中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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酿酒酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及其酶学性质
目的 克隆酿酒酵母甲酸脱氢酶(Formate dehydrogenase,FDH)基因,在大肠杆菌中表达、纯化重组蛋白,并进行酶学性质分析.方法 以酿酒酵母基因组DNA为模板,采用温度梯度PCR法扩增fdh基因,重叠PCR技术校正fdh中的移码突变,构建重组表达质粒pET-28a-fdh,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,分别采用37℃IPTG诱导、15℃IPTG诱导和37℃乳糖自诱导表达,镍金属螯合亲和层析纯化重组FDH蛋白,并分析重组FDH的酶学性质.结果 成功克隆了1 100 bp的fdb基因,碱基突变纠正了基因缺失和置换引起的编码错误;表达的重组FDH相对分子质量约为43 000,37℃乳糖诱导表达的重组FDH主要以可溶形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组蛋门比活为7.69 U/mg;重组FDH的适反应温度和pH分别为30℃和7.5,热稳定性较好,米氏常数分别为:KmNAD+=49μmol/L,Km甲酸=4.5 mmol/L.结论 已在大肠杆菌中表达并纯化了重组FDH蛋白,为进一步研究酿酒酵母FDH,利用其构建NAD(P)H辅酶再生体系奠定了基础.
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麻风分枝杆菌热休克蛋白65的表达、纯化及其多克隆抗血清的制备
目的 原核表达、纯化麻风分枝杆菌热休克蛋白65(Heat shock protein 65,HSP65),并制备其多克隆抗血清.方法 以含hsp65基因的真核表达质粒pCMV4.65为模板,PCR扩增hsp65基因,克隆入pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-hsp65,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经镍离子亲和层析柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清,Western blot分析重组蛋白的反应原性.结果 重组表达质粒pET-28a-hsp65经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约65 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度约为1.0 mg/ml;制备的HSP65多克隆抗血清效价可达1:12 800;重组蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功表达、纯化了麻风分枝杆菌重组HSP65蛋白,并制备了HSP65多克隆抗体,为进一步研究以HSP65为基础的亚单位疫苗和核酸疫苗奠定了基础.
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整合素连接激酶基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞增殖能力的影响及其机制
目的 构建整合素连接激酶(Integrin linked kinase,ILK)基因siRNA干扰质粒,探讨ILK基因沉默对膀胱癌BIU87细胞增殖能力及糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,GSK3)、β-环连蛋白(β-catenin)表达的影响.方法 构建针对人ILK基因的2个特异性siRNA表达质粒和1个无同源性的阴性对照质粒,在脂质体介导下转染膀胱癌BIU-87细胞,通过RT-PCR及Western blot检测ILK基因mRNA和蛋白的表达水平,筛选出1个干扰效果较强的质粒用于后续试验,Western blot检测细胞GSK3和β-catenin蛋白的表达,Am-blue法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期的分布.结果 经酶切和测序证明重组干扰质粒构建正确;稳定转染pGenesil-1 siRNA1和pGenesil-1 siRNA2质粒的BIU-87细胞ILK基因mRNA和蛋白表达水平较BIU-87细胞组(未转染组)分别下降了69%、52%和70%、55%,选择pGenesil-1 siRNA1为有效干扰序列;BIU-87siRNA1组GSK3的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别升高了41.87%和30.12%,β-catenin的表达水平较阴性对照组和BIU-87细胞组分别降低了38.67%和48.05%;BIU-87 siRNA1组细胞增殖活力明显下降;BIU-87 siRNA1组Go-G1期细胞比例明显增加,S期减少.结论 已成功构建ILK基因siRNA表达质粒,其可明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,机制可能为ILK基因通过介导GSK3、β-catenin信号分子促进膀胱癌BIU-87细胞的增殖.
