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小檗碱抑制人成骨肉瘤细胞生长及机制研究
目的 探讨小檗碱对人成骨肉瘤细胞MG63生存率的影响.方法 将MG63细胞分为不加小檗碱的对照组和加小檗碱的实验组.采用CCK-8法测定各组细胞生存率,采用Western Blot法对小檗碱的作用机制进行探讨.结果 MG63细胞经0(对照组)、1、5、10、20、50 μg/ml浓度的小檗碱处理48 h后,细胞生存率分别为(99.37±1.13)％、(91.37±4.25)％、(72.44±2.89)％、(57.33±1.37)％、(50.14±4.05)％、(37.53±4.14)％.0(对照组)、20、50 μg/ml浓度的小檗碱处理MG63细胞48 h后,Bcl-2/β-action相对半定量表达值分别为(0.4167±0.0115),(0.3458±0.0146),(0.2987±0.0207)；Bax/β-action相对半定量表达值分别为(0.4327±0.0206),(0.5007±0.0089),(0.7115±0.0214)；Caspase-9/β-action相对半定量表达值分别为(0.1459±0.0107),(0.2416±0.0098),(0.2584±0.0330).实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小檗碱对MG63细胞具有抑制作用,其作用可能是通过调节凋亡基因Bcl-2、Bax的表达,活化caspases-9诱导肿瘤细胞凋亡.
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联合应用LY294002和表柔比星对骨肉瘤细胞株MG63的研究
目的 探究使用表柔比星联合磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B(PI3K／Akt)信号通路抑制剂LY294002对体外培养骨肉瘤细胞MG63的影响.方法 以不同浓度及组合的药物处理MG63细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖状况;利用流式细胞术检测药物对MG63凋亡率;采用免疫蛋白印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶( caspase)-3等凋亡相关蛋白表达.结果 CCK-8检测结果显示,与对照组相比表柔比星(EPI)和LY294002对MG63的生长均有抑制作用,两者联合使用的抑制作用更加显著并呈现剂量依赖性.流式细胞术的结果表明LY294002(20μM)的凋亡率为(32.1 ±3)%,EPI(10μM)的凋亡率为(21.5 ±2)%,两者合用于细胞后可显著引起细胞凋亡,细胞凋亡率为(65.2 ±5)%(P＜0.01).免疫蛋白印记法结果显示随着两药联用的浓度增加,活化的凋亡蛋白Cleaved PARP,Cleavedcaspase-3 表达显著增加( P＜0.01).结论LY294002可以增强表柔比星对MG63细胞的生长抑制作用并且促进其凋亡,机制可能是通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶依赖性的细胞凋亡途径发挥作用.
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用荧光强度反映Cbfal活性成骨细胞模型的构建
目的 构建稳定表达由60SE2启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的MG63细胞株,并筛选出能反映Cbfal活性的细胞株.方法 合成60SE2启动子的序列,并将其构建到T载体中:然后通过双酶切得到启动子片段;与去除CMV启动子的报告基因载体pEGFP-Nl的酶切片段连接,构建真核表达载体;并转染到MG63细胞系,经G418筛选得到了稳定转染60SE2-EGFP基因的MG63细胞株.用不同浓度的IGF-I和VD,处理,通过EGFP荧光强度分析,ALP活性测定,筛选出能够响应IGF-I和VD3的细胞株.结果 构建了pUC-60SE2扩增载体和p60SE2-EGFP真核表达载体,通过稳定转染以及IGF-I、VD_3筛选获得一株荧光强度随IGF-I和VD_3处理而增强的细胞株.OSE-MG63.结论 构建了能反应Cbfal活性的成骨细胞模型,为进一步研究微重力对Cbfal的转录活性及信号传导途径的影响奠定了基础.
