中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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携带低氧诱导因子-1α及角质细胞生长因子的减毒沙门菌TPHK的构建及其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达
目的 构建携带低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)的减毒沙门菌TPHK,并检测其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达.方法 从质粒pIRES-KGF中PCR扩增获得KGF基因片段,经双酶切回收后,与pIRES-HIF质粒进行连接,获得双基因重组质粒pIRES-HIF-KGF,CaCl2法转化减毒沙门菌Ty21a,获得重组菌株TPHK.将TPHK菌液灌胃给予大鼠,109 cfu/(只·d),饲养7d后,置模拟海拔6 000 m的高原低氧舱,舱内连续饲养7d,采集大鼠胃及小肠组织,ELISA法检测HIF-1α及KGF的表达水平.结果 重组质粒pIRES-HIF-KGF及重组菌株TPHK经双酶切及测序鉴定证明构建正确.给予TPHK菌液后可明显提高低氧应激大鼠胃及肠组织中HIF-1α及KGF的表达水平(P＜0.001).结论 成功构建了携带HIF-1α及KGF的减毒沙门菌TPHK,且其可提高HIF-1α及KGF在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达.
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FlcA在巴西固氮螺菌Sp7中对细菌细胞壁厚度的影响
目的 评价FlcA在巴西固氮螺菌Sp7对细菌细胞壁厚度的影响.方法 将野生型巴西固氮螺菌Sp7 、flcA敲除株Sp7-flcA△及Tn5插入突变株Sp72001,分别在NB培养基及营养缺乏的絮凝培养基中培养,于透射电镜下观察细胞形态,测量细胞壁厚度,检测不同营养条件下FlcA对细菌外观和细胞壁厚度的影响.结果 野生型巴西固氮螺菌Sp7、flcA敲除株Sp7-flcA△及Tn5插入突变株Sp72001在NB培养基中的细胞壁厚度的中位数分别为(34.13±12.47)、(29.94±9.25)、(34.90±14.88) nm,差异无统计学意义(P＞0.05);而在絮凝培养基中培养的细胞壁厚度分别为(75.03±17.67)、(27.00±12.17)、(42.22±15.54) nm,两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.001);同时,每种菌株用两种不同培养基培养的细胞壁厚度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在絮凝条件下,敲除flcA的细菌细胞壁比野生型菌株的细胞壁明显变薄,FlcA可能参与了细菌细胞壁的发育.
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Musashi2对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响
目的 探讨Musashi2(Msi2)对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响.方法 将靶向Msi2基因的si-RNA1、siRNA2及阴性对照序列转染K562细胞,同时设空白对照组(未转染的K562细胞).实时荧光定量PCR法及Western blot法分别检测K562细胞中Msi2基因mRNA转录及蛋白的表达水平;经细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力;细胞黏附试验检测K562细胞体外黏附能力;Transwell试验检测K562细胞体外迁移及侵袭能力.结果 与阴性对照组及空白对照组比较,Msi2-1及Msi2-2组K562细胞中的Msi2基因mRNA转录及蛋白的表达水平显著下降(P＜0.05),体外黏附、迁移、侵袭能力明显减弱(P＜0.05).结论 抑制Msi2的表达可显著抑制白血病K562细胞的体外侵袭能力,本实验为进一步研究Msi2在白血病发生发展中的调控机制奠定了基础.