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HIFU联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶的超声微泡治疗对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响
目的 观察高强度聚焦超声(High-intensity focused ultrasound,HIFU)联合包裹单纯疱疹病毒-胸苷激酶(Herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)的超声微泡(Ultrasound microbubble)治疗对兔VX2肝移植瘤中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及微血管密度(Microvascular density,MVD)的影响,并探讨其机制.方法 复制兔VX2肝移植瘤模型,建模4周后,将荷瘤兔随机分为4组:对照组(A组),HIFU组(B组),超声辐照载基因微泡组(C组)和HIFU联合超声辐照载基因微泡组(D组).治疗后两周观察肿瘤大小,免疫组化法检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达及MVD,Real-time PCR检测肿瘤组织中HIF-1α和VEGF基因mRNA的转录水平.结果 治疗后2周,B、C、D组肿瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达量,基因mRNA转录水平,MVD及肿瘤体积均明显低于A组(P＜0.05),且D组明显低于B组和C组(P＜0.05).结论 HIFU联合包裹HSV-TK基因的超声微泡治疗可抑制肿瘤生长及肿瘤血管新生,降低残余瘤区HIF-1α和VEGF基因的表达,提高HIFU的疗效.
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人端粒酶逆转录酶基因沉默对卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及其机制
目的 检测人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因沉默对卵巢癌细胞株A2780生长抑制和凋亡的影响,并探讨其与p53、p21基因表达激活的相关性.方法 设计合成针对hTERT基因的shRNA干扰质粒,与可表达荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建重组质粒pG1、pG2和阴性质粒pGCR,转染A2780细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot检测细胞hTERT、P53和P21蛋白的表达,TRAP法检测细胞的端粒酶活性,CCK-8法检测细胞的生长,流式细胞术分析细胞周期,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 酶切及测序结果证实重组质粒pG1、pG2和pGCR构建正确,质粒pG1和pG2转染可明显下调A2780细胞hTERT的表达水平和端粒酶活性,而上调细胞P53和P21蛋白的表达水平;沉默hTERT基因表达能够引起A2780细胞的生长抑制和G0-G1期细胞比例明显下降,并出现明显的细胞凋亡.结论 针对hTERT基因的shRNA干扰质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌A2780细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关.
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重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽对长波紫外线辐射的人皮肤成纤维细胞损伤的保护作用
目的 探讨重组人Ⅵ型胶原蛋白多肽(CP6)对长波紫外线(Ultraviolet A,UVA)辐射的人皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblast,HSF)损伤的保护作用.方法 MTT法检测不同剂量UVA辐射对HSF细胞活力的影响,并采用MTT法、Annexin V/PI流式细胞术和TUNEL法分别检测CP6对UVA辐射的HSF损伤的保护作用.结果 辐射强度为5和10 J/cm2的UVA可造成HSF活力降低;与UVA对照组相比,UVA+4 mg/ml CP6、UVA+6 mg/ml CP6和UVA+8 mg/ml CP6组A 570值均升高(P＜0.05),细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 紫外线可造成体外培养的HSF损伤,一定浓度的CP6可提高辐射细胞的存活率,减少细胞凋亡,具有保护作用,其机制可能与其抗氧化、增强细胞活力有关.
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重组半乳糖苷凝集素AAL的抗病毒活性分析
目的 分析重组半乳糖苷凝集素AAL抑制烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的侵染活性及与TMV衣壳蛋白(CP)的体外结合活性,为进一步明确AAL的生物学功能提供理论依据.方法 将含AAL基因的重组表达质粒pET-22baal转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni-NTA亲和层析纯化重组AAL.采用半叶法分析重组AAL抑制TMV的侵染活性;凝胶复性覆盖法分析重组AAL与TMV-CP的体外结合活性.结果 表达及纯化的重组AAL相对分子质量约为18 000;重组AAL具有与从杨树菇子实体中提取的AAL相近的抑制TMV侵染的活性,并可与TMV-CP体外结合.结论 重组AAL具有抗TMV的活性,其机理可能是通过与TMV-CP的互作抑制病毒侵染.
