中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脊髓灰质炎病毒Sabin2株结构蛋白VP1在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
目的 在昆虫杆状病毒表达系统中表达脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV)Sabin2株结构蛋白VP1.方法 从Sabin2疫苗原液中RT-PCR扩增PV结构蛋白VP1基因.克隆入pFastBac1质粒,转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E coli DH 10Bac,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP1,在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-VP1.将第2代rBac-VP1感染sf9细胞,间接免疫荧光法检测VP1蛋白的表达,并优化感染条件.结果 重组杆状病毒表达质粒.Bacmid-VP1转化子可扩增出3 203 bp的目的 片段;第2代rBac-VP1的滴度为6×107 pfu/ml,其感染的sf9细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,以不同MOI的rBac-VP1感染sf9细胞,VP1蛋白表达量差别不大,而在96 h内,随着感染时间的延长,VP1蛋白的表达量逐渐升高.结论 在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达了PV Sabin2株结构蛋白VP1,为脊髓灰质炎亚单位疫苗的研制奠定了基础.
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siRNA-NRP1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用
目的 探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小于扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用.方法 设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度.结果 酶切分析及测序鉴定证实目的 寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P＜0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P＜0.01).结论 通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,终抑制肿瘤的生长.
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H3N2SIV河南分离株NS1基因的克隆及原核表达
目的 克隆并原核表达猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)基因,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定基础.方法 从H3N2 SIV河南分离株中提取病毒RNA,RT-PCR扩增NS1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDSPAGE和Western blot进行鉴定.结果 测序结果表明,扩增的NSI基因与国内外多株SIV NSI基因序列同源性达98%以上,表达的重组蛋白相对分子质量约为27 000,能与SIV感染猪阳性血清发生特异性反应.结论 已成功克隆了H3N2 SIV河南分离株NSI基因,并在E.coli BL21(DE3)中表达了重组NS1蛋白,为建立人工免疫猪和自然感染猪的鉴别诊断方法奠定了基础.
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肺炎支原体黏附蛋白P1羧基末端的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)黏附蛋白P1羧基末端.方法 提取MP FH型基因组DNA,以其为模板,PCR扩增P1羧基末端基因,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot和ELISA鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a-MP-PIC经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约55 900,以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的47%;纯化的重组蛋白纯度达94%以上,浓度为3.77 mg/ml,可与支原体肺炎患者血清特异性反应,经3 000倍稀释后,仍可与支原体肺炎患者血清发生阳性反应.结论 原核表达并纯化了MP黏附蛋白P1羧基末端,为进一步研究MP的致病机制及研发诊断试剂和基因疫苗奠定了基础.
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羊布氏菌SOD基因重组酿酒酵母菌株的构建及鉴定
目的 构建羊布氏菌超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)基因重组酿酒酵母菌株,并进行鉴定.方法 PCR扩增羊布氏菌16M株SOD基因,与psos载体连接,构建重组表达质粒psos-SOD,转化酿酒酵母菌cdc25H,并进行PCR鉴定、表型验证、自激活及定位情况检验.结果 重组真核表达质粒psos-SOD经双酶切和测序证明构建正确;重组酵母菌经PCR可扩增出525 bp的SOD基因条带,其表型正常,无自激活宿主菌的作用,表达蛋白定位正确.结论 已成功构建了羊布氏菌SOD基因重组酿酒酵母菌株,为研究布氏菌致病的分子机制奠定了基础.
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抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制.方法 将pGenesil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1 阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80 μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化.结果 抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调.结论 抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡.
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靶向人原癌基因c-fos的shRNA表达质粒的构建及鉴定
目的 构建靶向人原癌基因c-los的短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)重组真核表达质粒,并进行鉴定.方法 构建靶向人c-fos基因的shRNA重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos,转染乳腺癌MCF-7细胞,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中c-fos基因mRNA的表达.结果 重组表达质粒Psilencer 3.1-sic-fos经PCR、双酶切及测序证明构建正确;重组表达质粒在mRNA水平明显抑制了MCF-7细胞c-fos基因的表达(P＜0.05).结论 已成功构建了人c-fos基因shRNA重组表达质粒,为深入研究c-fos基因在肿瘤发生、发展过程中的作用提供了技术手段.
