中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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伤寒Vi多糖与不同载体蛋白制备的结合物的特性分析
目的 比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,rEPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫效应.方法 分别以DT、rEPA为载体蛋白,以己二酰肼(adipyl dihydrazide,ADH)为连接剂,使Vi多糖与载体蛋白共价偶联制备多糖蛋白结合物STVi-DT和STVi-rEPA,检测其理化特性指标、抗原性,再将其于0、14、28 d免疫NIH小鼠,经眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平,分析其免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性.结果 STVi-DT、STVi-rEPA理化特性指标相似.STVi-DT针对STVi、DT抗血清均具有明显抗原性,而针对rEPA抗血清无抗原性,STVi-rEPA针对STVi、rEPA抗血清均具有明显抗原性,而针对DT抗血清无抗原性.Vi多糖和Vi多糖蛋白结合物均具有动物免疫原性,STVi蛋白结合物较STVi具有更强的免疫原性,STVi-DT的动物免疫原性试验结果略优于STVi-rEPA;免疫2剂STVi-DT和STVi-rEPA后,小鼠血清GMT明显升高,且STVi-DT组明显高于STVi-rEPA组(P＜0.05),具有较强的免疫记忆效应;免疫STVi-DT和STVi-rEPA后,小鼠血清GMT随免疫剂次增加和时间延长持续升高,直至稳定在一定水平,免疫持久性较好.结论 STVi-DT、STVi-rEPA理化特性相似,均具有显著的免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性,而STVi-DT免疫原性、免疫记忆效应更强.
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含人巨细胞病毒糖蛋白B中AD2位点Ⅰ的鞭毛融合蛋白在小鼠中的免疫应答
目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)糖蛋白B(glycoprotein B,gB)中AD2位点Ⅰ(AD-2S1)在小鼠中的免疫效果.方法 将AD-2和4×AD-2S1核酸序列分别克隆至含有鞭毛蛋白的质粒pET42b-FljB中,构建表达载体pET/FljB-AD-2和pET/FljB-4×AD-2S1,转化大肠埃希菌Rosetta 2(DE3),IPTG诱导表达,收集FljB-AD-2的菌体裂解液上清及FljB-4×AD-2S1的菌体裂解液沉淀,经Superdex-200凝胶过滤层析纯化,根据蛋白含量及纯度配制无佐剂抗原(FljB-AD-2和FljB-4×AD-2S1)及含Al(OH)3佐剂抗原[FljB-AD-2+ Al(OH)3和FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3].用制备的抗原于第0和21d皮下免疫BALB/c小鼠,设PBS对照组,于2次免疫后1周,眼窝后穿刺采血,分离血清,ELISA法检测AD-2S1特异性IgG及IgG1和IgG2a水平,中和试验检测HCMV中和抗体水平.结果 纯化的FljB-AD-2抗原相对分子质量约54 000,纯度为88.2％,蛋白含量为0.91 mg/ml;纯化的FljB-4×AD-2S1抗原相对分子质量约50 000,纯度为96.8％,蛋白含量为0.45 mg/ml.与对照组相比,免疫组小鼠均产生不同水平的抗AD-2S1特异性IgG抗体,FljB-AD-2和FljB-AD-2+ Al(OH)3免疫组小鼠IgG水平较低,FljB-4×AD-2S1和FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3免疫组小鼠IgG水平较高,其中FljB-4×AD-2S1与FljB-AD-2免疫组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);FljB-4×AD-2S1可诱导小鼠产生IgG1和IgG2a两种抗体,但IgG2a水平较高,差异有统计学意义(P＜0.05),而FljB-4×AD-2S1+Al(OH)3诱导小鼠产生的IgG1和IgG2a水平差异无统计学意义(P＞0.05);各免疫组小鼠血清中和抗体水平均不高于1∶4.结论 FljB-4×AD-2S1和FljB-AD-2均能诱导产生AD-2S1特异性IgG,却不能诱导小鼠产生补体非依赖性中和抗体.
