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中医脏腑水液代谢功能失调与水通道蛋白2关系的研究概述
经过多年的研究,目前对水通道蛋白2(aquaporin-2,AQP-2)的蛋白质基本结构、功能及作用机理方面都有较清晰的了解.但关于中医脏腑水液代谢功能失调与AQP-2关系的研究较少.从动物实验、临床观察、药物治疗等方面,都证实中医各脏腑的水液失调均可直接或间接引起AQP-2基因表达的变化,主要表现在相关组织或尿中APQ-2浓度的变化,并都存在相关性联系.这些为中医相关脏腑水液功能失调的深入研究提供现代医学基础.
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甘草对芫花抗小鼠肝癌腹水作用的影响
目的:观察不同配比甘草-芫花煎剂对肝癌腹水模型小鼠的干预影响,并探讨其作用机制.方法:取昆明种雄性小鼠135只,随机分为正常组、模型组、芫花单煎组、芫花-甘草(1∶0.25,1∶0.5,1∶1,1∶2,1∶4)组和甘草单煎组.除正常组外,其他组小鼠腹腔均接种肝癌腹水瘤细胞系H22,并分别灌胃给药,正常组和模型组给予等容积生理盐水.12d后分别测量各组小鼠的腹水量、腹围和体重及肝肾指数,蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定肾脏组织中水通道蛋白2(AQP2)和肾加压素受体(V2R)的蛋白表达,生化法测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),尿素氮(BUN)和尿肌酐(Cr)的水平.结果:与正常组比较,模型组小鼠的腹水量、腹围、体重、肝指数及血清中ALT,AST,BUN,Cr水平均显著升高(P＜0.01),肾指数显著降低(P＜0.01),AQP2,V2R蛋白的表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,芫花单煎组和芫花-甘草1∶0.5,1∶1和1∶2组均能显著降低小鼠的腹水量和体重(P＜0.05,P＜0.01);芫花单煎组和芫花-甘草1∶1组同时能显著降低小鼠的腹围(P＜0.05,P ＜0.01),降低AQP2,V2R蛋白的表达(P ＜0.05,P＜0.01).与芫花单煎组比较,芫花-甘草1∶1组能显著降低小鼠的腹水量、腹围和体重(P＜0.05,P＜0.01),降低AQP2,V2R的表达(P＜0.05),芫花-甘草1∶4组则使其显著升高(P＜0.05.P＜0.01).结论:不同比例甘草的配伍能增强或抵消芫花抗小鼠肝癌腹水的作用,且相关变化可能与其有效调节了肾组织内的AQP2和V2R蛋白表达有关.
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六味地黄汤对肾阴虚大鼠水通道蛋白2的影响
目的:从尿液浓缩机制方面研究六味地黄汤的滋阴作用机制.方法:36只成年雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组和中药组.采用放免法测定血浆血管升压素(AVP)水平、免疫组化法检测肾髓质水通道蛋白2(AQP2)表达.结果:与正常对照组相比,模型组大鼠的体重、尿量明显减少,AVP水平上升,AQP2表达增加;中药组上述指标恢复到接近正常组或正常组水平.结论:肾阴虚时机体尿液浓缩机制亢进,六味地黄汤的滋阴作用与其抑制亢进的尿液浓缩机制有关.
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苓桂术甘汤合泽泻汤对膜迷路积水豚鼠前庭膜AQP2表达的影响
目的:观察豚鼠内耳膜迷路积水程度与内耳前庭膜水通道蛋白2 (AQP2)的表达,探讨苓桂术甘汤合泽泻汤治疗梅尼埃病的部分作用机制.方法:腹腔注射醋酸去氨加压素建立豚鼠膜迷路积水模型,分为中药治疗组和积水模型组,并设空白对照组.各组相应处理7d后,观察每组豚鼠膜迷路积水程度及内耳前庭膜AQP2的表达.结果:积水模型组总积水率与空白对照组相比明显升高(P＜0.01),中药治疗组总积水率比积水模型组有所降低(P＜0.01).积水模型组前庭膜AQP2的表达与空白对照组相比增强(P＜0.01),中药治疗组前庭膜AQP2的表达相较积水模型组减弱(P＜0.01).结论:苓桂术甘汤合泽泻汤能够减轻膜迷路积水模型豚鼠的积水程度,其作用机制之一可能与下调前庭膜上AQP2的表达有关.