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重组人胃蛋白酶原Ⅰ在汉逊酵母中的分泌表达、纯化及其应用
目的 实现人胃蛋白酶原Ⅰ (pepsiongen Ⅰ,PGⅠ)在汉逊酵母表达系统中的高效分泌表达,并将纯化的重组PG Ⅰ蛋白制备成体外诊断试剂用校准品.方法 根据汉逊酵母遗传密码子偏爱性优化设计并合成PG Ⅰ基因,克隆至表达载体pRMHP2.1中,电转化汉逊酵母宿主菌26012,进行多次传代及稳定,筛选高水平分泌表达PG Ⅰ的菌株,并对该菌株的目的基因整合位置及整合拷贝数进行检测.应用200 L发酵罐大规模制备发酵培养液,通过Ni柱亲和层析方法纯化获得重组PG Ⅰ蛋白,经胶乳增强免疫比浊试剂盒进行PG Ⅰ蛋白的定值,应用类血清基质液制备100及50 μg/L浓度的PG Ⅰ校准品后检测稳定性.结果 重组表达质粒pRMHP2.1-PG Ⅰ经双酶切及测序鉴定证明构建正确.筛选获得的重组汉逊酵母菌株分泌表达的PG Ⅰ蛋白相对分子质量约45 000,表达量达100 mg/L以上,其外源基因整合于宿主rDNA位置,整合拷贝数不低于20个.纯化后的重组PGⅠ蛋白纯度为94.5％,配制后的PG Ⅰ校准品经4℃实时保存稳定性、37℃加速破坏性及4 ℃开盖保存稳定性试验,校准品定值的平均下降幅度均不超过10％.结论 应用汉逊酵母表达系统可高效分泌PG Ⅰ蛋白,该蛋白具有良好的稳定性,可用作体外诊断试剂的PG Ⅰ校准品.
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不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响
目的 探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,fHBP)表达的影响.方法 运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌fHBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至pET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平.结果 替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌fHBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍.结论 替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白表达的影响大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌fHBP表达量的研究工作提供了新思路.
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多糖结合疫苗中残余CDAP检测方法的建立及验证
目的 建立测定多糖结合疫苗中残余1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)的高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),为多糖结合疫苗的质量监控提供依据.方法 HPLC色谱条件:色谱柱:TSK gel ODS-100V(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-三氟乙酸(60∶40∶0.1);检测波长:300 nm;流速:1 ml/min;进样体积:15 μl;理论塔板数按CDAP峰面积计算不低于2 000.以峰面积对浓度进行线性回归,确定该方法的线性范围,并对该方法进行专属性、检测限、定量限、精密度、稳定性及准确度验证.结果 该方法检测CDAP专属性良好,低检测限和定量限分别为35 ng/ml和40 ng/ml;CDAP浓度在160 ～4 000 ng/ml范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 9;供试品和CDAP标准品连续6次进样,RSD分别为0.26％、0.57％;供试品在8h内稳定,平均加样回收率为94.5％,RSD为2.5％.结论 建立了测定多糖结合疫苗中残余CDAP含量的HPLC测定方法,该方法准确、简便、可靠,能有效控制多糖结合疫苗的质量.
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双波长微板赖氏法检测丙氨酸氨基转移酶方法的优化
目的 对检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)的双波长微板赖氏法进行优化.方法 采用正交试验优化双波长微板赖氏法的空白试剂(磷酸缓冲液或纯化水)和NaOH浓度(0.5、1.0、1.5、2.0 mol/L),考察方法的稳定性、线性拟合度、精密性和准确性.结果 以纯化水作空白,1.0 mol/L NaOH作终止溶液时,该方法具有很好的稳定性;线性拟合度好,R2=0.998 3＞0.990 0;检测38和57卡门单位的丙酮酸标准溶液的板内A492/630值的变异系数均＜10％,100％的样本检测结果在可接受范围内.结论 优化的检测ALT的双波长微板赖氏法具有很好的稳定性、线性、精密性和准确性,且通量高,适用于大规模检测.
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重组人凝血因子Ⅷ制备工艺中纳米膜的选择
目的 选择适用于重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ,rhFⅧ)制备工艺中的纳米膜.方法 将rhFⅧ收获液Ⅰ(含吐温80)和收获液Ⅱ(不含吐温80)经4种不同型号的滤器(Duropore(R)、Kleenpak(R)、Minisart(R)、Virosart(R) max)进行预过滤,检测样品活性回收率及蛋白回收率.用不同厂家的20 nm孔径纳米膜(Nanol～Nano7)对预过滤样品进行过滤,检测样品的活性回收率、蛋白回收率及过滤通量.以粒径约20 nm的细小病毒(minute virus of mice,MVM)作为指示病毒,对筛选出的纳米膜进行病毒去除验证.结果 确定佳预过滤膜为minisart(R),收获液Ⅰ和收获液Ⅱ的活性收获率分别为87.9％和99.1％,蛋白回收率分别为97.3％和98.2％.确定收获液Ⅰ的佳过滤纳米膜为Nano6,样品活性回收率为100％,蛋白回收率为92.6％,过滤通量为16.44 L/(m2·h);收获液Ⅱ的佳纳米膜为Nano7,样品活性回收率为98％,蛋白回收率为86％,过滤通量为26.54 L/(m2·h).Nano6和Nano7的病毒去除验证均合格.结论 筛选的纳米膜可用于rhFⅧ的产业化生产工艺中.