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pH处理对米糠蛋白理化特性及结构的影响
目的 分析pH处理对米糠蛋白理化特性及结构的影响.方法 制备米糠蛋白,经不同pH值的缓冲液处理后,分别采用福林酚法、ANS荧光探针法、DNTB法、荧光光谱法、SDS-PAGE法检测米糠蛋白的溶解性、表面疏水性、游离巯基含量、蛋白质三级结构和亚基组成.结果 pH为4、6时,米糠蛋白的溶解性低;而pH＜4和pH＞6时,米糠蛋白的溶解性均有不同程度的升高,且在碱性条件下,米糠蛋白的溶解性比在酸性环境中更好.米糠蛋白的溶解性与表面疏水性、游离巯基含量呈正相关.pH处理对米糠蛋白的荧光光谱有一定影响,使其微环境发生了变化.在酸性环境中,米糠蛋白的亚基组成有明显变化,高相对分子质量的亚基解聚为低相对分子质量的亚基;而中性及碱性环境对米糠蛋白的亚基组成无影响.结论 本实验分析了pH处理对米糠蛋白溶解性、表面疏水性、游离巯基、荧光光谱和亚基组成的影响,为米糠蛋白在食品工业中的应用提供了参考.
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中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析
目的 原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性.方法 根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1 (wtVP1)基因进行优化(optiVP1),将基因wtVP1和optiVP1分别克隆至pGEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价.结果 优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1经鉴定证明构建正确;佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/rin诱导8h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wtVP1菌株(5.49±0.30)％提高至optiVP1菌株(59.7±0.51)％,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P＜0.05).结论 通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础.
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信号调节蛋白-α基因真核表达质粒的构建及其在A549细胞中的表达
目的 构建信号调节蛋白-α(signal regulatory protein-α,SIRP-α)基因真核表达质粒,并于A549细胞中进行表达.方法 提取HepG2细胞总RNA,RT-PCR扩增SIRP-α基因片段,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)-EGFP中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP.将重组表达质粒转染A549细胞,转染24 h后,荧光显微镜下观察转染情况;转染48 h后,RT-PCR检测SIRP-α基因的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测SIRP-α蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-SIRP-α/EGFP构建正确;转染pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP的A549细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光;RT-PCR检测结果可见243 bp目的条带,Western blot检测显示SIRP-α存在.结论 成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP,并于A549细胞中有效表达,为进一步研究SIRP-α与肺癌的相关性奠定了基础.
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22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化及其多糖蛋白结合物的免疫原性
目的 用不同活化剂进行22F型肺炎球菌荚膜多糖(type 22F streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide)的活化,并探讨其多糖蛋白结合物的免疫原性.方法 分别用溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)和1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)作为22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化剂,1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为链接剂,制备22F型肺炎荚膜多糖衍生物(3批Pn22Fps-ADH1和3批Pn22Fps-ADH2);在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N’-ethylearbodiimide hydroehloride,EDAC]的作用下,将衍生物与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)共价结合,经凝胶过滤柱层析纯化,得到22F型肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合物(3批Pn22Fps-TT1和3批Pn22Fps-TT2);并对其生化指标、血清学特异性、免疫原性及异常毒性进行检测.结果 衍生物Pn22Fps-ADH2的衍生率及回收率均略高于Pn22Fps-ADH1;结合物Pn22Fps-TT2的生化指标检测结果相对Pn22Fps-TT1较好;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均可与22F型肺炎球菌诊断血清特异性结合;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均具有良好的免疫原性;无异常毒性.结论 CNBr和CDAP均可作为22F型肺炎球菌荚膜多糖活化剂,经活化和结合反应,其抗原位点得到较好保留,但CDAP作为结合疫苗多糖的活化试剂效果更佳.