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针刺百会穴对膜迷路积水模型大鼠耳蜗形态及水通道蛋白2表达的影响
目的:观察针刺百会对膜迷路积水模型大鼠耳蜗形态及水通道蛋白2 (AQP2)表达的影响,并探讨其可能的调节机制.方法:将大鼠随机分为空白组、模型组、西药组及针刺组.除外空白组,其余各组大鼠采用腹腔注射血管加压素的方法复制膜迷路积水模型.空白组与模型组采取与针刺组相同的固定;西药组予托伐普坦溶液灌胃;针刺组予针刺百会治疗.各治疗组均每日治疗1次,连续治疗10d.干预结束后,行HE染色观察耳蜗积水程度,计算蜗管横截面积与蜗管加前庭阶横截面积之和的比值(R值);免疫组化检测耳蜗血管纹AQP2表达.结果:模型组R值较空白组显著增高(P＜0.01);针刺组R值较模型组显著降低(P＜0.01),与西药组比较,差异无统计学意义.模型组AQP2表达较空白组显著增强(P＜0.01);针刺组AQP2表达较模型组显著减弱(P＜0.05),与西药组比较,差异无统计学意义.结论:针刺百会可减轻大鼠膜迷路积水,其作用机制可能与下调耳蜗AQP2的表达有关.
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慢性肾功能衰竭微炎症状态、HSP70、 AQP2与中医证型关系研究
目的:探讨慢性肾衰竭(CRF)微炎症状态、热休克蛋白70( HSP70)、水通道蛋白2( AQP2)的表达及其与中医证型的关系.方法:选择CRF2、3期患者60例,按辨证标准分为脾肾阳虚证26例,气阴两虚证19例,湿热证15例.另设健康对照组15例.测定外周血单个核细胞NF-κB活性、血清HSP70、IL-6、尿AQP2含量,分析其与中医证型的相关性.结果:(①)CRF患者NF-κB、IL-6、HSP70、AQP2含量均较对照组显著升高(P＜0.05或P＜0.01)；②3个证型组中,湿热证组N F-κB显著高于其它两组(P＜0.01或P＜0.05)；HSP70含量呈湿热证组＞气阴两虚证组＞脾肾阳虚证组(P＜0.05或P＜0.01)；尿AQP2含量为脾肾阳虚证组＞湿热证组＞气阴两虚证组(P＜0.05或P＜0.01).结论:①)CRF患者普遍存在微炎症状态及水代谢紊乱,但湿热证者微炎症状态明显,NF-κB、IL-6与CRF浊毒内盛有关；AQP2与CRF水湿相关.②CRF患者机体肾保护机制已启动,HSP70与CRF患者正气盛衰相关.
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肺气虚证模型大鼠肾组织水通道蛋白2表达的变化
目的 观察肺气虚证模型大鼠肾组织水通道蛋白2(AQP2)表达的变化,为机体水液代谢过程中肺肾相关理论提供依据.方法 20只大鼠随机分为模型组和对照组,用免疫组化、Western blot、RT-PCR方法测定肾组织AQP2蛋白及mRNA表达.结果 肺气虚证模型组肾组织AQP2表达增加,AQP2 mRNA表达增高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P>0.01).结论 肺气虚证模型大鼠肾组织AQP2表达增强,提示肺主"通调水道"功能可能与影响肾小管AQP2表达有关.
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大黄总蒽醌对大鼠远端结肠AQP2表达的调节效应
目的:探讨大黄总蒽醌对大鼠远端结肠水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)表达的调节作用.方法:32只SD大鼠随机分为正常组,大黄总葸醌低、中、高剂量组(0.14,2.5,4.5 g·kg-1·d-1,灌胃),正常组给予生理盐水灌胃.大鼠5 d后麻醉处死,取全段结肠内粪便,干燥后检测粪便含水量;留取远端结肠,运用免疫组织化学、Western blot及RT-PCR检测远端结肠AQP2表达的变化.结果:低剂量组大鼠没有出现泻下现象,其远端结肠AQP2表达无显著差异;中剂量组(2.5 g·kg-1·d-1)大鼠出现软便及稀便,高剂量组(4.5 g·kg-1·d-1)大鼠出现稀便和水样便,粪便含水量显著性增加,其远端结肠AQP2表达亦显著降低(P<0.01).结论:大黄总蒽醌能抑制大鼠远端结肠AQP2的转录与翻译、增加粪便的含水量,这可能是其泻下效应产生的机制之一.