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中国西南地区慢性乙型肝炎自然病程中HBV基因型和定量血清学标记物的特征分析
目的 分析我国西南地区慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)病毒感染者自然病程中HBV基因分型和定量血清学生物标记物的特征.方法 收集我国西南地区140例CHB患者临床资料和全血标本,根据HBV感染自然病程(免疫耐受期、免疫清除期、低复制期和再活动期)分为4组,采用巢式PCR法进行HBV分子基因分型,化学发光微粒子免疫分析法定量检测HBV血清学标记物.结果 CHB患者的HBV基因型以B2和C2亚型为主,且B型患者病情更具进展性;血清HBsAg水平以免疫耐受期组高,低复制期组低(P＜0.01);相关性分析显示,HBsAg水平与HBV-DNA、HBeAg、患者年龄、AL及AST水平显著相关.结论 HBV基因分型和定量血清学标记物分析可能有助于预测HBV相关疾病的远期进展.
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双酶协同水解木薯淀粉水解液对小球藻生物量和油脂积累的影响
目的 以木薯淀粉水解液替代葡萄糖异养培养小球藻,观察其对小球藻生物量和油脂积累的影响.方法 采用双酶协同酶解法水解木薯淀粉,扫描电镜和X-射线衍射表征分析水解前后产物的物理特性;分别以精制葡萄糖和木薯淀粉水解液作为碳源,尿素作为氮源,采用异养模式培养小球藻;干重法测定藻细胞生物量,提取总脂,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析脂肪酸含量.结果 双酶协同水解木薯淀粉的佳工艺条件为:温度70℃,pH 4.0,时间3 h,酶添加量0.5%,底物浓度20 g/L,此时水解木薯淀粉转化成的葡萄糖含量为64.11%;表征分析显示,酶解发生在颗粒表面,整个淀粉颗粒仍能保持外形结构,酶水解作用未改变木薯淀粉的晶型;当培养基中葡萄糖浓度为40g/L时,小球藻生物量和总脂产量分别为9.12和4.39 g/L;当培养基中木薯淀粉水解液的葡萄糖浓度为30 g/L时,小球藻生物量和总脂产量分别为9.50和4.51 g/L,比以葡萄糖为碳源时的生物量和总脂产量高4.17%和2.73%.结论 木薯淀粉水解液作为碳源在异养培养提高微藻油脂产量和减少微藻生物柴油生产成本方面是一种比较理想的途径.
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ERK1/2及PI3K-Akt途径在雌激素促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制
目的 探讨ERK1/2、PI3K-Akt途径在雌激素17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)促进人甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制.方法 分别用E2、雌激素受体抑制剂ICI182780(ICI)、ERK1/2抑制剂PD98059(PD)和PI3K-Akt抑制剂LY294002(LY)单独或联合处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率,Western blot法检测细胞ERα、ERβ、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 E2可促进FRO细胞增殖及ERα、Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达;ICI可抑制Bcl-2蛋白的表达,对Bax蛋白的表达无明显影响;PD和LY可抑制E2对FRO细胞的上述作用.结论 E2可通过激活ERK1/2、PI3K-Akt通路,增加Bcl-2/Bax的比值,促进FRO细胞增殖.
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融合蛋白GST-hS100A2对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用
目的 探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用.方法 将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化.以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力.结果 融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力.结论 GST-hS 100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标.
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牛边缘无浆体膜表面蛋白5的原核表达及其免疫原性
目的 原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性.方法 pQE-MSP5/B121(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析.将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类.结果 表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P＜0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组.结论 已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础.