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醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性
目的 原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性.方法 经人工合成醛酮还原酶AKR1 C3基因,克隆至质粒pET-15b中,构建重组表达质粒pET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化.采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的适底物,并检测金属离子对酶活的影响.用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查.采用MTT法进行细胞毒理试验.结果 重组质粒pET-15b-AKR1 C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27％,纯化后纯度达95％以上.睾丸酮为AKR1C3适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKRIC3酶活;小鼠血清中高效价为5×104,兔血清中高效价为6.25× 104.AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害.AKR1 C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞.结论 醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据.
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海蚯蚓蛋白酶基因的原核表达及其抗肿瘤活性
目的 原核表达海蚯蚓蛋白酶基因,探讨其对肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法 根据环节动物门蚯蚓和单环刺螠丝氨酸蛋白酶cDNA序列多重比对获得的保守序列设计引物,从海蚯蚓肠道组织提取总RNA,经3'RACE和5'RACE技术分别克隆海蚯蚓蛋白酶cDNA序列的3 '端和5 '端,并进行拼接,对其编码的蛋白质作生物信息学分析;将海蚯蚓蛋白酶成熟肽的编码序列亚克隆至原核表达载体pET-21a(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,采用组氨酸亲和层析柱纯化;MTT法检测重组蛋白的抗肿瘤活性.结果 经3 '端RACE技术获得约250 bp的海蚯蚓蛋白酶基因cDNA 3'端序列,再经5'RACE技术扩增获得约770 bp的cDNA 5'端序列,拼接可得海蚯蚓蛋白酶cDNA序列全长为880 bp,其编码蛋白含270个氨基酸,具有高度保守的GDSGGP序列;重组蛋白相对分子质量为27 000,主要以包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的30％,上清纯化后纯度可达95％;重组蛋白酶对人肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用.结论 原核表达了海蚯蚓蛋白酶,可明显抑制人肿瘤细胞的增殖,为抗肿瘤基因工程药物的研发提供了实验依据.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的原核表达及其纯化
目的 原核表达耐甲氧两林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)转肽酶区,并进行纯化及鉴定.方法 PCR扩增编码PBP2a转肽酶区的me cAf基因片段,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-mecAf,经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定正确后,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21进行诱导表达;经蛋白亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pGEX-6p-mecAf经双酶切(BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ)及测序鉴定证明构建正确;表达产物的相对分子质量约63 000,表达量约占菌体总蛋白的14.5％,纯化后纯度达90％.结论 成功构建了PBP2a转肽酶区的原核表达质粒,目的蛋白在E.coii中获得高效表达,为制备单克隆抗体及建立MRSA快速检测方法奠定了基础.
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壳寡糖佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响
目的 探讨壳寡糖(chitooligosaccharide,COS)佐剂对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗HepA-1 18 EU+不同剂量COS(100μg、500 μg、1 mg、2.5 mg、5 mg、10 mg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(HepA-l 18 EU)和铝佐剂对照组[HepA-l18 EU+ Al(OH)3200μg],每组6只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只.于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性IgG抗体水平.在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取COS佳剂量组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织,制备病理切片,进行对比观察.结果 除阴性对照组外,各组小鼠免疫4周后均产生抗-HAV IgG抗体,并随着时间的延长呈上升趋势,在第8周时均达峰值,随后逐渐下降;COS 2.5 mg、5 mg和10 mg组小鼠血清在各时期的抗体水平均显著高于抗原对照组和铝佐剂对照组(P＜0.05),且能维持较长时间,至16周抗体水平仍与铝佐剂对照组相当,差异无统计学意义(p＞0.05),其中COS5 mg组在整个试验过程中产生的抗体水平均高,且与2.5mg组峰值水平差异有统计学意义(P＜0.05),与10 mg组水平相当,至免疫后16周,COS 5 mg组与10 mg组抗体水平差异有统计学意义(P＜0.05).COS佳剂量为5 mg/只.试验期内,观察小鼠各项生理指标未见异常,COS 5 mg组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织均未观察到病变.结论 COS可显著增强HAV疫苗诱导小鼠的体液免疫应答,有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂.