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苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡的实验研究
目的：探讨苦参碱体外促进肿瘤细胞凋亡及其作用机制。方法将浓度为0：．2 mg/ml、0．4 mg/ml、0．6 mg/ml的苦参碱作用于卵巢癌细胞株A21-2和骨肉瘤细胞株MG63，利用倒置相差显微镜观察不同浓度苦参碱作用后细胞的形态变化；流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡周期、Caspase-3蛋白的表达。结果倒置相差显微镜观察表明，苦参碱能抑制MG63细胞和A21-2细胞的增殖；FCM分析发现，苦参碱与细胞作用72h后，G0/G1期前出现凋亡峰，与对照组比较，观察组不同浓度下凋亡率升高（ P ＜0．01），且随浓度升高，凋亡率亦增高，差异有统计学意义（P ＜0．05），FCM分析显示，与对照组比较，观察组不同浓度下Caspase-3蛋白表达升高（ P ＜0．01），且随浓度升高， Caspase-3蛋白表达亦升高，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论苦参碱能明显抑制A21-2细胞和MG63细胞的增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能与促进Caspase-3蛋白的表达有关。
关键词： 苦参碱 A21-2 MG63 细胞凋亡 Caspase-3蛋白 -
PIM1在人骨肉瘤细胞中高表达及对增殖的影响
目的 探讨PIM1表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响.方法 利用免疫组化SP法及多因素分析法探讨PIM1在人骨肉瘤组织及相应非癌组织中的表达情况;利用RNA干扰、细胞转染后CCK8法及平板克隆形成实验观察PIM1基因表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;通过细胞转染后CCK8法检测PIM1基因高表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响.结果 PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中阳性表达率为90.00％(108/120),在相应非癌组织中阳性表达率为73.33％(88/120),PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中的阳性表达率高于相应非癌组织(P<0.05);干扰了PIM1基因表达的骨肉瘤细胞MG63和U2OS细胞的克隆形成及增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著降低(P<0.05);转染了PIM1高表达质粒的骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著升高(P<0.05).结论PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中高表达,且与肿瘤大小、Enneking分期和T分期有关;PIM1表达可促进骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖.
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沉默HAX1基因对人骨肉瘤细胞凋亡的影响
目的 观察HS1相关蛋白X-1(HS1-associated protein X-1,HAX1)对骨肉瘤细胞凋亡的影响.方法 应用基因沉默技术在骨肉瘤细胞系MG63中下调HAX1基因的表达,并且通过Western blot实验与免疫荧光实验检测基因沉默效率;应用MTT方法及克隆形成实验,评价沉默HAX1基因对MG63细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡并通过Western blot实验检测下游蛋白的表达变化.结果 沉默HAX1基因抑制人骨肉瘤细胞系MG63的增殖能力与克隆形成能力,流式细胞技术显示沉默HAX1可以诱导MG63细胞凋亡,Western blot实验说明HAX1诱导的MG63细胞凋亡与caspase3和caspase9蛋白上调相关.结论 HAX1可能是维持骨肉瘤细胞增殖能力的关键基因,沉默该基因诱导骨肉瘤细胞凋亡可能与caspase3/caspase9上调相关.
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成骨相关分子在成骨肉瘤细胞株MG63中的表达
背景:许多学者在骨肉瘤组织中检测到许多成骨相关分子,并发现这些分子与骨肉瘤的发生发展和转归密切相关.目的:观察骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子及核心结合因子α1在成骨肉瘤细胞株MG63中的表达.设计、时间及地点:分子生物学观察实验,于2007-03/11在上海长海医院中心实验室完成.材料:成骨肉瘤细胞株MG63购自中科院上海生物研究所.方法:MG63细胞株经血细胞计数板计数,以1×104/cm2接种于100 mL培养瓶,置于37℃、体积分数为5%CO2和饱和湿度的培养箱中,以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液贴壁培养.待细胞生长达到70%～80%汇合时,0.25%的胰酶消化5 min,加入以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液中止消化,按1:3的比例传代培养.主要观察指标:以RT-PCR和免疫组织化学方法检测骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1在MG63中的表达.结果:RT-PCR及免疫组织化学方法均从MG63细胞中检测到骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1的阳性表达.结论:从转录和翻译的水平证实MG63细胞表达骨形态发生蛋白7、血管内皮生长因子、核心结合因子α1,提示这些成骨相关分子在骨肉瘤的发生发展过程中可能起着重要作用.