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三江白猪脂肪型脂肪酸结合蛋白基因l多态性及多态性片段的序列分析
目的 分析三江白猪脂肪型脂肪酸结合蛋白(Adipocyte fatty acid-binding protein,A-FABP)基因的多态性及其多态性片段序列.方法 采用PCR-RFLP检测100头三江白猪A-FABP基因第1内含子区的遗传多态性,并对多态性片段进行序列分析.结果 在Bsu36 Ⅰ-RFLP和Bsm Ⅰ-RFLP位点上均发现了多态性,基因型分别为DD、Dd、dd和Bb、bb型.等位基因D的频率为0.67,等位基因B的频率为0.21.在BsmⅠ-RFLP和Bsu36 Ⅰ-RFLP位点上,多态信息量(Polypeptide information content,PIC)分别为0.277和0.336,为中度多态(0.25＜PIC＜0.5).BsmⅠ-RFLP和Bsu36Ⅰ-RFLP变异的酶切位点分别在5006和4624位,均发生了C到G的突变,测序结果与GenBank中登录的序列(X16039)的同源性为99.6%.结论 在三江白猪AFABP基因的Bsm Ⅰ和Bsu36 Ⅰ酶切位点上存在多态性,多态性片段的碱基发生了突变.
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狂犬病暴露后免疫接种的Zagreb方案
目前,我国狂犬病暴露后接种疫苗者依从性较低,发病率较高,狂犬病的防治形势严峻.如果在保证有效性和安全性的前提下,采用减少接种次数的接种方案,能够提高狂犬病的防治效果,减轻医疗负担.研究发现,一些狂犬病疫苗采用Zagreb方案进行狂犬病暴露后接种,能够提供安全、高效的持久保护.本文对我国狂犬病暴露后预防的现状及疾病负担,Zagreb方案的研究、使用情况及其与被动免疫制剂同时使用的免疫效果等作一简要综述.
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胰高血糖素样肽-1类似物新药的研发进展
胰高血糖素样肽-1(Glueagon-like peptide-1,GLP-1)类似物具有独特的血糖浓度依赖性的控制血糖效果,为2型糖尿病患者提供了新的用药选择.新药研发多以人体内源性GLP-1及其天然类似物Exen出n-4为基础.本文对GLP-l和Exendin-4的结构、重要位点、改构策略、修饰方式、新剂型以及GLP-1类似物新药研发的进展作一综述.
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核转录因子NF-KB及其抑制剂的研究进展
核转录因子KB(Nuclearfactor-kappa B,NF-KB)存在于多种组织细胞中,具有广泛的生物学活性,参与多种生理、病理过程中的基因调控.通过抑制以NF-KB为核心的信号转导途径,可能为防治某些疾病开辟新途径.本文就NF-KB的生物学特性、激活及其抑制剂的研究进展作一综述.
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Bacillus megaterium NCIB8508产果糖基转移酶及低聚果糖的初步研究
果糖基转移酶(Fructosyltransferase,EC 2.4.1.9)也称β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,EC 2.4.1.26),其为一种水解酶,具有转移活力及广泛的受体活性,能以蔗糖、乳糖为原料,合成蔗果三糖、乳果糖等低聚糖.蔗果低聚糖又称为低聚果糖,是一种优良的食品配料,具有益生元生理功效.低聚果糖主要由蔗果二糖、蔗果三糖和蔗果四糖组成,一般以蔗糖为原料,利用从各种微牛物或植物中获得的酶,通过果糖基转移反应进行生产.
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b型流感嗜血杆菌发酵培养基的优化
目的 分析b型流感嗜血杆菌(Type b Haernophilus influenzae,Hib)不同培养基发酵液中蛋白质、核酸含量及不同培养基添加物对发酵产物的影响,优化Hib发酵培养基.方法 设计不同配方的Hib摇瓶培养基,经摇瓶培养,检测发酵液上清中的蛋白质及核酸含量,选择合适的基础培养基,并在此基础上进行发酵罐培养,检测不同添加物(磷酸盐、钠盐、金属离子等)对Hib多糖复合物收获量、菌体形态及发酵液颜色的影响,并发酵3批,进一步检测多糖复合物中蛋白质和核酸的含量.结果 培养基介质不同,其发酵上清液中的蛋白质和核酸含量也不同,2号培养基(主要成分为酸水解酪素粉和酵母浸粉)发酵液蛋白质和核酸含量较低且稳定;培养基中不同添加物对Hib菌体形态、发酵液颜色及多糖复合物的收获量、质量和性状均产生不同的影响,其中b培养基发酵液菌体形态、多糖复合物收获量及质量均较好;3批发酵培养液中分别约有7%～10%的蛋白质和34%～42%的核酸被沉淀至多糖复合物中.结论 选择2号培养基为Hib基础培养基,b培养基为发酵培养基,本实验为Hib疫苗培养基的优化和多糖抗原的纯化提供了实验依据.