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沙门菌PCR-ELISA检测方法的建立
目的 建立沙门菌PCR-ELISA检测方法,并进行验证.方法 根据沙门菌invA基因设计PCR-ELISA引物及探针,进行PCR扩增、核酸杂交及ELISA检测,对变性反应条件、杂交探针浓度、杂交时间和温度及显色时间进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行敏感性、特异性及重复性验证.用建立的PCR-ELISA方法检测人工染菌的22批中药丸剂及27批液体乳中的沙门菌,并与PCR及GB4789方法进行比较.结果 150 mmol/L NaOH变性液可使核酸变性彻底,50 pmol/ml地高辛标记探针为适浓度,50℃60 min为佳杂交时间和温度,佳显色时间为50 min;阴性、阳性的阈值为0.265.该方法低检测限为0.5 pg/μl,灵敏度高;能针对性地扩增沙门菌的特异性片段,检测特异性强;检测结果的批内、批间变异系数均小于10％,重复性较好.人工染菌的22批中药丸剂和27批液体乳的PCR-ELISA方法检测阳性率明显高于PCR法,与GB4789方法检测阳性率基本一致.结论 优化后的PCR-ELISA方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可快速检测食品、药品中的沙门菌.
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乳癌组织中人类表皮生长因子受体2蛋白的纯化及鉴定
目的 建立乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)蛋白的纯化方法.方法 采用新鲜的乳腺癌组织制备匀浆液,经60％饱和硫酸铵盐析沉淀法进行乳腺癌组织蛋白的粗提;再通过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和两次Sephacryl S-200分子筛层析进一步纯化HER2蛋白;纯化蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 纯化后HER2蛋白相对分子质量为185 000;HER2蛋白可与兔抗人HER2多克隆抗体发生特异性结合.结论 建立的纯化方法获得了具有免疫学活性的HER2蛋白,为HER2单克隆抗体的制备奠定了基础.
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螨变应原点刺制品生物活性测定方法
目的 探讨以荧光酶联免疫竞争抑制法(简称UniCAP法)代替放射性吸附抑制试验(radioallergosorbent test,RAST)测定螨变应原点刺制品生物活性的可行性.方法 分别将螨变应原皮肤点刺制品中屋尘螨、粉尘螨点刺液及相应参考品进行系列稀释后,分别与等体积尘螨阳性血清混合,并设阴性对照及100％抑制对照.分别采用γ放射免疫计数器(RAST法)和ImmunoCAP 100E全自动过敏原分析仪(UniCAP法)测定特异性IgE(sIgE)浓度,计算点刺样品的生物活性.结果 采用UniCAP法测定结果的RSD值均低于20％.粉尘螨点刺液用两种方法测定的结果基本一致,而屋尘螨点刺液的结果相差较大,但均在标准范围内.结论 以UniCAP法替代RAST法测定点刺液活性具有可行性,可缩短制品的检验时限,并减少了对操作人员及环境的危害.
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实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数
目的 建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数.方法 以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线.提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数.结果 分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6％和91.8％,具有良好的特异性.随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象.结论 成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法.
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Vero细胞无血清培养基的优化
目的 通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基.方法 以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛血清白蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子和高密度脂蛋白对Vero细胞生长的影响,以CCK-8测定的吸光度值(A490)为响应值,优化Vero细胞无血清培养基.用优化的因子浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞,对优化结果进行验证.结果 通过Plackett-Burman试验筛选出胰岛素、牛血清白蛋白和人转铁蛋白对Vero细胞生长影响较大;采用陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步优化,Design-Expert 8.06软件进行回归分析,得到胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白的佳浓度分别为5.625 μg/ml、14.034 μg/ml和3.92 mg/ml,在此优化条件下的A490值为2.3,较基础培养基提高了3.41倍.用优的胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞的A490值为2.148,为预测值的93.4％,符合度较高.结论 应用DOE方法快速高效地优化了Vero细胞无血清培养基,为无血清培养基的研制奠定了基础.