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真武汤对NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用研究
该实验探讨真武汤对体外培养NRK-52E细胞AQP2相关的“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用,初步揭示真武汤调节水分转运平衡的部分分子机制.取SPF级雄性SD大鼠48只,随机分成8组,每组6只.分别给予蒸馏水或真武汤22.68 g·kg-1·d-1(按生药量计)灌胃,心脏采血,3 000 r·min-1离心分离制备含药血清.然后体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E细胞,给予上述不同给药天数和日给药次数制备的真武汤含药血清和血管加压素类似物1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素(1-desamino-8-D-arginine vasopressin,dDAVP)进行干预,采用实时无标记动态细胞分析技术(Real time cell analysis,RTCA)检测细胞增殖情况;免疫荧光法检测细胞中V2R,AQP2蛋白的分布情况;Western blot法检测V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量;Real-time PCR法检测AQP2mRNA水平.结果显示,与正常大鼠血清组比较,每天给药2次连续给药7d制备的真武汤含药血清作用于NRK-52E细胞约24h,可显著上调其AQP2的mRNA水平(P＜0.01);显著增加V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量(P ＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);该方法制备的真武汤含药血清与dDAVP合用干预NRK-52E细胞后,可显著增加V2R,p-AQP2和AQP2的蛋白表达量(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01).以上实验结果表明,真武汤含药血清能增加NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路中V2R,PKA及AQP2的蛋白表达量,与dDAVP合用存在协同效应,提示“AVP-V2R-AQP2”通路可能是真武汤调节水分转运平衡的分子机制之一.
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益心泰颗粒对慢性心力衰竭兔肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达的影响
目的 探讨益心泰颗粒对慢性心力衰竭兔肾髓质AQP2蛋白及mRNA的影响.方法 采用阿霉素耳缘静脉注射建立慢性心衰兔模型,将造模成功的家兔分为模型组、益心泰低(2.1 g/kg)、中(4.2 g/kg)、高剂量(8.4 g/kg)组和呋塞米组(2 mg/kg),另设正常对照组;模型组和正常对照组灌胃同等体积的生理盐水,1次/天,共干预4周.观察尿量、观察肾髓质病理形态学变化,并检测肾髓质AQP2 m RNA及其蛋白表达量.结果 与正常对照组比较,模型组尿量减少(P＜0.01),肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达显著增加(P＜0.01).与模型组比较,各给药组尿量增加(P＜0.01),肾髓质AQP2蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01).与益心泰低剂量组比较,益心泰中、高剂量组尿量增加(P＜0.01),AQP2 mRNA表达明显降低(P＜0.01),益心泰高剂量组AQP2蛋白表达明显降低(P＜0.01).肾髓质病理变化以模型组为明显,各给药组均有不同程度的减轻,以益心泰中、高剂量组较为明显.结论 益心泰颗粒可能通过下调肾髓质AQP2 mRNA及其蛋白表达水平,增加尿量,发挥利水,从而改善慢性心力衰竭.
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益气活血利水法治疗心力衰竭水潴留机制的实验研究
目的：探讨益气活血利水法治疗心衰水潴留的机制。方法：选择健康Wistar大鼠，应用腹腔注射阿霉素，造成心衰大鼠模型，然后分模型组、西药对照组，中药对照组、中药高剂量、中剂量、低剂量6组，给药8周后观察各组大鼠服药后血管加压素（AVP）浓度；血管加压素V2受体（V2R）、水通道蛋白2（AQP-2）蛋白表达及mRNA表达情况。结果：益气活血利水法可降低心衰大鼠血浆中AVP浓度，减弱肾组织V2R、AQP-2蛋白表达，降低V2R、AQP2、mRNA相对表达量。结论：益气活血利水法通过作用于精氨酸血管加压素-V2受体-水通道蛋白2系统的各个环节而起到改善水液潴留的作用。
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湿阻中焦证模型胃肠水通道蛋白2的表达分布谱及平胃散的干预作用
目的 探讨平胃散对湿阻中焦证模型的干预作用机制.方法 SD大鼠50只,随机分空白组、空白给药组、模型组、平胃散组和自然恢复组,每组10只.模拟外湿过盛、饮食不节、情志不遂三大致湿病因,建立湿阻中焦证模型.空白给药组和平胃散组给予平胃散汤剂灌胃10ml/kg,空白组和自然恢复组给予0.9％生理盐水灌胃10ml/kg,3天后取材.用免疫组化技术测定胃肠组织AQP2的分布,用酶联免疫法测定胃肠组织AQP2的含量. 结果 模型组大鼠AQP2在胃体中间黏膜、大肠中段黏膜下组织表达减少,在小肠中段组织、大肠黏膜、大肠末端黏膜下组织表达增加.平胃散增强湿阻中焦证胃体中间黏膜、大肠中段的黏膜AQP2的表达,抑制湿阻中焦证大肠中段黏膜下组织AQP2的表达.结论 AQP2在湿阻中焦证胃肠特征性表达分布谱可能是湿阻中焦证的分子基础之一；平胃散对其表达的干预可能是该方治疗湿阻中焦证的分子机理之一.
