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桑黄菌原生质体的分离与再生研究
目的:研究桑黄菌原生质体分离与再生的条件.方法:研究以菌丝体为材料的不同酶解条件对桑黄菌原生质体产量的影响及不同再生条件对桑黄菌原生质体再生率的影响.结果:在1.5%溶壁酶+0.5%崩溃酶的混合酶系、酶解温度为30 ℃、菌龄为8 d、蔗糖为酶解渗透压稳定剂、酶解时间为3 h的条件下,桑黄菌原生质体分离产量较高,但兼顾菌丝量和原生质体的再生,较适宜的菌龄为10 d,较适宜的酶解渗透压稳定剂是甘露醇.另外用甘露醇作为培养基渗透压稳定剂、用加桑枝的马铃薯葡萄糖再生培养基进行再生,桑黄菌原生质体再生率较高.结论:在综合考虑桑黄菌原生质体的产量与再生的前提下,获得了使桑黄菌原生质体产量与再生率均较高的试验条件.
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桑黄菌发酵过程中酶活性的变化
目的 研究桑黄菌发酵过程中酶活性的变化及其和胞外多糖量的关系.方法 在发酵过程中测定原始菌株和变异菌株的羧甲基纤维素酶、滤纸酶、木质素过氧化物酶(LiP)、锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Lac)活性变化及培养基中胞外多糖量变化.结果 2菌株的羧甲基纤维素酶和滤纸酶的活性变化呈单峰曲线,分别在第4天和第6天达到峰值;原始菌株和变异菌株的LiP、锰过氧化物酶和漆酶活性的变化呈双峰曲线,且原始菌株和变异菌株LiP的酶促反应米氏常数(Km)分别为25.96、27.07 μg/mL; MnP的K(m分别为13.28、13.49mmol/mL; Lac的Km分别为0.12、0.21 mmol/mL;培养基中多糖量前期快速下降,10d后趋于稳定.结论 桑黄菌发酵时能产生较全面的分解木质素和纤维素的酶系统,原始菌株和变异菌株产生的LiP和MnP为同种酶,Lac为同功酶.桑黄菌胞外酶活性变化和培养基中胞外多糖量变化有一定关系.
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响应面法优化桑黄菌发酵培养基
目的 利用响应面法对桑黄菌液体发酵培养基进行优化,提高胞外多糖产量.方法 应用Plaekett-Burman设计和响应面法,对桑黄菌液体发酵培养基成分及其含量进行优化.用Design-Expert软件对实验数据进行多元回归分析,并建立3种主要因素(蛋白胨、酵母粉和磷酸二氢钾)与多糖产量之间的函数关系.用终优化的配方进行3次验证实验.结果 通过快速"登高法"对3个显著因素进行寻优,培养基中3因素佳浓度为:蛋白胨1 4.72 g/L、酵母粉11.04 g/L、磷酸二氢钾1.472 g/L,胞外多糖产量高可达7.04 g/L.3次验证实验所测得的多糖产量分别为6.92、6.86和7.04 g/L,平均值为6.94 g/L,与预测结果基本一致.结论 优化的桑黄菌发酵培养基可显著提高胞外多糖产量.