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生物反应器微载体规模化培养轮状病毒重配株LH9
目的 利用Vero细胞生物反应器微载体培养技术规模化培养轮状病毒重配株LH9(G4型).方法 用3L生物反应器,以4g/L载体浓度培养Vero细胞,待细胞浓度达1.8× 106个/ml时,分别用含2、1、0.75、0μg/ml胰酶的DMEM培养液,35 ℃连续培养21d,观察细胞生长状态.分别按0.5、0.1、0.05、0.01 MOI接种轮状病毒重配株LH9(G4),培养过程中每日取样,检测病毒滴度以及葡萄糖、乳酸含量.根据培养过程中葡萄糖、乳酸含量的变化,确定病毒培养过程中的收获时间,优化培养工艺.结果 在反应器中用含不同浓度胰酶的DMEM培养Vero细胞,细胞形态良好,与不含胰酶的DMEM培养液培养的细胞无明显差异;按0.05 MOI接种后的病毒收获液滴度较高,可达7.0 lgCCID50/ml,且持续时间较长;通过对病毒培养液中葡萄糖、乳酸含量的监测,调整了培养过程中的收获时间,收获次数增加至4次,可收获病毒液4个工作体积,病毒高峰滴度可达8.5 lgCCID50/ml.结论 采用生物反应器微载体系统培养轮状病毒重配株LH9(G4),可显著提高病毒滴度,通过对培养过程的优化,增加了病毒收获量,为进一步规模化生产轮状病毒疫苗奠定了基础.
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核磁共振波谱法在双价痢疾多糖结合疫苗中的初步应用
目的 探讨核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)法在福氏宋内双价痢疾多糖结合疫苗生产工艺中的应用.方法 利用Agilent 600 MHz核磁共振仪分别对福氏2a痢疾多糖和宋内痢疾多糖重复结构单元进行1HNMR和13C NMR质量分析,并对生产工艺中的多糖、多糖衍生物及多糖结合物重复结构单元进行了1H NMR结构解析和对比.结果 多糖的1H NMR和13C NMR数据及图谱与文献高度一致;结合工艺中各步多糖的1H NMR分析证实了双价痢疾多糖结合工艺的反应机理.结论 在双价痢疾多糖结合疫苗的研发过程中,NMR法可直接地检测多糖化学结构,对原料多糖及整个衍生过程中多糖的结构及修饰程度实施质控.
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金黄色葡萄球菌肠毒素B在不同动物模型中的应答及治疗策略的研究新进展
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染引起的多种临床症状均与其分泌的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)密切相关,临床对SEB毒素中毒尚无特效疗法.本文对SEB在不同动物模型中的应答及治疗策略的研究新进展作一综述.
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Oka株带状疱疹减毒活疫苗猴体免疫原性分析
目的 分析Oka株带状疱疹(herpes zoster,HZ)减毒活疫苗的免疫原性.方法 分别用病毒滴度为5.46和4.9 lgPFU/ml的Oka株HZ减毒活疫苗,于恒河猴右侧上臂三角肌皮下进行免疫,观察免疫后恒河猴的一般状态,并于免疫后2、4、8、12周及6、9、12月采集静脉血,分离血清,荧光抗体膜抗原(fluorescent antibody to membrane antigen, FAMA)法检测血清中抗水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)抗体水平.结果 疫苗接种后无不良反应发生.免疫后2周,5.46和4.9 lgPFU/ml疫苗组抗体阳转率均为100％,几何平均滴度(GMT)分别为111.7和27.9;免疫后4周,GMT达到峰值,分别为168.8和84.4;免疫后12个月,抗VZV抗体滴度仍保持在较高水平.结论 Oka株HZ减毒活疫苗具有良好的猴体免疫原性.