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一种人巨细胞病毒中和抗体效价快速检测方法的建立
目的 建立一种人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)中和抗体效价检测方法.方法 系列稀释的待检样品与等体积HCMV混合,中和反应l h后,接种MRC-5细胞,37℃孵育过夜,依次加入HCMV anti-IE1单抗、Biotin-SP-Goat anti Mouse IgG、Peroxidase-Labeled Streptavidin及底物,对HCMV感染细胞的细胞核进行特异性染色和定位,采集显微图像,计数每孔中感染细胞数.采用Reed-Muench计算样品的中和效价.并对建立的方法进行精密性、耐用性和专属性验证.结果 感染HCMV的MRC-5细胞,出现典型的CPE,且其细胞核出现特异性着色颗粒,而未感染的细胞则未出现着色颗粒.该方法重复性检测的变异系数为3.26%,中间精密性检测的变异系数为1.05%;样品与等体积中和病毒液于37℃中和反应55、60和65 min,中和抗体效价差异无统计学意义(P＞0.05);水痘病毒感染的MRC-5细胞未出现特异性着色颗粒,10份不同类型的样品与MRC-5细胞共同孵育后,也未出现特异性着色颗粒.结论 已建立了一种HCMV中和抗体效价检测方法,该方法快速、客观,精密性高,耐用性好,专属性强,可用于血浆和IVIG中HCMV中和抗体效价的检测.
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肠炎沙门菌脂多糖抗原的制备及其生物学特性
目的 制备肠炎沙门菌(Sdmonella enteritidis,SE)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并鉴定其生物学特性.方法 分别用热酚水法和水饱和冷酚法提取SE LPS抗原,免疫BALB/c小鼠,制备LPS单克隆抗体.采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,考马斯亮蓝染色法测定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其分子结构,Western blot分析其反应原性,间接ELISA法分析其特异性.结果 热酚水法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为3.413 mg/ml和46μg/ml,水饱和冷酚法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为2.248 mg/ml和31 μg/ml;提取的LPS呈现明显的梯度型条带;制备的2株抗LPS单抗(1D3和2E5)均能与提取的LPS发生特异性反应;制备的LPS除了与伤寒沙门菌A～F多价血清发生交叉反应外,与其他各种肠道菌单价或多价血清均未发生反应.结论 热酚水法和水饱和冷酚法均可制备出活性、纯度均较好的LPS,但水饱和冷酚法操作简单,且提取的样品纯度高,特异性和反应原性良好,可用于肠炎沙门菌特异性抗原位点单抗的制备及免疫学检测.
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微量细胞病变法检测原料血浆中肠道病毒71型中和抗体水平
目的 应用微量细胞病变法检测原料血浆中肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体水平,以确定可供EV71免疫球蛋白生产用的原料血浆筛选标准.方法 建立检测EV71中和抗体效价的微量细胞病变法,检测3批质控血浆,验证该方法的重复性;并对1 238份原料血浆进行检测.结果 微量细胞病变法检测高(1:400)、低(1:50)效价质控血浆EV71中和抗体效价的变异系数分别为22.7%和27.3%;约40%的原料血浆中和抗体效价＜1:8,约60%的中和抗体效价≥1:8.结论 微量细胞病变法可用于原料血浆中EV71中和抗体的检测,约23%的献浆员的EV71中和抗体效价达1:32以上,可用于EV71免疫球蛋白的生产.