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抗血管内皮生成因子单克隆抗体中试纯化工艺的建立
目的 通过对小试条件优化,选择纯化抗血管内皮生成因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体生物类似药的佳条件,放大至中试规模,建立中试纯化工艺.方法 protein A亲和填料捕获收集液进行料液调节后,采用阳离子填料进行纯化.通过单因素试验,探讨protein A洗脱pH对收获液抗体质量的影响,以及阳离子洗脱pH、洗脱盐浓度和上样载量对收获液抗体质量的影响,分别经上述两步纯化获得抗VEGF单克隆抗体,再分别采用Protein A-HPLC检测单抗的浓度,高效毛细管电泳检测其纯度,SEC-HPLC检测其多聚体含量.结果 通过小试优化,protein A佳洗脱pH为3.8,阳离子层析佳操作条件为上样载量40 mg/ml,洗脱pH6.5,洗脱盐浓度(25 mmol/L PBS+100 mmol/L NaCl).按小试优化的条件放大至中试规模,无论是protein A还是阳离子层析均能够成功放大,终下游纯化产物纯度为(98.3±0.2)％,多聚体含量为(1.6±0.3)％,均优于参比制剂.结论 通过两步层析:亲和层析+阳离子层析的下游纯化组合方法得到的抗VEGF单克隆抗体的关键质量指标与参比制剂一致,为其进一步的工业放大提供了实验依据.
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人凝血因子Ⅷ工艺过程效价检测与分析
目的 测定人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ,FⅧ)生产过程中各关键质控点的FⅧ活性,计算各工序收率.方法 采用FⅧ效价测定法(一期法)测定原料血浆、冷沉淀溶解液、化学沉淀后溶液、S/D病毒灭活后溶液、层析纯化洗脱液、超滤后原液、冻干后样品及干热后样品中FⅧ的效价;Lowry法测定各样品的蛋白含量并计算比活;根据各步制品的效价和重量计算各工序FⅧ活性的收率.结果 10批血浆中FⅧ效价平均值为(0.62±0.17) IU/ml,比活平均值(0.011±0.003) IU/mg;FⅧ活性在各步工序中回收率为:离心冷沉淀工序73.78％,化学沉淀工序79.64％,S/D病毒灭活工序93.10％,离子交换层析工序64.96％,超滤工序94.20％,冻干工序90.33％,干热病毒灭活工序79.25％,整个工艺FⅧ的总活性回收率23.96％.按照血浆中FⅧ平均含量0.62 IU/ml计算,每升血浆可产出FⅧ149 IU.7批FⅧ的生产过程中,原液中FⅧ比活较冷沉淀平均提高了170倍.结论 获得了由原料血浆到FⅧ成品各关键工序的收率,为生产出高纯度、高质量的FⅧ提供了数据支持.
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双歧杆菌研究进展及应用前景
双歧杆菌是一种存在于人体内的益生菌,已成为人体健康的重要指标之一.作为微生态制剂,其对机体有营养、拮抗、通便、增强免疫力,抗肿瘤,抗衰老等多种益生功能,已成为微生态专业领域研究的热点.本文对双歧杆菌的生物学特性、生理功能及分子生物学检测方面国外研究进展作一综述,并对双歧杆菌未来的研究前景进行展望.
