的抑制作用不能被L-NAME(300 μmol/L)和 TEA(1 mmol/L)预处理所取消,而可被Bay K8644 (500 nmol/L)明显减弱.结论 Rhy抑制了CSB,此作用可能是通过减弱压力感受器的牵张敏感性离子通道的钙内流来实现,而与NO和钾通道无关.
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1乙醇对大鼠大脑中动脉四乙胺自律性收缩作用的影响
目的:研究乙醇对钾通道阻断剂四乙胺(Tetraethylammonium,TEA)对大鼠大脑中动脉自律性收缩作用的影响及机制.方法:大鼠大脑中动脉环固定在DMT多道记录系统浴槽内传感器上,通过Chart 5.4记录TEA作用下血管环张力的变化,并观察各种工具药对TEA缩血管作用及自律性的影响.结果:TEA(10-60mmol·L<'-1>)可引起大脑中动脉浓度依赖性收缩,并产生自律波.TEA类似物gallamine(2-10mmol·L<'-1>)引起浓度依赖性收缩,但不引起自律波.钙拮抗剂普萘洛尔(1 μmol·L<'-1>),硝苯地平(1 μmol·L<'-1>)和LaCl<,3>(1 μmol·L<'-1>)均明显抑制TEA的收缩血管的作用,并且取消TTEA产生的自律波.α肾上腺索能受体阻断剂哌唑嗪(10 μmol·L<'-1>),育亨宾(10μmol·L<'-1>)和血管紧张素口受体拮抗剂氯沙坦(1μmol·L<'-1>)对TEA的缩血管作用及自律波均无明显影响.血管紧张素转换酶抑制剂依那普利(0.1 mmol·L<'-1>)抑制了TEA的缩血管作用,但TEA产生的自律波无作用;1%乙醇明显增强了TEA的缩血管作用,并且完全抑NEA产生的自律波.结论:TEA缩血管作用所产生的自律波可能与TEA的结构胞浆内Ca<'2+>浓度增加有关;乙醇可能通过阻滞血管平滑肌上的某些钾通道而取消其自律性.
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钾通道阻滞剂四乙胺诱导胶质瘤细胞增殖抑制作用的实验研究
目的：研究钾离子通道阻滞剂四乙胺（T EA ）在体外是否具有抗胶质瘤作用，对胶质瘤细胞是否具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法四甲基噻唑蓝比色法（MTT 法）观察 TEA对胶质瘤细胞生长、增殖的影响。结果 MTT法发现 TEA可显著抑制胶质瘤细胞株的生长，且呈时间和剂量依赖性。结论 T EA在体外可显著抑制C6与9L胶质瘤细胞株增殖，其作用机制可能和细胞凋亡有关。
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银杏内酯、4-AP和TEA对AGZY-83-a细胞的作用研究
目的研究中药银杏内酯A、B及钾离子通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)和四乙胺(TEA)对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的抑制作用.方法应用体外培养的人肺腺癌细胞株AGZY-83-a,首先采用MTT法测定不同剂量银杏内酯A、B和4-AP、TEA对肿瘤细胞生长的抑制作用,于酶标仪测OD值(λ=490 nm),计算其抑制率;同时进一步绘制药物作用7天的生长曲线以观察其抗肿瘤作用.结果应用不同剂量银杏内酯A和B 48h后测得的OD值与正常对照组无显著差异,1μmol/L银杏内酯A和B对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为5.05%和2.52%(n=6,P＞0.05);不同剂量4-AP、TEA对人肺腺癌细胞有明显的抑制作用,呈浓度依赖关系.1mmol/L 4-AP和5mmol/L TEA对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为15.40%和30.69%(n=6,P＜0.001).不同作用时间的银杏内酯A、B对人肺腺癌细胞生长亦无抑制作用;不同作用时间的4-AP和TEA对人肺腺癌细胞有抑制作用.结论银杏内酯A、B对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的生长无抑制作用.4-AP和TEA对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a有明显的抑制作用,与药物浓度正相关.
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K+通道阻断剂四乙胺对小鼠胰岛β细胞凋亡的影响
目的研究K+通道阻断剂四乙胺(TEA)对胰岛β细胞凋亡的影响.方法以γ干扰素(IFN-γ)+白细胞介素1β(IL-1β)或链脲佐菌素(STZ)作用于小鼠胰岛细胞(NIT细胞),同时加入TEA,通过AnnexinV-碘化丙啶(PI)、PI、Rhodamine123染色,采用流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞膜电势;用MTT法检测细胞活性.结果 IFN-γ+IL-1β或STZ可明显诱导NIT细胞凋亡,诱导组细胞存活率、凋亡率与未诱导组及TEA组差异均有统计学意义(均P＜0.01);TEA能抑制诱导的NIT细胞凋亡(均P＜0.01).结论胰岛β细胞凋亡过程中可能也存在K+外流现象,K+通道在胰岛β细胞的凋亡中可能起着重要作用;TEA可抑制凋亡刺激剂诱导的胰岛β细胞凋亡,其效应可能与阻止K+外流有关.