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Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响及其机制
目的 探讨Hedgehog信号转导通路对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 侵袭转移的影响及其机制.方法 应用Hedgehog信号转导通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)处理MDA-MB-231 细胞,Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞体外侵袭和转移能力;明胶酶谱实验检测细胞MMP-9和MMP-2的活性;Western blot法检测细胞P-c-Jun和MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法检测细胞Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达.结果 经Cyclopamine处理后,MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力明显下降;MMP-9的活性降低;P-c-Jun和MMP-9蛋白表达降低;Gli1、c-jun和MMP-9基因mRNA的表达水平下降.结论 MDA-MB-231细胞存在Hedgehog信号转导通路的激活;活化的Hedgehog信号转导通路可通过上调c-jun和MMP-9的表达,促进肿瘤细胞的侵袭转移.
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重组腺病毒pAd-sTGF-β R Ⅱ对大鼠心肌梗死后心室重塑的影响
目的 研究携带TGF-β R Ⅱ胞外区基因的重组腺病毒pAd-sTGF-β RⅡ对大鼠心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后心室重塑的影响,并探讨其可能的机制.方法 结扎SD大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠MI模型,将模型大鼠随机分为MI组(生理盐水)、pAd-sTGF-β R Ⅱ组(pAd-sTGF-β RⅡ病毒上清液)、空载体组(pAdTrack),并另设假手术组.4周后,取冰冻切片,荧光显微镜下观察sTGF-β R Ⅱ在大鼠心肌组织中的表达;HE染色观察心肌组织结构;天狼猩红-饱和苦味酸染色法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;RT-PCR法检测凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA的表达.结果 与MI组比较,pAd-sTGF-β R Ⅱ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平均明显降低(P＜0.01),α-SMA阳性细胞数亦明显减少,bcl-2基因mRNA表达水平增加(P＜0.01).与假手术组比较,pAd-sTGF-β RⅡ组大鼠心肌组织总Ⅰ、Ⅲ型胶原、MMP-9蛋白和bax基因mRNA的表达水平明显升高(P＜0.01),bcl-2基因mRNA的表达水平无明显差异(P＞0.05).结论 重组腺病毒pAd-sTGF-β R Ⅱ干预可改善大鼠MI后心室重塑,其机制可能是通过抑制TGF-β介导的心肌纤维化和心肌细胞凋亡实现的.
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GalR2基因真核表达质粒的构建及鉴定
目的 构建GaIR2基因真核表达质粒,并在HeLa细胞中表达.方法 从C57BL/6J小鼠海马组织中提取总RNA,RT-PCR法扩增GalR2基因,克隆至pEGFP-C1载体中,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2.将重组表达质粒转染至HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位,RT-PCR和Western blot分别检测GalR2基因的转录及表达.结果 从C57BL/6J小鼠海马组织扩增出1 116 bp的GalR2基因;重组表达质粒pEGFP-GalR2经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;转染细胞融合基因的表达产物定位于细胞核,GalR2基因在mRNA及蛋白水平上均有表达.结论 已成功构建了GalR2基因真核表达质粒pEGFP-GalR2,并在HeLa细胞中成功表达了GalR2蛋自,为进一步探讨GalR2的生物学活性奠定了基础,也为寻找抗抑郁药物的靶点提供了新的思路.
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TIMP1基因重组真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达
目的 构建3种TIMP1基因重组真核表达质粒,并在人乳腺癌MCF-7细胞中表达.方法 将TIMP1基因分别插入3种真核表达载体pcDNA3.1(+)、pVAX Ⅰ和pEGFP-C1,构建3种重组表达质粒pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAX Ⅰ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1,转染MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot法检测TIMP1基因在MCF-7细胞中的表达.结果 3种重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组表达质粒pEGFP-C1-TIMP1转染MCF-7细胞48 h后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,而pcDNA3.1(+)-TIMP1和pVAX Ⅰ-TIMP1转染的细胞则观察不到绿色荧光;在转染的MCF-7细胞中,TIMP1基因mRNA转录水平和蛋白表达水平从高到低依次为pcDNA3.1(+)-TIMP1、pVAX Ⅰ-TIMP1和pEGFP-C1-TIMP1.结论 已成功构建了3种TIMP1基因重组真核表达质粒,其在MCF-7细胞中的表达量有差异.
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病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ在毕赤酵母中的表达及其抗HIV-1活性
目的 在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性.方法 通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达.表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot 鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用.结果 重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P＜0.05),其IC50值为1.35 ng/ml.结论 已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性.