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人用H7N9禽流感疫苗的研究进展
2013年初,中国部分城市和地区出现了禽流感病毒H7N9感染人的病例,截止目前已有超过500人感染H7N9,感染者死亡率约为30％.WHO专家预测,禽流感病毒H7N9可能引起大流行.因此,人用H7N9禽流感疫苗的研发刻不容缓.目前已有多个H7N9疫苗备选株通过了WHO安全性评价,可用于疫苗研发.在此基础上,H7N9灭活疫苗、减毒活疫苗以及重组疫苗均已取得较好的研究结果.本文对人用H7N9禽流感疫苗的研究进展作一综述.
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阿仑膦酸钠作为口服佐剂对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响
目的 评价口服阿仑膦酸钠(alendronate,ALD)对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响.方法 分别用不同剂量的ALD(0.05、0.1、1 mg)和M.RCAg-1配伍后免疫BALB/c小鼠,M.RCAg-1蛋白经背部皮下注射免疫,20 μg/只,同时经灌胃给药ALD,共免疫3次,每次间隔14 d,于末次免疫后10 d经小鼠尾静脉采血,分离血清.ELISA法测定小鼠血清中抗M.RCAg-1蛋白的抗体滴度、IgG抗体分型及血清抗体对M.RCAg-1单表位的识别滴度;间接免疫荧光反应(IFA)检测小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度;ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞免疫水平.结果 0.05 mg ALD+ M.RCAg-1及0.1 mg ALD+ M.RCAg-1组小鼠血清中抗M.RCAg-1的抗体水平均可达1∶108;IgG抗体主要以IgG1为主;对M.RCAg-1的11个单个抗原表位(E1～E11)可全部识别;由各表位抗原(除E2外)诱导分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数明显高于分泌IFNγ的特异性淋巴细胞克隆数(P＜0.0001).0.1 mg ALD+M.RCAg-1组小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度明显高于0.05 mg ALD+M.RCAg-1组(P＜0.000 1).结论 ALD作为恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1的佐剂可显著提高其体液免疫及细胞免疫水平.
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重组金黄葡萄球菌肠毒素B及热休克蛋白65融合蛋白的原核表达及其在小鼠体内的体液免疫效果
目的 原核表达重组金黄葡萄球菌肠毒素B(recombinant Staphylococcus aureus enterotoxin B,rSEB)及热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65)融合蛋白rSEB-HSP65,并探讨其在小鼠体内的体液免疫效果.方法 采用分子生物学方法将修改过TCR Vβ结合区的rSEB基因与HSP65基因融合,构建重组表达质粒pET-28a-rSEB-HSP65,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经铜柱亲和层析纯化.将纯化蛋白经小鼠背部皮下注射,分别于第0、14、28天各免疫1次,分别于第14、28、42 d经小鼠尾静脉采血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-SEB的IgG水平.结果 重组表达质粒pET-28a-rSEB-HSP65经双酶切及PCR鉴定,证明构建正确.表达的重组蛋白rSEB-HSP65的相对分子质量约85 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占全菌总蛋白的40.81％,纯化蛋白纯度约为90％.各组免疫小鼠均可产生较高滴度抗体,且在第14、28及42天大部分含铝佐剂疫苗组的效价显著高于相同剂量的无铝佐剂疫苗组(P＜0.05),第42天时无铝佐剂低剂量疫苗组与含铝佐剂低剂疫苗量组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功在E.coli BL21(DE3)中表达了重组蛋白rSEB-HSP65,且可诱导小鼠产生较高的抗体水平.
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腮腺炎减毒活疫苗质控指标渗透压摩尔浓度限度标准的建立
注射剂中渗透压摩尔浓度的控制是药品质量控制的重要指标.近年来,随着对疫苗类生物制品渗透压摩尔浓度研究的深入,《中国药典》三部(2015版)中增加渗透压摩尔浓度为疫苗的质控项目,其标准由各生产企业根据各自的生产工艺制定符合要求的限度范围,并经批准后执行[1].本文通过测定多批次腮腺炎减毒活疫苗渗透压摩尔浓度[2],确定其限度标准,为制定腮腺炎减毒活疫苗的质量标准提供依据.