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重组单抗药物亲和层析病毒去除工艺验证
目的 对重组单抗药物亲和层析病毒去除工艺进行验证.方法 以甲型流感病毒H1N1亚型、单纯疱疹病毒1型和腺病毒5型作为指示病毒,分别使用新、旧rProtein A Sepharose Fast Flow(rProtein A SFF)层析介质考察重组抗狂犬病病毒单抗亲和层析步骤对病毒的去除效果.结果 经新、旧rProtein A SFF介质亲和层析后,3种指示病毒的滴度均下降4.0log10以上.结论 rProtein A SFF亲和层析工艺能有效去除重组单抗药物的潜在病毒污染.
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基于 ssDNA适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法的建立
目的 建立基于ssDNA适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞的检测方法.方法 利用Cell-SELEX(Systematic evolution of ligands bv exponential enrichment)技术获得针对K562细胞的高特异性ssDNA适配子,以双位点结合模式试验原理,结合生物素链霉亲和素磁珠技术,建立K562细胞的特异性检测方法,并验证其特异性及灵敏度.结果 利用建立的方法分别检测K562细胞、HL-60细胞及空白对照细胞,K562组与HL-60组和空白对照组荧光强度值差异有统计学意义(P＜0.01),HL-60组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05),表明该方法特异性强;该方法能检测出数量小于100个的K562细胞,检测阈值低,灵敏度高.结论 已成功建立了基于ssDNA适配子的检测K562细胞的新方法,为慢性粒细胞性白血病的分子诊断提供了一种新方法,也为分离K562细胞表面物质提供了新的思路.
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表达轮状病毒类病毒颗粒的重组毕赤酵母的制备及鉴定
目的 制备表达轮状病毒(Rotavirus,RV)类病毒颗粒(Virus-like particle,VLP)的重组巴斯德毕赤酵母.方法 优化并合成人RV VP2、VP6、VP4(P8血清型)和VP7(G1血清型)结构基因,分别转入改造的pPIC3.5K质粒,构建pPIC3.5K改-VP7-VP6-VP2-VP4共表达质粒,即重组G1P8质粒,电转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达.表达产物经Western blot鉴定,并经蔗糖密度梯度离心、分子筛层析和透射电镜观察,分析VLP的形成.结果 所构建的重组G1P8质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约41 000;发酵破菌液经分子筛纯化,在180 ml洗脱体积处出现的色谱峰经Western blot鉴定和透射电镜观察,为RV VLP形成的蛋白峰.结论 已成功构建了表达RV VLP的重组毕赤酵母菌株,并初步观察到了VLP,为开发新的RV疫苗奠定了基础.
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干扰素对ICR乳鼠感染肠道病毒71型的保护作用
目的 探讨干扰素(Interferon,IFN)对ICR乳鼠感染肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)的保护作用.方法 将FY23-EV71感染经重组人IFNα1b和IFNk1预处理的Vero和KMB17细胞,微量滴定法检测病毒滴度;取ICR乳鼠分为PBS对照组、EV71对照组和IFN保护组,临床观察2周,取乳鼠组织,观察病理学变化,并检测病毒含量.结果 两种IFN对KMB17细胞和Vero细胞感染EV71均有保护作用,且IFNα1b的保护作用优于IFNk1;IFN保护组乳鼠较EV71对照组乳鼠在临床表现、体重、病理变化和组织病毒含量等方面均表现出对EV71感染的保护作用.结论 IFN能抑制EV71的增殖,并对病毒致病性和组织嗜性有一定的影响.
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诺帝对CasKi细胞增殖及中心体Aurora-A和γ-tubulin基因表达的影响
目的 探讨诺帝对CasKi细胞增殖、细胞周期及中心体Aurora-A、γ-tubulin和P53蛋白表达的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的诺帝处理CasKi细胞,MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞周期,间接免疫荧光检测中心体的变化,RT-PCR检测细胞Aurora-A基因mRNA的表达,Western blot法检测细胞γ-tubulin、Aurora-A和P53蛋白的表达.结果 诺帝能明显抑制CasKi细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,且呈明显的剂量和时间依赖性;细胞中心体内γ-tubulin荧光信号明显减弱,Aurora-A基因mRNA的表达量及γ-tubulin和Aurora-A蛋白的表达量明显下降,而P53蛋白的表达量明显升高,且呈剂量依赖性.结论 诺帝可能通过下调Aurora-A,上调P53,发挥其抑制CasKi细胞增殖、阻滞细胞周期,并阻止中心体扩增,限制细胞无序增殖的作用.