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PPARα/NO在血管紧张素Ⅳ诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)/一氧化氮(Nitric oxide,NO)信号通路在血管紧张素Ⅳ(Angiotensin Ⅳ,Ang Ⅳ)诱导血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用.方法 体外培养大鼠VSMCs,将细胞分为6组:对照组(只加培养基)、Ang Ⅳ组、Ang Ⅳ+非诺贝特(Fenofibrate,FF)组、Ang Ⅳ+FF+MK 886组、Ang Ⅳ+L-arg组和Ang Ⅳ+L-arg+L-NAME组,MTT法检测细胞的增殖;BCA法测定细胞总蛋白含量;Real-time PCR法检测细胞中PPARα和eNOS基因mRNA的表达;Western blot法检测细胞中PPARα蛋白的表达;比色法和硝酸还原法分别检测细胞培养上清中一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,eNOS)活性和NO浓度.结果 0.1 nmol/L Ang Ⅳ可诱导VSMCs增殖,增加细胞总蛋白含量,PPARα mRNA及蛋白表达明显降低,eNOS基因mRNA表达减少,细胞上清中NOS活性及NO浓度降低;FF和L-arg可逆转AngⅣ的上述作用,并被相应的阻断剂(MK 886和L-NAME)抑制.结论 Ang Ⅳ诱导VSMCs的增殖作用可能与PPARα/NO信号通路受损有关.
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猪附红细胞体感染小鼠血清IgG和IgE水平的变化
目的 建立猪附红细胞体感染BALB/c小鼠模型,检测小鼠血清IgG和IgE水平的变化.方法 将未感染猪附红细胞体的BALB/c小鼠随机分为3组∶A组注射猪附红细胞体阳性血液,B组注射猪附红细胞体阴性血液,C组注射生理盐水.采用镜检和PCR法检测各组小鼠猪附红细胞体感染情况;ELISA法检测各组小鼠血清IgG和IgE水平.结果 镜检观察A组小鼠血液中可见猪附红细胞体.PCR结果显示,A组小鼠血液中可扩增出602 bp的特异性条带.在接种后第7和19天,3组小鼠血清IgG水平差异无统计学意义(P＞0.05),至第10、13和16天,A组小鼠血清IgG水平明显高于B组和C组(P＜0.01),B组明显高于C组(P＜0.01);在接种后第10、13和22天,3组小鼠血清IgE水平差异无统计学意义(P＞0.05),至第16和19天,A组小鼠血清IgE水平明显高于B组和C组(P＜0.01),B组明显高于C组(P＜0.01).结论 已成功建立猪附红细胞体感染小鼠模型,IgG和IgE在小鼠抗猪附红细胞体免疫应答中发挥重要作用.
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Spiegelmer NOX1255对LHRH-PE40与HeLa细胞上LHRH受体结合的抑制作用
目的 探讨Spiegelmer NOX 1255对促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素40(Luteinizing hormone-releasing hormone-Pseudomonas aeruginosa exotoxin 40,LHRH-PE40)与HeLa细胞上促黄体激素释放激素(LHRH)受体结合的抑制作用.方法 分别将25μmol/L的LHRH-PE40、PEA和PFAO与HeLa细胞共孵育24 h后,观察细胞的形态学变化;用Spiegelmer NOX 1255特异性结合LHRH-PFA0上的LHRH,光学显微镜观察Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PFAO的抑制作用,ELISA检测Spiegelmer NOX 1255对LHRH-PE40与LHRH受体结合的抑制作用.结果 LHRH-PE40和PEA可直接杀伤HeLa细胞,而PE40不能对HeLa细胞产生毒性作用;Spiegelmer NOX 1255能够结合LHRH-PE40中的LHRH,抑制LHRH-PFAO与LHRH受体的结合及PE40的毒性作用.结论 LHRH-PFAO对HeLa细胞的毒性作用是通过细胞表面的LHRH受体产生的;Spiegelmer NOX 1255可阻断LHRH-PF40与HeLa细胞表面LHRH受体的结合.
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白芨多糖对小鼠免疫功能的调节作用
目的 探讨白芨多糖(Bletilla striata polysaccharide,BSPS)对小鼠免疫功能的调节作用.方法 提取白芨多糖并测定其含量.通过腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg·d),连续3 d.建立免疫功能低下小鼠模型,观察灌服不同剂量白芨多糖溶液对免疫功能低下小鼠碳廓清试验的影响;采用MTT法测定白芨多糖对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果 提取的3批白芨多糖中的多糖含量分别为93.490%、92.280%和92.629%.在碳廓清试验中,与模型组相比,500 mg/(kg·d)白芨多糖能显著提高免疫抑制小鼠的吞噬指数,其作用与100 mg/(kg·d)的左旋咪唑大致相当.淋巴细胞增殖试验中,1、3、10 μg/ml的白芨多糖均可显著提升Con A诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的能力,白芨多糖终浓度为3μg/ml时,提升作用为显著;3 μg/ml白芨多糖可显著提升LPS诱导的小鼠B淋巴细胞增殖的能力.结论 白芨多糖对小鼠的非特异性免疫和特异性免疫反应均有促进作用.