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海洛因对小鼠肾结构与功能的影响
目的 探讨海洛因对小鼠肾组织的影响.方法 将60只小鼠随机分为对照组和海洛因组,海洛因组在l～5d、6～10d、11 ～15 d用递增剂量(0.0571、0.0667、0.0706 g/kg)腹腔连续注射海洛因溶液15 d(每天两次,每次0.2 ml),对照组注射等量生理盐水,分别于给药5、10、15d时检测小鼠体重和肾重的变化;用比色法检测血浆肌酐(Cr)、尿酸(UA)和肾组织丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、Na+-K+-ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化;用生物显微技术观察肾组织结构的变化;用免疫组织化学法检测肾组织水通道蛋白2(AQP2)表达的变化.结果 与对照组相比,海洛因组小鼠体重、肾重及肾指数均降低,肾组织出现不同程度的损伤,肾小球固缩,肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落,血浆Cr、UA含量升高(P＜0.01),肾组织CAT、Na+-K+-ATP酶活性降低(P＜0.01),LDH活性、MDA含量升高(P＜0.05或P＜0.01),AQP2蛋白的表达降低(P＜0.01).结论 海洛因影响肾组织抗氧化能力,降低肾组织AQP2的表达,对肾组织结构与功能有明显的损伤效应.
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细胞骨架对水通道蛋白2穿梭的影响
水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)作为肾脏主要的水通道蛋白,由胞浆穿梭至管腔侧顶端膜上以增加集合管对水的通透性,从而增加肾脏对原尿中水的重吸收.AQP2的穿梭主要有赖于血管加压素的调节及其自身的磷酸化水平.近越来越多的研究表明,细胞骨架在AQP2穿梭中发挥着重要的作用,本文将就这方面的文献进行总结.
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培哚普利对自发性高血压大鼠肾脏水通道蛋白2的影响
目的 探讨培哚普利对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏水通道蛋白2(AQP2)表达和尿液AQP2排泄的影响.方法 SHR 20只,随机分成2组,每组10只,分别为对照组、培哚普利治疗组,经用药后观察血压、血Na+、尿量以及尿渗透压,用放射免疫法检测血浆血管加压素(AVP)浓度,用免疫组化、RT-PCR、Western blot检测肾脏AQP2表达,用间接ELISA法检测尿液AQP2浓度.结果 SHR经培哚普利治疗8周后,血压下降(P＜0.05)、血Na+水平差异无统计学意义,24 h尿量增多(P＜0.05)、尿渗透压低于对照组(P＜0.05).免疫组化结果显示,培哚普利治疗后肾组织AQP2表达明显减弱(P＜0.05);用RT-PCR和Western blot方法检测表明,与对照组比较,治疗组肾组织AQP2 mRNA和蛋白的表达均明显减少(均P＜0.05);血浆AVP浓度低于对照组(P＜0.05)、尿液AQP2浓度高于对照组(P＜0.05).结论 培哚普利下调SHR肾脏组织的AQP2 mRNA和蛋白表达,增加AQP2尿液排泄.