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电化学沉积含锂离子的钙磷涂层
背景:低浓度锂离子(4 mmol/L)可以激发Wnt基因信号,促进人间充质干细胞的有丝分裂和增殖.目的:拟通过电化学共沉积,在钛合金表面制备含锂离子的钙磷涂层,观察其对MG63类成骨细胞贴附和增殖的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,2007-03/12在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成.材料:钛含金片由陕西省宝鸡市德吕钛镍有限公司提供,加工成直径1 cm,厚1 mm圆片;LiCI为美国EMD Biosciences公司产品.MG63细胞由武汉大学舆型培养物收藏中心提供.方法:将0.5 g/L和5 g/L两种浓度的锂离子加入钙磷电解液中,在电场作用下于阴极钛合金片上制备钙磷复合涂层.采用扫描电镜观察涂层的表面形貌,X射线衍射和红外光谱确定涂层的组成,测量涂层中锂离子含量和涂层厚度,监测锂离子在仿生理体液中的释放曲线,采用细胞计数试剂盒了解MG63类成骨细胞存涂层表面的贴附和增殖情况.主要观察指标:钙磷涂层的表面形貌、组成、厚度、锂离子含量和MG63类成骨细胞在涂层表面的贴附和增殖情况.结果:锂离子的加入抑制了钙磷涂层的沉积,随着电解液中锂离子浓度的增加,钙磷涂层表面逐渐变得平整,晶粒变小,涂层中磷酸八钙含量增加,磷灰石含量减小,同时涂层厚度降低.当电解液中含0.5 g/L LiCI时,涂层中锂离子含量为2.2 mg/g,当电解液中含5 g/L LiCI时,涂层中锂离子含量为5.5 mg/g.在pH 7.3时,锂离子存仿生理体液中呈"爆发式"溶解曲线,约0,5 h后即达到溶解总的70%～80%,24 h后,其溶解逐渐达到饱和状态.MG63细胞在含锂离子的涂层表面贴附量增多,当电解液中含5 g/L LiCI时,MG63细胞在涂层表面第3天的倍增指数显著性增高(P＜0.05).结论:可以通过电化学沉积在钙磷涂层内复合锂离子,并可能凼此增强了涂层的生物活性.
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依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用
背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道.目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响.方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133+骨肉瘤干细胞.MTT检测0,0.1,0.2,0.4 mg/L阿霉素以及0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响.Transwell小室检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响.Western Blot检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响.结果与结论:①阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;②与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;③依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力.
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构建裸鼠皮下荷瘤模型：人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B
背景：多种细胞株参与骨肉瘤动物模型的和构建。目的：比较人骨肉瘤细胞株中MG63、U2OS和143B在裸鼠皮下的成瘤情况，为骨肉瘤的动物实验研究奠定基础。方法：将18只裸鼠随机等分成3组：MG63组、U2OS组和143B组，分别于各组裸鼠后侧背部皮下注射MG63、U2OS和143B三种细胞株，观察成瘤情况。结果与结论：MG63和U2OS细胞株注射的裸鼠未能成瘤。143B细胞株注射的裸鼠于(6±1) d成瘤，成瘤率100%(6/6)，肿瘤生长较迅速，2个月时平均瘤体体积为(3475±1544) mm3，荷瘤裸鼠存活时间为(68±10) d。苏木精-伊红染色显示瘤体组织中可见癌细胞成巢，核大深染，多分裂。说明143B细胞株成瘤良好，可用于骨肉瘤动物实验研究。
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纯钛表面含锌活性涂层对成骨细胞生物学活性影响的研究
目的 采用微弧氧化(micro-arc oxidation,MAO)技术,在纯钛表面制备含锌(Zn)活性涂层,并评价其对成骨细胞活性的影响.方法 本实验于2009年10月至2010年10月在中国医科大学附属口腔医院中心实验室进行.以机械抛光纯钛试样作为对照组(CP组)；经MAO技术处理的纯钛涂层试样根据钙(Ca)含量不同分为高钙组(H-Ca组)、低钙组(L-Ca组),以及在低钙组的涂层中加入锌元素的低钙加锌组(L-Ca-Zn组).每组32个试件.将4组试样材料与MG63细胞复合培养,利用扫描电子显微镜(SEM)观察、噻唑蓝(MTT)比色试验、碱性磷酸酶(ALP)活性测定及酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法,评价材料对成骨细胞黏附、增殖、分化及矿化的影响.所得数据采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析(α=0.05).结果 在实验检测期间,H-Ca组试样对成骨细胞的生长增殖、分化、矿化作用均优于L-Ca组,差异有统计学意义(P＜0.05).比较L-Ca-Zn组与H-Ca组可以看出,在实验检测初期H-Ca组试样对成骨细胞的生长增殖、分化、矿化作用优于L-Ca-Zn组；随着观察时间的延长,L-Ca-Zn组试样细胞的增殖水平和ALP活性与H-Ca组间差异无统计学意义(P＞0.05).比较L-Ca-Zn组和L-Ca组可以看出,在实验检测初期L-Ca-Zn组试样对成骨细胞的作用与L-Ca组差异无统计学意义(P＞ 0.05)；随着观察时间的延长,L-Ca-Zn组试样显示出较L-Ca组试样具有更好的提高成骨细胞活性的作用(P＜0.05).结论 采用MAO技术制备的含锌活性涂层纯钛可在一定程度上促进成骨细胞黏附、增殖、分化及矿化,具有良好的生物相容性.