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基于微RNAs的抗病毒治疗的研究进展
微RNAs(MicroRNAs,miRNAs)是一类保守的内源性单链小分子非编码RNA,长约22个核苷酸,主要与靶mRNA碱基互补配对使其翻译抑制或降解,在转录后水平对蛋白编码基因发挥负调控作用,已在许多高等真核生物及某些病毒中得到鉴定.miRNA通路在生理及疾病状态下均参与基因表达调节,而且miRNA在宿主-病毒相互作用中具有重要作用,因此,人类及病毒编码的miRNA必将成为抗病毒治疗的重要靶标.本文对miRNA的生物发生及作用机制、宿主与病毒在miRNA水平的相瓦作用、宿主及病毒编码的miRNA在抗病毒治疗中的作用作一综述.
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Nrf2/ARE转导通路在中枢神经系统疾病中作用的研究进展
转录因子红细胞系-2p45相关因子2(Nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,其与抗氧化反应元件(Antioxidant response element,ARE)结合,调控第Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因的表达,是机体抵抗内外氧化应激的关键保护性通路.中枢神经系统氧耗高,多不饱和脂肪酸含量丰富,对氧化应激极为敏感,Nrf2/ARE转导通路在中枢神经系统中作用的研究越来越受到重视.本文对Nrfd2/ARE转导通路的调控机制及其在中枢神经系统疾病中作用的新研究进展作一综述.
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常见腹泻性消化道传染病口服疫苗的研究进展
常见腹泻性消化道传染病通常由细菌、病毒等病原体引起,一般通过水源和食物经消化道传播,引起暴发性流行,尤其易引起婴幼儿发病和死亡.本文对常见细菌性和病毒性致腹泻消化道传染病口服疫苗的研究进展作一综述.
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响应面法优化桑黄菌发酵培养基
目的 利用响应面法对桑黄菌液体发酵培养基进行优化,提高胞外多糖产量.方法 应用Plaekett-Burman设计和响应面法,对桑黄菌液体发酵培养基成分及其含量进行优化.用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(蛋白胨、酵母粉和磷酸二氢钾)与多糖产量之间的函数关系.用终优化的配方进行3次验证实验.结果 通过快速"登高法"对3个显著因素进行寻优,培养基中3因素佳浓度为:蛋白胨1 4.72 g/L、酵母粉11.04 g/L、磷酸二氢钾1.472 g/L,胞外多糖产量高可达7.04 g/L.3次验证实验所测得的多糖产量分别为6.92、6.86和7.04 g/L,平均值为6.94 g/L,与预测结果基本一致.结论 优化的桑黄菌发酵培养基可显著提高胞外多糖产量.
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重组靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌中试发酵工艺的建立
目的 建立重组靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺.方法 优化EGF-F4orf4工程菌二级种子培养时间,按5%的比例接种于20 L发酵培养基,设定培养阶段温度为30℃,诱导表达阶段温度为28℃,在发酵过程中通过调节搅拌速度、通气量和罐压等措施使DO维持在20%-35%,采用三步发酵法进行发酵,优化诱导pH值及诱导时间,并在已优化的工艺条件下,稳定发酵3批.结果 确定二级种子的培养时间为15 h,适诱导pH值为6.0,适诱导时间为48 h;中试发酵3批,菌体A600均值达(327.67±17.96),菌体湿重均值达(308.33±9.07)g/L,EGF-E4orf4表达量均值为(200.00±5.57)mg/L.结论 已初步建立了重组EGF-E4orf4毕赤酵母工程菌的中试发酵工艺,为EGF-E4orf4的产业化奠定了基础.