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氯沙坦钾对慢性心力衰竭小鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响
目的 探讨慢性心力衰竭小鼠肾脏水通道蛋白2(AQP-2)的表达.了解氯沙坦钾对慢性心衰小鼠肾脏AQP-2表达的影响.方法 昆明小鼠33只随机分为3组:假手术组(n＝10);慢性心力衰竭组(CHF组,n＝13);氯沙坦钾组(n＝10).以左冠状动脉结扎建立小鼠CHF模型,其中氯沙坦钾组在结扎术后2周给予氯沙坦钾(10 mg/kg·d)灌胃8周.观察各组小鼠一般情况、心率、血压、肾/体质量及死亡率.光镜下观察HE染色后小鼠肾组织的病理改变;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肾脏组织AQP-2 mRNA的表达;用免疫组织化学和Western blot分析法检测肾组织AQP-2蛋白的表达.结果 假手术组小鼠术后8周均存活,且一般情况佳;CHF组死亡3只(23%);氯沙坦钾组小鼠术后8周均存活.与假手术组比较,CHF组小鼠心率、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、肾/体质量均显著增高(P＜0.05);氯沙坦钾组以上各项指标较CHF组显著下降(P＜0.01),但仍高于假手术组.CHF小鼠肾小管上皮细胞有明显空泡形成,经氯沙坦钾治疗后病理改变有所减轻.CHF小鼠肾组织AQP-2基因和蛋白表达均显著高于假手术组,经氯沙坦钾治疗后表达有所下调,但仍高于假手术组.结论 CHF小鼠肾组织存在AQP-2基因和蛋白表达增加,氯沙坦钾在保护肾脏的同时下调肾组织AQP-2基因及蛋白的表达.
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利用常间回文重复序列丛集及相关蛋白9系统敲除小鼠肾集合管上皮细胞系的水通道蛋白2基因
目的 利用常间回文重复序列丛集(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)系统敲除小鼠肾内髓集合管3(m-I MCD3)上皮细胞的水通道蛋白2(Aqp2)基因.方法 在小鼠Aqp2基因的第1、4个外显子上各设计两个小向导RNA(sgRNA),分别为sgRNA1-1、sgRNA1-2、sgRNA4-1、sgRNA4-2,并将其成功克隆进常间回文重复序列丛集慢病毒载体2上.将测序正确的质粒转染到m-IMCD3细胞中,提取各单克隆细胞系的基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增出sgRNA作用靶点的DNA片段并测序.利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫荧光检测Aqp2的表达.结果 成功构建出含有相应sgRNA的载体;4个sgRNA对Aqp2基因的靶点都有切割作用;sgRNA1-1与sgRNA4-2组合能成功把两者间5500 bp的DNA片段敲除;应用RT-PCR及免疫荧光证实应用CRISPR/Cas9系统敲除Aqp2后,该m-IMCD3细胞系中的Aqp2 mRNA及蛋白几乎未见表达.结论 通过CRISPR/Cas9系统可获得Aqp2基因敲除的肾集合管上皮细胞系.
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水通道蛋白2在胆总管结扎大鼠肝硬化肾组织中的表达及丹参注射液对其表达的影响
目的:探讨胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)大鼠肝硬化不同阶段肾组织中水通道蛋白2(aquaporins-2,AQP2)表达的变化；用丹参注射液干预肝硬化腹水大鼠,观察丹参注射液对其表达的影响.方法:将70只♂SD大鼠随机分成假手术组、模型组.模型组分别于结扎后1、2、3、4 wk麻醉10只动物.假手术组与4 wk模型组同批麻醉.4wk末时,再从剩余存活造模大鼠中,随机选取16只腹腔穿刺证实有腹水的大鼠,随机分为治疗组和对照组.从造模第5周开始进行治疗观察.治疗组给予丹参注射液2 mL腹腔注射,1次/d,连用2 wk.对照组给予蒸馏水2 mL腹腔注射,1次/d,连用2 wk,6 wk末2组同批麻醉.采用HE染色、Masson三色染色确定模型建立情况；肾脏组织标本采用HE染色,光镜下观察组织学变化,应用免疫组织化学方法测定AQP2的表达及分布.结果:造模1-4 wk大鼠肾组织AQP2的阳性染色平均吸光度A值(皮质:0.4703±0.0313,0.4832±0.0212,0.5081±0.0417,0.6802±0.0531；髓质:0.4320±0.0237,0.4724±0.0284,0.4796±0.0451,0.5187±0.0612)均高于假手术组(皮质:0.4197±0.0295;髓质:0.4139±0.0152,P＜0.05),提示肝硬化进程中,AQP2在肾皮质和肾髓质的表达均逐渐增强.治疗组(皮质:0.4233±0.0521,髓质:0.4158±0.0413)大鼠肾组织AQP2的阳性染色平均A值显著低于对照组(皮质:0.5536±0.0476,髓质:0.4764±0.0536,P＜0.05).结论:以BDL法制备的大鼠肝硬化模型中存在着肾脏AQP2表达的上调,提示在肝硬化进程中,肾脏集合管可能参与了水重吸收的增加；而丹参注射液可以下调肝硬化腹水大鼠肾脏AQP2的高表达.
