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大黄总蒽醌含药血清对LoVo的AQP4表达的调节效应
目的:探讨大黄总蒽醌含药血清对体外培养LoVo细胞的水通道蛋白基因(AQP4)表达的调节效应.方法:16只SD大鼠随机分为正常组,大黄总蒽醌低、中、高剂量组(1.4,2.5,4.5 g·kg~(-1)·d~(-1),灌胃),7 d后麻醉处死取血制备含药血清.体外培养LoVo细胞并给予不同剂量大黄总蒽醌含药血清培养液24 h,采用Western blot及半定量RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达.结果:结果显示,4.5 g·kg~(-1)·d~(-1)大黄总蒽醌含药血清培养液可抑制LoVo细胞的AQP4蛋白及mRNA的表达(P＜0.01).结论:大黄总蒽醌含药血清可抑制LoVo细胞AQP4基因转录与翻译,提示大黄的泻下作用可能与调节AQP4表达有关.
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大黄蒽醌衍生物对大鼠结肠及LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应
目的 探讨大黄总蒽醌对SD大鼠的泻下效应及对结肠水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达的影响及大黄酸、大黄素对体外培养LoVo细胞AQP4的调节效应.方法 雄性SD大鼠24只随机分为正常对照组、大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组,分别予大黄总蒽醌悬液或蒸馏水灌胃5天,观察大鼠结肠粪便含水量:应用Western blot、RT-PCR方法观察其近端结肠AQP4表达的变化.体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸/大黄素含药培养液作用24 h及大黄酸/大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间作用,采用Westernblot及RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达.结果 大黄总蒽醌泻下剂量组及高剂量组作用后,大鼠结肠内粪便含水量明显增加,同时其近端结肠AQP4表达降低且表现为量效关系.大黄酸/大黄素能够显著下调体外培养LoVo细胞的AQP4蛋白及mRNA表达,且表现为剂量-效应及时间-效应关系.结论 大黄总蒽醌在发挥泻下作用的同时,能够有效下调大鼠近端结肠AQP4的表达;大黄酸、大黄素可抑制体外培养Lo-Vo细胞AQP4的表达,可能是大黄泻下作用机制之一.
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VEGFR2siRNA腺病毒载体的构建及其对人结肠癌细胞系的影响
目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与Xba Ⅰ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterless pShuttle vector,得到pShuttlemU6pro-VEGFR2siRNA;将pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA;利用得到的重组腺病毒感染人结肠癌LOVO细胞系,观察VEGFR2 siRNA对结肠癌细胞VEGFR2表达的影响.采用West-blot检测感染前后VEGFR2蛋白表达水平的变化.结果:成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,该载体显著抑制LOVO细胞中VEGFR2的蛋白表达水平(P＜0.01).结论:构建的Adeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA腺病毒能有效地抑制LOVO细胞中VEGFR2表达,从而为肿瘤的基因治疗打下基础,也为肿瘤血管抑制治疗提供了新思路.
关键词： 腺病毒载体 血管内皮细胞生长因子受体2 LoVo细胞系 结肠癌 -
大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应
目的 探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin 2,AQP2)表达的调节效应.方法 体外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24 h处理及大黄素含药培养液(20 mg/L)不同时间处理,采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达.结果 AQP2表达于LoVo细胞的细胞膜,且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性.进一步的Western blotting证实,不同质量浓度大黄素含药培养液均可抑制AQP2蛋白的表达,药物质量浓度愈大,AQP2蛋白的表达愈低,其中大黄素20mg/L组及40mg/L组AQP2蛋白表达显著性降低;大黄素作用3、6 h组,AQP2蛋白表达上升,但与对照组比较,无显著差异;作用12、24、48 h组,AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势.半定量RT-PCR结果显示,随着大黄素质量浓度的增加,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势;在时间-效应方面,随着用药时间的延长,AQP2 mRNA表达呈进行性下降趋势.结论 大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译,这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大黄的泻下作用有关.
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LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用
目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用.方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性.将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用.结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2.103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68.49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制.结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用.
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大黄酸对LoVo细胞水通道蛋白4表达的调节效应
目的:探讨大黄酸对体外培养LoVo细胞水通道蛋白4(AQP4)的调节效应.方法:体外培养LoVo细胞并予不同浓度大黄酸含药培养液处理24 h及大黄酸含药培养液(20 mg/L)处理不同时间,其中不同浓度分为大黄酸高(40 mg/L)、中(20 mg/L)、低(10 mg/L)剂量组和正常对照组;不同作用时间分为3、6、12、24、48 h组和正常对照组.采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP4蛋白表达定位,采用Western blotting及半定量RT-PCR检测AQP4蛋白及mRNA的表达.结果:AQP4主要表达于LoVo细胞的细胞膜上,在细胞浆也有少量表达.随着大黄酸用药剂量增加,AQP4表达持续下降;大黄酸低剂量组与正常对照组比较,AQP4表达下降但无显著性差异;大黄酸中、高剂量组,AQP4表达则呈显著性下降.在时间效应方面,大黄酸3、6 h组AQP4表达无显著性下降,但在12、24、48 h组则显著下降;同时研究发现,AQP4表达下降的程度与大黄酸剂量及大黄酸作用时间均存在相关性.结论:大黄酸可抑制LoVo细胞AQP4基因转录与翻译,提示大黄酸对AQP4表达的调节可能与大黄的泻下作用有关.
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大黄酚对LoVo细胞AQP2表达的调节效应
目的:探讨大黄酚对体外培养LoVo细胞AQP2表达的调节效应.方法:体外培养LoVo细胞,随机分为对照组,大黄酚10,20,40 mg/L不同浓度组.间接免疫荧光定性LoVo细胞AQP2表达,Western Blot、半定量RT-PCR检测药物处理24 h后AQP2蛋白及mRNA表达.体外培养LoVo细胞后,随机又将细胞分为对照组,大黄酚40 mg/L组,PKA激动剂8-Bromo-cAMP 10 mg/L组,大黄酚40 mg/L+PKA激动剂8-Bromo-cAMP 10 mg/L组.非放射性法检测药物处理24 h后LoVo细胞PKA的活件水平.结果:AQP2表达于LoVo细胞膜,药物处理24 h后,大黄酚20,40 mg/L组AQP2蛋白分别为(0.64±0.08),(0.46±0.09)显著低于对照组(0.83±0.05),(P＜0.01);AQP2 mRNA分别为(0.50±0.12),(0.39±0.09),显著低于对照组(0.73±0.08),(P＜0.01).40 mg/L大黄酚组PKA活性(0.54±0.08)显著低于对照组(0.78±0.10),(P＜0.05).结论:大黄酚可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译.大黄酚对AQP2表达的调节效应可能与大黄泻下作用有关,其可能是通过PKA信号通路调节AQP2的表达.