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高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞条件的优化
目的 优化高通量生物反应器Tubespin培养CHO细胞的条件,提高蛋白表达量.方法 采用Tubespin生物反应器在不同转速(160、180和200 r/min)和培养体积(5、10、20和35 ml)条件下振荡悬浮培养CHO细胞,测定不同条件下的气体交换速率、细胞密度、细胞活力及蛋白相对表达量,优化细胞培养条件.在佳培养条件下,向培养基中分别添加30、60和90 mmol/L氯化钠,观察不同浓度氯化钠对细胞密度、细胞活力、摄氧率、溶氧及重组蛋白表达的影响.结果 Tubespin具有良好的气体交换速率,可满足高密度细胞培养的需要;经优化,细胞培养佳条件为:摇床转速180 r/min,培养体积10 ml,此时细胞生长密度高,较快进入稳定期进行重组蛋白的表达.细胞培养72 h时向培养基中添加60 mmol/L氯化钠,能使重组蛋白的表达量提高1倍.结论 优化了Tubespin培养CHO细胞的条件和氯化钠诱导浓度,提高了重组蛋白的产量,为大规模发酵生产奠定了基础.
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红色链霉菌发酵产红霉素培养基的响应面优化
目的 采用响应面法对红色链霉菌(Streptomyces erythreus)发酵产红霉素培养基进行优化.方法 利用DesignExpert 8的Min Run Res Ⅳ多因子两水平设计,对发酵培养基的有机碳源和氮源的组成进行因素的效应评价,利用峭攀登搜索法为响应面分析的中心组合设计确定中心区,利用响应而分析得到优化培养基组成.结果 淀粉、糊精、豆饼粉和玉米浆因素对红霉素产量有显著影响,其佳组成为:淀粉5.24%.糊精1.43%,豆饼粉4.56%.玉米浆1.47%.结论 利用响应面法已成功优化了红霉素发酵培养基组成的碳源和氮源,摇瓶发酵产红霉素化学效价为6 192 U/ml.
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重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较
目的 比较重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)滴鼻及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答及其持续时间.方法 将90只BALB/c小鼠随机分为3组:滴鼻组用20μg rTgHSPT0滴鼻,皮下组用80μg rTgHSPT0皮下免疫,间隔2周加强免疫1次,对照组不处理.末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组分别处死小鼠5只,ELISA法检测血清IgG水平、鼻咽和肠冲洗液sIgA水平;分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数.结果 滴鼻组小鼠血清IgG水平第1-6周高于皮下组和对照组,其中第3-5周差异有统计学意义(P＜0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠第3-5周,皮下组小鼠第4-5周鼻咽冲洗液sIgA水平显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠小肠冲洗液sIgA水平第1-6周显著高于皮下组和对照组(P均＜0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠脾淋巴细胞数量第2-4周显著高于对照组(P＜0.000 1),3-4周显著高于皮下组(P＜0.001);皮下组小鼠第2-4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠IEL数量第1-6周显著高于对照组(P＜0.000 1),第3～4周显著高于皮下组(P＜0.000 1),皮下组小鼠第1-5周显著高于对照组(P＜0.05).结论 rTgHSP70皮下和滴鼻免疫小鼠均能诱导有效的黏膜和系统免疫应答,且滴鼻免疫的效果优于皮下免疫,是rTgHSP70更为有效的免疫途径.
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皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)的稳定性
目的 观察皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)的稳定性.方法 将皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)分别于37、25和2-8℃放置不同时间,检测疫苗的体外相对效力(Relative potency,RP)、pH值和纯度的变化,观察其稳定性.结果 疫苗于37℃放置45 d,RP略有下降,但仍在合格范围内;25℃放置6个月,RP和pH值均无明显变化;2-8℃放置12个月,RP、pH值和纯度均无明显变化.结论 皮卡重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)稳定性良好.
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重组人尿激酶原纯化工艺病毒去除效果验证
目的 验证重组人尿激酶原(Prourokinase,Pro-uk)纯化工艺的病毒去除效果.方法 采用模拟Pro-uk纯化工艺中阴离子和阳离子交换层析的scale-down模型,以水泡性口炎病毒(Vesivular stomatitis virus,VSV)、脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)、人单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type-1,HSV-1)为指示病毒.采用细胞病变法评价离子交换层析的病毒去除效果.结果 阴离子交换层析对脂包膜病毒VSV和HSV-1的去除能力强,对无脂包膜病毒EMCV的去除能力较弱;阳离子交换层析对VSV和HSV-1的去除能力较弱,对EMCV的去除能力较强.经离子交换层析纯化后,3种指示病毒的累计去除效率均＞99.99%(大于4 log10).结论 Pro-uk纯化工艺中的离子交换层析是控制病毒安全性的有效步骤,其去除效率达到了<生物组织提取制品和真核细胞表达制品的病毒安全性评价技术审评一般原则>规定的安全标准.