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多巴胺调控实验性梗阻性黄疸围手术期肾髓质水通道蛋白2表达
目的:探讨梗阻性黄疸围手术期应用小剂量多巴胺对肾髓质水通道蛋白2(aquaporin 2)蛋白表达影响.方法:♂Wistar大鼠70只随机分为4组,分别为对照组(n=10)、梗阻性黄疸组(n=20)、多巴胺5 μg组(n=20)和多巴胺10μg组(n=20).梗阻性黄疸组及多巴胺组大鼠全身麻醉后建立梗阻性黄疸动物模型;对照组大鼠行假手术.7 d后全麻下解除胆管梗阻,对照组再次行假手术.多巴胺组于胆管再通手术之前于股静脉套管针穿刺泵入多巴胺,剂量分别为5μg/(kg·min)和10μg/(kg·min);而假手术组及梗阻性黄疸组大鼠泵入9 g/L生理盐水,泵注持续2 h,并将各组动物随机均分为立即取材组和24 h后取材组.腔静脉血离心后收集血清冻存检测胆红素、肌酐和尿素氮;分离肾脏髓质冻存,免疫印迹法(Western blotting)法检测aquaporin 2的表达.结果:解除梗阻早期鼠血清胆红素水平下降.血尿素氮及肌酐未见明显改变.通过Western blotting对肾髓质aqp2表达测定发现,梗阻性黄疸组解除梗阻0 h取材组aqp2表达较对照组明显下降(15 665±1181 vs 21 966±1544,P＜0.01),而解除梗阻24 h后aqp2表达出现明显上升(36 490±1822 vs 21917±2661,P＜0.01).多巴胺5 μg组0与24 h aqp2表达更接近CO组(16 010±646,22 715±575 vs 21966±1544,21 917±2661);10μg组各时间点aqp2表达与梗黄组接近(13581±1662,32313±1453 vs 15 665±1181,36490±1822),未见多巴胺有明显调节aqp2表达作用.结论:胆管梗阻损伤肾脏集合管上皮细胞结构并抑制水重吸收功能;低浓度多巴胺可调控集合管水通道蛋白2表达.
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抗分泌因子与水通道蛋白1和2在大鼠内耳中的表达及其相互作用
目的 研究抗分泌因子(antisecretory factor,AF)与水通道蛋白1、2(aquaporin-1,2,AQP1,2)在大鼠内耳中的表达及其相互作用.方法 选取6只健康雄性SD大鼠,采用Envision二步法免疫组化技术,观察AF、AQP1和AQP2在大鼠内耳中的表达情况;选取20只健康雄性SD大鼠,分别取其前庭及耳蜗组织,运用免疫共沉淀结合蛋白质印记方法,用抗AQP1的单克隆抗体和抗AQP2多克隆抗体分别特异性地沉淀前庭和耳蜗组织中的蛋白抗原,用抗AF的特异性抗体检测沉淀物.结果 AF在内耳分布广泛,耳蜗血管纹边缘细胞、螺旋韧带Ⅰ～Ⅴ型纤维细胞、前庭膜、基底膜、壶腹嵴等部位呈轻中度阳性反应,圆窗膜呈中强阳性反应,耳蜗螺旋神经节及前庭、耳蜗神经纤维均有阳性分布;AQP1主要分布于血管纹的中间细胞、螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞、基底膜以及圆窗膜,染色强度为中重度;AQP2主要表达于螺旋韧带Ⅱ型、Ⅳ及Ⅴ型纤维细胞,呈中重度阳性染色反应,圆窗膜也有轻度表达.以AF特异性抗体分别检测AQPI及AQP2特异性抗体沉淀物中有清晰的阳性条带,相对分子质量约60 000,与AF的相对分子质量吻合,而未加AQP1及AQP2特异性抗体的对照实验中无反应条带出现.结论 AF、AQP1及AQP2在内耳组织中的分布有一定的规律,多位于与内淋巴关系密切的部位,提示三种蛋白可能参与内淋巴中水的调节.AF的分布区与AQP1及AQP2均有重叠,AQP1、AQP2与AF之间均存在相互结合作用.