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柚皮苷与顺铂联用对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响
目的 观察柚皮苷与顺铂联用对MG63 细胞增殖和迁移的效果.方法将传代的MG63 细胞分为顺铂处理组 (顺铂组) 、柚皮苷处理组 (柚皮苷组) 和两种药物联合处理组 (联合组), 分别使用不同浓度的药物在不同时间点用MTT 方法检测MG63 细胞光密度值 (OD 490), 观察细胞增殖情况; 在药物作用24 h 后观察细胞迁移情况.随后通过Western blot 实验检测药物对cyclin d1 蛋白和MMP2 蛋白表达情况的调节作用.结果对细胞处理24 h 后, 20 μg/mL 柚皮苷组、5 μg/mL 顺铂及二者联合处理对MG63 细胞的增殖抑制率分别为7. 52％ ± 2. 31％、26. 89％ ± 0. 19％、42. 51％ ± 2. 53％, 联合组抑制率高于各单药组 (P＜0. 01).顺铂与柚皮苷均可以抑制MG63 细胞的迁移, 二者联合作用后对细胞迁移的抑制作用更为明显.蛋白检测显示, 顺铂和柚皮苷作用MG63 细胞24 h 后, 均可以在一定程度上抑制cyclin d1 和MMP2 的表达, 联合作用后抑制作用增强.结论柚皮苷与顺铂联合使用对抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移有协同效果, 可以降低顺铂的使用浓度, 进而减少治疗时化疗药物的毒副作用.
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15－脱氧前列素2抑制MG63细胞活性并诱导其凋亡的机制
目的：研究过氧化物酶体增殖活化受体（PPAR）γ的内源性配体15－脱氧前列素2（15d－PGJ2）对骨肉瘤细胞株MG63的增殖活性的影响及诱导其凋亡可能的作用机制。方法采用人骨肉瘤细胞MG63，分别用终浓度为0．1、1、5、10和50μmol／L15d－PGJ2处理，对照组不给予药物，四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法测定药物作用24 h、48 h、72 h及96 h细胞增殖的变化；流式细胞术（ FCM）结合AnnexinV／PI双染色观察终浓度5μmol／L和20μmol／L15d－PGJ2作用48 h和72 h MG63细胞周期变化及诱导细胞凋亡和坏死情况；逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）检测终浓度20μmol／L 15d－PGJ2处理48 h对MG63细胞中PPARγmRNA的表达影响；通过免疫细胞化学技术检测终浓度20μmol／L15d－PGJ2作用48 h，MG63细胞中凋亡相关蛋白caspase3，p53和Bax／bcl－2的表达情况。结果 MTT结果显示：①各浓度15 d－PGJ2作用24 h、48 h、72 h及96 h，对MG63细胞增殖均有抑制作用，48 h达到佳抑制效果。48 h、72 h及96 h抑制率两两比较均无差异（ P＞0．05），且50μmol／L对细胞的抑制率几乎达100％；②在各时间点，各浓度组间比较均有差异（ P＝0．000），在0．1～50μmol／L浓度组区间，相同时间点的抑制率有随浓度升高而递增的趋势。流式细胞术检测结果显示：不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义（P＝0．000）。加药组G0／G1期细胞比例均高于对照组，S和G2／M期相应减少，且细胞凋亡率增高，表明加药组可使细胞G0／G1期阻滞且诱导细胞凋亡；RT－PCR检测PPARγmRNA的表达，并同时逆转录稳定的内参片段β－actin，以二者的面积灰度值比值作为该mRNA的相对表达量，20μmol／L 15d－PGJ2作用48 h，PPARγmRNA的相对表达量（2．