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LHRH-PE40识别结肠癌细胞膜表面蛋白的研究
目的探讨人结肠癌细胞系Lovo及人白血病细胞系Jurket细胞膜表面蛋白能否识别LHRH-PE40及是否存在竞争性抑制.方法将结肠癌细胞系Lovo及白血病细胞系Jurket制备成细胞膜,利用125I标记的LHRH-PE40与两种细胞膜进行放射性配基分析,与LHRH进行竞争结合分析.结果人结肠癌细胞系Lovo的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争;而白血病细胞系Jurket未见配基-受体特异性结合.其中LHRH-PE40与Lovo细胞的亲和力:Kd=10.6±2.33 nmol/L,容量Bmax=345±7.59 pmol/mg.结论LHRH是结肠癌免疫治疗的有效靶点,LHRH-PE40对过度表达LHRH受体的结肠癌具有特异性杀伤作用,而对无LHRH表达的肿瘤无杀伤作用,对于药物的临床应用有着指导意义.
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冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白与不同细胞受体结合竞争试验
目的 为了验证重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRH-PE40)对癌细胞的靶向性,对LHRH-PE40进行125I标记,并进行了与多种细胞受体结合试验和竞争试验.为该药物的导向治疗提供可靠的依据.方法 利用体外细胞培养方法将人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo,人T细胞淋巴瘤Hut102,人白血病细胞系Jurket,狗肾细胞系DK 5种细胞系,分别大量培养至单层,收获细胞,破碎,制备细胞膜.同时制备鼠肺组织的细胞膜进行试验.利用125I标记的LHRH-PE40与不同细胞膜进行放射性配基结合分析,以及与LHRH竞争结合分析.确定这些细胞表面有无LHRH受体,并用Scatchard作图方法计算出其亲和常数及大结合量.结果 小鼠肺组织细胞膜、人T细胞淋巴瘤Hut102、人白血病细胞系Jurket、狗肾细胞系DK未见配基-受体特异性结合及竞争结果;而人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo与LHRH-PE40的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争特性.其中LHRH-PE40与Lovo细胞的Kd=10.6±2.33 nmol/L,Bmax=345±7.59 pmol/mg ;与BGC-823细胞的Kd=37.82±1.42 nmol/L,Bmax=475±17.86 pmol/mg.结论 受试的6种细胞膜蛋白中正常细胞(鼠肺、狗肾)和两种肿瘤细胞(Jurket、Hut102)表面无LHRH受体表达.而结肠癌和胃癌肿瘤细胞表面存在LHRH受体的表达.另外本试验还证实了重组毒素LHRH-PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力.
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LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响
目的:探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性,观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡.方法:用125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性;MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基-受体特异性结合,LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0.24 mg·L-1,0.1～10.0 mg·L-1LHRH-PE40作用于Lovo细胞,其凋亡明显(P＜0.01). 结论:结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体,LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用.
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LHRH-PE40的免疫原性及其抗体对细胞毒作用的影响
目的观察连续静脉注射重组毒素LHRH-PE40所引起的家兔抗LHRH-PE40抗体产生的规律以及该抗体对细胞毒作用的影响.方法将家兔分为3组,第1组隔日连续静脉注射LHRH-PE40,第2组用弗氏佐剂乳化的LHRH-PE40皮下注射为阳性对照组,第3组静脉注射人血白蛋白为阴性对照组.用ELISA检测血清中的抗体水平,XTT检测LHRH-PE40与血清中和后对Hela细胞的细胞毒作用.结果抗LHRH-PE40抗体水平随静脉注射时间的延长而升高,8 d可以检测到抗LHRH-PE40抗体,在24 d基本达到高水平.血清中和后LHRH-PE40对Hela细胞的半数抑制量较阴性血清提高1～2倍,而阳性血清较阴性血清提高14倍.结论连续静脉注射LHRH-PE40产生较低水平的抗体,这种抗体未造成LHRH-PE40对Hela细胞半数抑制量产生严重影响,这为临床连续使用LHRH-PE40提供了依据.
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LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用
目的研究LHRH-PE40对LOVO细胞的靶向杀伤作用.方法用XTT检测LHRH-PE40对LOVO细胞的体外细胞毒性.将LOVO细胞移植于裸鼠,测定静脉注射LHRH-PE40对体内肿瘤细胞生长的抑制作用.结果LHRH-PE40对LOVO细胞细胞毒作用的半数抑制浓度为2.103μg/ml,在裸鼠肿瘤模型中,LHRH-PE40剂量为150μg/kg时抑瘤率为68.49%,这种细胞毒性作用可以被LHRH(或LHRH类似物)特异性抑制.结论在体内外LHRH-PE40对LOVO细胞具有很强的细胞毒作用,其机制是LHRH-PE40通过与癌细胞膜上的LHRH受体特异结合发挥细胞杀伤作用.
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重组毒素LHRH-PE40与A549细胞表面LHRH受体结合的特异性及其细胞毒性
LHRH-PE40是通过融合蛋白技术产生的,由绿脓杆菌外毒素A（PE40）基因和促黄体激素释放激素（LHRH）基因重组后在大肠杆菌中表达出的一种嵌合蛋白.大量实验表明,某些肿瘤细胞表面过多表达LHRH受体,而相应的正常组织和细胞表面几乎测不到该受体.借助这个特点,将嵌合蛋白内的PE40由LHRH靶向地与LHRH受体结合后,通过内吞作用导入细胞, 从而达到用绿脓杆菌外毒素A在细胞内杀灭LHRH受体阳性表达的肿瘤细胞的作用,同时对正常细胞较少或无影响.
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重组蛋白LHRH-PE40对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究重组蛋白LHRH-PE40对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用体外培养的人卵巢癌SK细胞进行细胞增殖抑制实验,在培养液中加入不同浓度的LHRH-PE40,于加药后1～4天用酶标分析仪分析LHRH-PE40对卵巢癌细胞增殖的影响.用免疫组化方法及流式细胞仪检测LHRH-PE40对卵巢癌SK细胞的增殖相关因子Ki-67、抗凋亡基因Bcl-2及细胞周期的影响.结果:LHRH-PE40可以有效抑制体外培养卵巢癌SK细胞的生长,呈时间和浓度的依赖性.佳作用时间为加药后48～72小时.在药物浓度为1μg/ml的条件下,用药后癌细胞中的Ki-67(用药前73％,用药后25％)及Bcl-2(用药前92％,用药后43％)阳性细胞比率均下降.凋亡细胞比率增加(由用药前0.8％增加到用药后3.6％).在0.5 μg/ml浓度下,细胞的G0/G1期细胞比率增加；S期细胞比率增加,而G2/M期减少.结论:LHRH-PE40可杀灭卵巢癌细胞及促进卵巢癌细胞凋亡.
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LHRH-PE40与正常肝组织和肝癌细胞表面LHRH受体结合特性的比较研究
目的探讨重组促性腺激素释放激素-绿脓杆菌外毒素40(LHRH-PE40)与正常肝脏组织和肝癌细胞表面受体结合特性的差异.方法用放射性配基结合分析的方法测定亲和力和受体容量.结果 LHRH-PE40与肝癌细胞HEPG细胞的亲和力Kd为(0.43±0.12) nmol*L-1,受体容量Bmax为(0.37±0.15 )nmol*mg-1,与正常肝脏组织未见结合.结论重组毒素LHRH-PE40和肝癌细胞HEPG的表面受体有较强的结合,而和正常肝脏组织无特异性结合.