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蛋白酶体抑制剂MG132对HeLa细胞增殖的影响
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对HeLa细胞增殖的影响.方法 用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132(1、3、5、8和10 μmol/L)处理HeLa细胞,MTT法检测细胞存活情况,绘制细胞生长曲线,观察MG132对细胞增殖的影响.结果 MG132浓度为1μmol/L时,对HeLa细胞无抑制作用(P＞0.05);MG132浓度≥3μmol/L时,随着MG132浓度的增加,对HeLa细胞增殖的抑制作用逐渐增强(P＜0.05),且呈剂量依赖性,但当MG132浓度≥8 μmol/L时,对细胞的抑制作用不再增强.结论 MG132对HeLa细胞增殖具有抑制作用,本实验为研发基于泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome pathway,UPP)治疗宫颈癌的新药提供了实验依据.
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黄芪多糖对THP-1细胞前蛋白转化酶枯草溶菌素9表达的影响
目的 研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对人单核细胞THP-1前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)表达的影响,并初步探讨其机制.方法 利用佛波酯诱导THP-1细胞分化为THP-1源性巨噬细胞,采用CCK-8法检测不同浓度APS对THP-1源性巨噬细胞增殖活性的影响,确定APS作用于细胞的适浓度.将THP-1源性巨噬细胞分为5组:低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)组(30 μg/ml)、LDL(30 μg/ml)+APS (400 μg/ml)组、LDL(30 μg/ml)+过氧化物酶体增殖物激活受体β(peroxisome proliferator-activated receptor β/δ,PPAR-β/δ)激动剂GW0742(1μmol)组、LDL(30 μg/ml)+PPAR-β/δ抑制剂GSK0660(1 μmol)+APS(400 μg/ml)组和对照组(不加药物),加药处理24 h后,分别采用RT-PCR及Western blot法检测各组细胞PCSK9、低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)、PPAR-β/δ基因及蛋白的表达量.结果 APS作用于THP-1源性巨噬细胞的适浓度为400 μg/ml.LDL组细胞PCSK9基因及蛋白的表达量均较对照组明显升高(P＜0.01),LDL+ APS和LDL+ GW0742组较LDL组明显降低(P＜0.01),LDL+ GSK0660+ APS组较LDL+APS和LDL+ GW0742组明显升高(P＜0.01).LDL、LDL+ APS、LDL+ GW0742和LDL+ GSK0660+ APS组细胞LDLR基因的表达量较对照组均明显降低(P＜0.01);LDL组细胞LDLR蛋白的表达量较对照组降低(P＜0.01),LDL+ APS和LDL+ GW0742组较LDL组升高(P＜0.01),LDL+ GSK0660+ APS组较LDL+ APS和LDL+ GW0742组明显降低(P＜0.01).LDL+ APS和LDL+ GW0742组细胞PPAR-β/δ基因及蛋白的表达量较对照组均显著升高(P＜0.01),LDL+ GSK0660+ APS组较LDL+ APS和LDL+ GW0742组明显降低(P＜0.01).结论 APS可降低THP-1源性巨噬细胞PCSK9的表达,且PPAR-β/δ可能是其作用通路之一.
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天津市宁河区2005～2014年疑似预防接种异常反应监测结果分析
目的 分析天津市宁河区疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生特征,评价AEFI监测报告的运转状况,探讨提高监测质量的措施.方法 整理辖区2005 ～ 2014年报告收集的434例AEFI个案数据,采用描述性分析方法进行流行病学分析.结果 434例AEFI病例分布在全区19个接种单位所在区域,报告覆盖率100％;按AEFI监测分类,一般反应335例,异常反应93例,偶合症5例,心因性反应1例;报告的AEFI主要发生于接种疫苗后0～3d,占94.9％;434例AEFI中,男、女性别比为1.3∶1,0～1岁个案占病例数的70.7％;所报告的AEFI病例涉及22种疫苗,其中报告无细胞百白破、麻疹和乙肝(酵母)疫苗AEFI较多,分别占35.5％、12.7％、10.4％;AEFI临床分类以发热/红肿居首,占71.2％,其次是过敏性皮疹;报告的434例AEFI均已痊愈.结论 天津市宁河区AEFI监测系统运转良好,预防接种安全可靠.