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兔血管平滑肌延迟整流钾通道研究及其与克隆Kv1.5通道的电生理特性比较
本文用膜片箝全细胞技术比较研究了单个兔肺动脉血管平滑肌细胞上延迟整流钾通道与克隆Kv1.5通道的电生理及药理学特性.将平滑肌细胞箝制在-40mV,以10 mV的步距阶跃去极化(0～60mV)可产生一系列快速上升的外向电流,几无衰减,其激活曲线的V1/2为27.2 mV.灌流液中加人100mmol/L TEA和1 mmol/L 4AP,电流幅度均明显减小,细胞外Ca2+水平由1.5 mmol/L降至0.5mmol/L甚至0 mmol/L时,该电流无明显改变.而在HBK7细胞(克隆Kv1.5通道),箝制在-80mV,以10mV的步距阶跃去极化(-30～+60mV),可产生一系列的快速上升的外向电流,激活更快,无衰减,其激活曲线的V1/2为0.8 mV.4AP抑制Kv1.5的IC50为7.3 mmol/L,呈现频率和使用非依赖性;TEA30,100,300 mmol/L分别使该电流幅度下降28.6%,37.4%,46.3%,Quinidine0.1和1 mnol/L使其下降29.7%,37.6%.研究表明,我们记录到急性分离的兔血管平滑肌细胞延迟整流钾通道,它的电生理及药理学特性与克隆的Kv1.5延迟整流钾通道存在明显差别.
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四乙胺对肝星状细胞钾通道及细胞增殖的影响
目的 探讨肝星状细胞钾通道对肝星状细胞增殖的影响,观察钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肝星状细胞增殖和钾离子电流的作用.方法 以TEA作用于传代培养的肝星状细胞,通过MTT法、流式细胞术及单通道细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肝星状细胞的增殖、细胞周期及细胞膜钾通道的影响.结果 TEA对肝星状细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,使细胞周期阻滞于G0/G1期.单通道细胞膜片钳发现肝星状细胞上有大电导离子通道存在,其电导值为(210.86±5.49)ps(n=7).TEA可明显减少外向该离子通道开放概率,TEA 0.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0mmol/L组的开放概率为(0.327±4.80)、(0.316±4.38)、(0.279±1.72)、(0.245±1.21)、(0.194±1.13)和(0.118±1.62)(F=22.561,其中10.0、20.0和40.0mmol/L组分别与0.0mmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝星状细胞上有大电导钾通道存在,阻断钾通道可抑制肝星状细胞增殖,钾通道对细胞增殖可能具有调控作用.
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四乙胺对宫颈癌SiHa细胞增殖及电压门控钾通道的抑制效应
背景与目的:多种钾通道涉及恶性肿瘤细胞增殖的调控,为了探讨电压门控钾通道对宫颈癌细胞增殖的影响,本研究以人宫颈癌细胞SiHa为研究对象,观察电压门控钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肿瘤细胞增殖和钾离子电流的作用.方法:以TEA作用于体外培养的SiHa细胞,通过MTT法、Hoechst33258染色、流式细胞术及全细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肿瘤细胞的增殖、细胞凋亡、细胞周期及细胞膜电压门控钾通道的影响.结果:TEA对SiHa细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,并能诱导细胞凋亡、使细胞周期阻滞于G0/G1期,10 mmol/L TEA可将峰值外向钾离子电流显著降低[(260±12)pA vs.(58±6)pA,P＜0.01].结论:电压门控钾通道对SiHa细胞增殖的调控具有重要作用,阻断电压门控钾通道可抑制SiHa细胞增殖.
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右美托咪定引起心动过缓的心脏电生理机制及其与钾通道的关系
目的:探讨右美托咪定致心动过缓的心脏电生理机制及其与钾通道的关系.方法:成年家兔18只,体重2.0 ～ 2.5 kg,制备Langendorff离体心脏模型,K-H液平衡灌注15 min后随机分为3组(n=6):对照组(C组)继续灌注K-H液60 min;右美托咪定组(D组)灌注含0.05 μg/L右美托咪定的K-H液60 min;四乙胺组(K组)灌注含10 mmol/L四乙胺的K-H液60 min.记录平衡灌注15 min (T0)、继续灌注15、30、60 min (T1～T3)时HR、单相动作电位(MAP),计算动作电位复极50％、90％的时程(MAPD50、 MAPD90).记录心律失常的发生情况.结果:与T0比较,D组和K组T1～T3时HR减慢(P＜0.01),MAPD50、 MAPD90延长(P＜0.05);与C组比较,D组和K组HR减慢(P＜0.01),MAPD50、 MAPD90延长(P＜0.05).结论:右美托咪定可能通过阻滞心肌细胞膜钾离子通道,引起动作电位时程延长,从而导致心率减慢.
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人肺腺癌A549细胞膜钾离子通道特性与细胞增殖关系的研究
背景与目的肺癌的发生发展、侵袭和转移均受肺癌相关基因的调控,而相关基因的表达、缺失或/和突变常是通过细胞膜信号传导系统和细胞膜离子通道实现的.本研究观察了人肺腺癌细胞系A549细胞膜钾离子通道的特性,以探讨应用钾通道阻断剂抑制肺腺癌细胞增殖的可行性.方法以人肺腺癌细胞系A549细胞为研究对象,采用全细胞膜片钳技术记录细胞膜离子通道特性;通过细胞体外增殖试验,观察钾通道阻断剂四乙胺(TEA)对细胞增殖影响.结果A549细胞在保持电压为-70 mV,测试电压-30～+110 mV时,记录到一种跨膜电流,该跨膜电流具有电压依赖性、外向整流特性,并且500 ms内不失活,可被钾通道阻断剂TEA阻断;细胞体外增殖试验显示,20、40和60 mmol/L的TEA作用24 h能明显抑制人肺腺癌A549细胞的体外增殖,而0.2和2 mmol/L的TEA对细胞的体外增殖无明显抑制作用.结论人肺腺癌细胞系A549细胞中存在外向性电压门控性钾通道,该钾通道可被TEA阻断;钾通道阻断剂TEA能抑制A549细胞的体外增殖,抑制作用与TEA存在剂量依赖关系.