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自体干细胞治疗病毒性肝炎的疗效
作者依据病毒性肝炎的特点,采用非特异性免疫治疗方法,采集自体干细胞,经体外培养,生物定向诱导,生成全新的免疫活性细胞,回植于患者体内,观察对病毒性肝炎的治疗效果,现将结果简要报道如下.
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可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A表达水平与妇科恶性肿瘤的相关性
目的 分析血清中可溶性主要组织相容性复合体I类链相关蛋白A(Soluble major histocompatibility complexclass Ⅰ chain-related protein A,sMICA)与妇科恶性肿瘤的相关性.方法 应用ELISA法检测59例确诊为妇科恶性肿瘤患者和98名健康对照者血清中sMICA的水平,应用ROC曲线对检测结果进行分析与评价.结果 病例组患者血清中sMlCA平均水平[(1.04±1.33)ng/ml]明显高于健康对照组[(0.29±0.30)ng/ml)],且差异有统计学意义(P＜0.000 1).ROC曲线下面积为0.816,sMICA的临床诊断界点为0.302ng/ml.结论 血清中sMICA水平与妇科恶性肿瘤的发生密切相关,有望作为临床妇科肿瘤诊断的一种新型肿瘤标志物.
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不同HBsAg酶联免疫检测试剂的血清型灵敏度
目的 比较不同HBsAg酶联免疫检测试剂(国产试剂:1号～4号,进口试剂:5号和6号)的分析灵敏度差异.方法 收集乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清,提取病毒核酸,PCR扩增HBV的S基因,测序后,根据其氨基酸序列确定血清型.应用雅培HBsAg检测试剂对各血清型样品进行定量检测,根据定量结果稀释至1～4 IU/ml,将各样品以1:2系列稀释至4个稀释度,分别利用6种HBsAg酶联免疫检测试剂双孔检测.将各试剂的cut-off值代入各样品,检测A值和浓度值的双对数曲线,计算各血清型样品的分析灵敏度,比较各试剂间与各血清型间的分析灵敏度差异.结果 不同血清型间的分析灵敏度差异无统计学意义(P＞0.05),不同试剂间的检测结果差异均有统计学意义(P＜0.01).国产4号试剂与进口5号和6号试剂间的分析灵敏度差异无统计学意义(P＞0.05),国产4号、进口5号和6号试剂的分析灵敏度高于国产1号和3号试剂,低于国产2号试剂.各试剂对不同血清型样品的分析灵敏度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 各血清型间HBsAg检测的分析灵敏度无差别,但不同试剂间的分析灵敏度有差别,应对其临床意义进一步研究.
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磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及其鉴定
目的 制备磺胺二甲嘧(Sulfadimidine,SM2)啶单克隆抗体,并对其进行鉴定.方法 经小鼠腹腔免疫SM2-BSA抗原,采用常规技术进行细胞融合,间接竞争ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法进行亚克隆,硫酸铵-辛酸法纯化抗体,并鉴定其抗体效价、杂交瘤细胞染色体数量、相对分子质量、抗体亚型、亲和力和特异性.结果 筛选到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3D7,细胞培养液上清和抗体效价分别为1:6.4×102和1:1.28×105;纯化后3D7抗体效价＞1:128 000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2对,分泌的抗体属于IgG1亚类,相对分子质量为164280,亲和常数为6.09×108M-1,与6种磺胺类药物及青霉素、庆大霉素和泰乐霉素交叉反应IC5o大于1 mg/ml,交叉反应率小于0.01%.结论 已成功制备了SM2单克隆抗体,该抗体能满足建立免疫学检测方法的需要.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