06±0．35）与对照组（0．94±0．23）比较有差异（P＜0．05）；免疫细胞化学结果显示：药物干预组凋亡相关蛋白caspase3和 Bax表达与对照组比较显著增加，而 p53和 bcl－2表达下降（P＜0．05）。结论①PPARγ激动剂15d－PGJ2能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的生长，引起细胞G1期阻滞并诱导细胞凋亡。②15d－PGJ2可能通过增加PPARγmRNA表达，上调凋亡相关蛋白caspase3和Bax及下调p53和bcl－2表达而诱导细胞凋亡。
关键词： 15 d-PGJ2 过氧化物酶体增殖活化受体 骨肉瘤 MG63 凋亡 -
人LIMK1基因荧光真核表达载体的构建及在人成骨肉瘤MG63细胞中的表达
目的 构建并表达人LIMK1与绿色荧光蛋白(EGFP-C1)的融合蛋白EGFP-LIMK1,并监测其在人成骨肉瘤MG63细胞内的表达及活性.方法 利用基因重组技术将LIMK1与绿色荧光蛋白融合并构建真核细胞表达质粒,通过脂质体介导法导人人成骨肉瘤MG63细胞内,用荧光显微镜观察LIMK1基因表达情况,通过Westernblot检测其在MG63细胞中的活性.结果 双酶切鉴定证实LIMK1片段已克隆到pEGFP-C1载体的Kpn Ⅰ和Not Ⅰ位点之间,测序结果证实了插入片段的正确性,转染MG63细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测证实LIMK1在MG63细胞中活性上调.结论 成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的LIMK1真核表达载体并检测到其在真核细胞MG63中的表达及活性.
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雷帕霉素对不同肿瘤细胞Bax/Bcl-2和活性caspase-3表达的影响
目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对不同肿瘤细胞Bax/Bcl-2和活性caspase-3表达的影响及其可能的机制.方法:采用RAPA处理肺腺癌A549细胞、人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞和人骨肉瘤MG63细胞后,MTT法检测细胞的相对增殖率,蛋白质印迹法检测细胞中Bcl-2、Bax和活性caspase-3的表达以及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和Akt活性的变化;RAPA联合ERK抑制剂U0126或PD98059以及联合Akt抑制剂wortmannin处理MG63和SH-SY5Y细胞后,分别用MTT法和蛋白质印迹法检测细胞的相对增殖率和Bcl-2、Bax、活性caspase-3的表达.结果:在A549细胞中,RAPA上调细胞Bax/Bcl-2和活性caspase-3的表达(P＜0.05),细胞的相对增殖率下降(P＜0.05).在MG63细胞中,RAPA通过ERK上调Bcl-2和Bax的表达,Bax/Bcl-2和活性caspase-3的表达以及细胞的相对增殖率无明显变化;ERK抑制剂U0126或PD98059逆转RAPA导致的Bcl-2上调,联合RAPA作用后细胞中Bax/Bcl-2和活性caspase-3的表达上调(P＜0.05),细胞的相对增殖率降低(P＜0.05).在SH-SY5Y细胞中,RAPA通过Akt上调Bcl-2的表达,Bax/Bcl-2降低(P＜0.05),细胞的相对增殖率上升(P＜0.05); Akt抑制剂wortmannin逆转RAPA导致的Bcl-2上调,联合RAPA作用后细胞中Bax/Bcl-2和活性caspase-3的表达上调(P＜0.05),细胞的相对增殖率降低(P＜0.05).结论:RAPA在不同肿瘤细胞中可能通过调节不同的激酶影响Bax/Bcl-2和活性caspase-3的表达.