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烟台市2010～2015年手足口病核酸检测及病原学分析
目的 对烟台市2010 ～ 2015年手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)病例进行核酸检测及病原学分析.方法 在2010 ～ 2015年烟台各县市区临床诊断的HFMD病例(包括门诊轻症病例和住院重症病例)中,每月采集5例首次就诊的普通病例及所有重症和死亡病例的咽拭子标本,RT-PCR法进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测.结果 2010 ～ 2015年烟台市HFMD病例年均报告发病率68.68/10万,重症病例占0.36％,男女性别比例为1.81∶1,发病以低于5岁幼儿为主,占91.22％,每年5～8月为发病高峰.病原谱构成差异有统计学意义(P＜0.01),其中EV71型769例,占30.95％,柯萨奇病毒A16型(coxsackievirusA16,CoxA16)814例,占32.76％,其他EV型902例,占36.30％.HFMD病原体以EV71和CoxA 16交替为主,其中重症患者的主要致病原为EV71(52.54％).结论 烟台市2010 ～ 2015年EV71、CoxA 16和其他EV交替为HFMD病例的主要病原体,HFMD的发病存在明显季节、性别、年龄差异,重症病例的主要致病原为EV71,应加强对该型别的监测,防控工作重点为托幼机构及小学低年级儿童.
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襄阳市2013～2015年狂犬病暴露人群流行病学特征分析
目的 分析襄阳市中医医院预防保健科及襄阳市疾病预防控制中心门诊2013 ～ 2015年就诊的狂犬病暴露者的流行病学特征.方法 应用描述流行病学方法对2013 ～ 2015年就诊的5 855例被动物致伤者资料进行整理和统计分析.对所有暴露者均根据卫生部《狂犬病暴露预防处置工作规范》进行局部伤口处理,并根据伤口分级注射狂犬病疫苗及狂犬病人免疫球蛋白.结果 2013 ～ 2015年5 855例暴露人群中,男女性别比例为0.98∶1;乡镇暴露人群例数(3年分别为1 018、1 085、1 287)及城区暴露人群例数(3年分别为624、787、1 054)均呈逐年上升趋势;春、夏季暴露人群例数(3 239例)多于秋、冬季(2 616例);0～ 10岁暴露人群所占比例高(3年分别为20.03％、28.9％、21.6％),其次为41 ～ 50岁人群(3年分别为22.3％、18.1％、19.3％).注射狂犬病疫苗及人免疫球蛋白后跟踪观察1年,无1例发病.结论 春夏季是犬伤高发季节,需加强对猫、狗等动物的管理及对儿童的看护.在伤后要及时规范彻底地处置伤口,根据伤口分级要足量使用狂犬病人免疫球蛋白及全程接种狂犬病疫苗,可有效预防狂犬病发生.
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呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备呋喃妥因代谢物AHD单克隆抗体,并进行鉴定.方法 利用对羧基苯甲醛合成1-氨基乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(4-CPAHD),通过活性脂法将4-CPAHD与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原4-CPAHD-BSA和包被抗原4-CPAHD-OVA,采用紫外分光光度法检测偶联是否成功.将人工合成抗原4-CPAHD-BSA免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选能稳定产生抗体的细胞株;通过间接ELISA法检测该细胞株分泌的单克隆抗体的效价、邻硝基-PAHD (2-NPAHD)对单克隆抗体的半数抑制浓度(IC50),并分析抗体的特异性.结果 偶联后4-CPAHD-BSA的大吸收峰有较明显的偏移,表明4-CPAHD与BSA偶联成功,平均偶联比为17.4∶1.制备的单克隆抗体的效价为1∶64 000,2-NPAHD对单克隆抗体的IC50为1.45 μg/L,单克隆抗体与同类抗生素及其代谢物无交叉反应.结论 制备的AHD单克隆抗体各项指标均较好,为呋喃妥因代谢物免疫检测试剂的研发奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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