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国产麻腮风联合减毒活疫苗的安全性及免疫原性
目的 观察国产麻腮风联合减毒活疫苗(MMR)的安全性及免疫原性.方法 选择8-15月龄未接种过麻疹、腮腺炎、风疹疫苗的健康儿童共765名,随机分别接种上海生物制品研究所生产的麻疹、腮腺炎(高滴度)、风疹联合减毒活疫苗(沪高MMR)和麻疹、腮腺炎(低滴度)、风疹联合减毒活疫苗(沪低MMR)及国产对照MMR疫苗,观察接种后的安全性及免疫原性.采用ELISA法检测血清中的麻疹、腮腺炎、风疹的IgG抗体水平.结果 765名观察对象全身反应率为18.95%,局部反应率低于0.4%.3组疫苗免疫后麻疹抗体阳转率分别为97.34%、97.1 8%和95.04%,腮腺炎抗体阳转率分别为94.68%、89.83%和76.60%,风疹抗体阳转率分别为94.68%、94.35%和91.49%.3组疫苗免疫后麻疹抗体几何平均浓度(GMC)分别为6 221.57、5 766.34和5 054.75 mIU/ml,抗体平均增长约200倍;腮腺炎抗体GMC分别为381.33、308.46和207.01 U/ml,抗体平均增长分别约26、22和17倍;风疹抗体GMC分别为81.77、77.61和81.49 IU/ml,抗体平均增长约23倍.各组间麻疹和风疹抗体阳转率、GMC和平均增长倍数差异均无统计学意义(P＞0.05),腮腺炎沪高、低MMR与对照MMR疫苗差异均有统计学意义(P＜0.05),但沪高、低MMR疫苗间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种MMR疫苗的安全性良好,免疫原性麻疹和风疹相似,腮腺炎存在差异,抗体阳转率上海生物制品研究所生产的高滴度腮腺炎MMR疫苗与低滴度腮腺炎MMR疫苗差异无统计学意义.
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弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品的制备
目的 制备弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品.方法 收集弓形虫IgG抗体阳性血清和正常人血清,用6个厂家的弓形虫IgG检测试剂盒进行筛选,并采用染色试验和凝集试验予以确证,采用弓形虫IgG抗体国际标准品对阳性血清进行标定.参考品经协作标定,确定低检出量标准.结果 确定此套血清国家参考品共24份,其中阳性参考品9份(包括低检出量参考品1份),阴性参考品15份.结论 制备了第1套弓形虫IgG抗体检测试剂用血清国家参考品,并建立了相应的质量标准,已被国家有关部门批准正式使用.
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抗人血小板单克隆抗体的制备及其临床应用
目的 制备抗人血小板单克隆抗体,并应用于临床血小板抗体的筛检及血小板交叉配型.方法 以人O型血小板为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将NS-1细胞与免疫小鼠脾细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法克隆,并对阳性杂交瘤细胞及其分泌的单克隆抗体进行鉴定;采用亲和层析法纯化单抗,用该单抗建立周相凝集法,检测临床患者血清样本,并与德国欧蒙公司的同类试剂盒(MASPAT)检测结果进行比较.结果 获得1株抗人血小板杂交瘤细胞株1C1,其分泌的单抗性能稳定,可特异性针对人血小板糖蛋白Ib/IX,细胞稳定传代8个月以上,培养上清效价大于为1:106,37℃的稳定性可持续35 d,纯化后的抗体效价可达1:108.建立的固相凝集法对50例临床血清样本的检测结果与同类试剂盒(MASPAT)一致.结论 已制备了抗人血小板单克隆抗体,为其进一步临床应用奠定了基础.
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国产第3代与进口第4代HIV检测试剂的比较
目的 比较国产第3代与进口第4代HIV试剂检测结果的差异,为试剂的选择及设定血液报废标准提供参考.方法 按试剂使用说明书的要求操作,用国产第3代(A和B)和进口第4代(C)HIV检测试剂对35 487份常规血液样本进行检测,试剂使用前用中国药品生物制品检定所血清盘进行质量评价.结果 3种试剂均符合质量要求;2个国产试剂和1个进口试剂s/co≥1.0的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),s/co≥0.8的检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 从血液安全考虑,建议国产第3代HIV检测试剂将s/co≥0.5作为血液报废标准,进口第4代试剂将s/co≥0.8作为血液报废标准.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