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HA涂层-多孔TiO2-钛基体梯度涂层对MG63的影响
目的:评价微弧氧化(micro-arc oxidation,MAO)与离子束辅助沉积(ion beam assisted deposition,IBAD)相结合的处理方法对钛种植材料表面微形态及成骨活性的影响.方法:利用IBAD技术,在MAO钛材料表面制备羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)涂层.将钛种植材料按照不同表面处理方法分为机械抛光组(S0)、MAO组(S1)和MAO与IBAD相结合组(S2),以S0作为对照组.利用表面形貌仪分析3组材料表面形貌及粗糙度,利用激光共聚焦显微镜观察成骨细胞在材料表面黏附铺展状态:采用MTT法和碱性磷酸酶(ALP)活性测定,检测不同处理方法对材料成骨活性的影响.所得数据利用SPSS11.0软件包进行单因素方差分析.结果:S2组材料表面粗糙度略小于S1组;复合培养5d后,S2组细胞增殖水平显著高于其他2组;10d后,2粗糙组ALP活性显著高于S0组.结论:MAO与IBAD技术相结合,在MAO表面制备HA活性层,能够显著促进成骨细胞的黏附增殖,促进成骨细胞的矿化.
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RNAi抑制骨肉瘤细胞KDR蛋白表达的研究
目的研究siRNA表达载体对骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白表达的抑制作用.方法构建pSuper质粒,化学合成2段编码发卡RNA序列、靶向KDR基因的寡核苷酸,克隆进pSuper的pol III HI启动子的下游,重组构建抑制KDR表达的siRNA质粒,并转染入骨肉瘤MG63细胞,Western blot检测转染后KDR基因在蛋白水平表达的变化.结果酶切后电泳鉴定正确的重组质粒小量扩增后测序,证实成功构建了KDR siRNA表达质粒,转染入细胞后,有效抑制了KDR基因在蛋白水平的表达.结论成功构建的siRNA表达载体有效抑制了骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白的表达,为进一步分析骨肉瘤中KDR基因的功能及肿瘤治疗奠定了研究基础.
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新型羟磷灰石涂层的聚乳酸支架体外细胞相容性研究
目的 研究新型的用固定化尿素酶的方法制备的羟基磷灰石/聚乳酸(HA/PLLA)复合材料的生物相容性和成骨活性.方法 将成骨样MG63细胞种植在HA/PLLA和PLLA(对照材料)三维支架材料上.在培养2,4和6天后通过改良的MTT法检测细胞在材料上的增殖情况;用pNPP磷酸酶检测试剂盒测定ALP含量来评估成骨样细胞在材料上的分化情况;在培养4天后用扫描电镜观察细胞在材料上的形貌变化;用RT-PCR检测磷酸酶(ALP),骨钙素(OC),1型胶原等基因变化情况.结果在培养2天和4天后,HA/PLLA材料上的细胞数量要明显多于PLLA材料组,说明相对于传统的PLLA材料,HA/PLLA材料更能促进成骨细胞的增殖.电镜结果提示,在培养4天后HA/PLLA材料上的MG63细胞铺展在材料孔壁表面,提示细胞具有良好的活力,而PLLA组的细胞表现为圆球形,未见明显的细胞伪足形成,其形态明显不及HA/PLLA材料组.ALP检测结果提示,HA/PLLA组的细胞具有更高的ALP活性.RT-PCT结果也提示,HA/PLLA组具有更高的ALP和OC基因表达,提示HA/PLLA材料更能促进成骨细胞的分化.结论 通过固定化尿素酶的方法制备的新型羟基磷灰石/聚乳酸材料相比传统的PLLA材料更能促进成骨细胞的增殖和分化,提示该材料是一种良好的骨组织工程支架材料.
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葛根素对人骨肿瘤细胞株MG63的增殖抑制和诱导凋亡作用
目的 探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制.方法 取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100 μmol·L-1).细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA水平.Western blotting检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平.结果 葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和Bax表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达.结论 葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡.
关键词： 葛根素 MG63 增殖 凋亡 PI3K/AKT/p53 -
姜黄素对人骨肉瘤MG63细胞凋亡的影响
目的 探讨姜黄素诱导人骨肉瘤细胞株MG63凋亡的机制.方法 不同浓度(0、25、50和75 μM)姜黄素作用MG63细胞24 h后,CCK8法检测细胞体外增殖,TUNEL染色法检测细胞凋亡,Western blotting检测AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3等内源性凋亡途径相关蛋白表达水平.结果 CCK8实验结果显示在0-75μM范围内,50μM以上浓度的姜黄素能显著抑制MG63增殖,诱导细胞凋亡、p-AKT蛋白水平明显降低,而Bax蛋白及剪切的Caspase 3蛋白水平则显著增高.结论 姜黄素通过影响AKT/Bax-Bcl-2/Caspase 3途径诱导MG63细胞凋亡.