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柯萨奇病毒A组16型疫苗候选株减毒特性的分析
目的 对柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)减毒活疫苗候选株进行初步分析,为CA16减毒活疫苗的研制奠定基础.方法 将两株CA16疫苗候选株(KM168和KM154)进行低温连续传代减毒,对不同代次病毒进行减毒特性的分析.将候选株病毒收获液免疫ICR乳鼠(颅内注射)及ICR成鼠(腹腔注射),分别评价减毒疫苗候选株的毒力、免疫原性以及乳鼠作为减毒活疫苗残余毒力评价动物模型的可行性;对病毒进行VP1片段的测序,分析遗传稳定性.结果 两个候选株经低温连续传代后,均具有稳定的生长特性及良好的免疫原性,感染性滴度均保持在约7.0 LgCCID50/ml,免疫小鼠后抗体阳转率达100％,高GMT约1∶30.乳鼠及成鼠感染病毒后,在大部分组织中能检测到CA16病毒;KMI54株在第12代后未对乳鼠产生临床致病性及致死率,病理检测结果主要表现为少量炎性细胞集结,无明显组织损伤,随着传代增加,组织损伤明显减少.两个候选株经低温连续传代后,能保证VP1片段的遗传稳定性.结论 低温连续传代可使CA16的毒力明显降低,有望筛选出减毒活疫苗的候选株;1～2日龄ICR乳鼠可以作为CA16减毒活疫苗的候选株毒力评价的动物模型.
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重组2型腺相关病毒肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因治疗制剂的质量分析
目的 对重组2型腺相关病毒肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(recombinant adeno-associated virus 2 encoding tumor necrosis factor-related apoptosis-induced ligand,rAAV2-TRAIL)基因治疗制剂进行质量分析,并针对其关键质量属性建立质控方法.方法 采用PCR法对rAAV2-TRAIL基因治疗制剂中插入的启动子CAG和目的基因TRAIL进行鉴别;在腺病毒(Ad5)的辅助下,将rAAV2-TRAIL体外感染293T细胞后,采用ELISA法检测培养上清中目的蛋白TRAIL的表达量,检测rAAV2-TRAIL对神经胶质瘤U251细胞的体外杀伤活性;设计引物及探针,采用Q-PCR法检测rAAV2-TRAIL基因治疗制剂中的rAAV2-TRAIL滴度、可能存在的复制型rcAAV滴度以及残余辅助病毒1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 1,HSVl)滴度.结果 启动子CAG和目的基因TRAIL的PCR鉴定结果与理论及理化对照品相符;rAAV2-TRAIL感染293T细胞48 h后,上清中TRAIL表达量为(0.36±0.18) ng/ml,RSD为50.0％;rAAV2-TRAIL体外作用于神经胶质瘤细胞U251,细胞生长相对抑制率为(26.6±3.75)％,RSD为14.1％;制剂中rAAV2-TRAIL滴度为(4.72×1011±0.52×1011) copies/m1,RSD为11.0％,rcAAV滴度为(2.49×107±0.18×107) copies/ml,RSD为7.2％,HSV1滴度为(6.02×106±0.51×106) copies/ml,RSD为8.5％.rAAV2-TRAIL/rcAAV为1.90×104,rAAV2-TRAIL/HSV1为7.84× 104.结论 建立的质控方法可用于rAAV2-TRAIL的质量控制,为该产品质量标准的建立奠定了基础,同时对以AAV为载体的基因治疗制剂的质量研究提供参考.
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国产冻干人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)的安全性及免疫原性观察
目的 观察人二倍体细胞(human diploid cell,HDC)培养制备的国产冻干人用狂犬病疫苗(HDCV)的安全性及其免疫原性.方法 选取江苏省淮安市涟水县年龄在10 ～ 60岁的常住高危狂犬病感染的健康人,随机分为试验组和对照组,每组600人,按照“Essen”暴露后接种程序,分别于第0、3、7、14和28天经上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,试验组接种国产冻干入用狂犬病疫苗(HDCV),对照组接种进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).所有受试者在每次接种后留观30 min,观察即时反应,并在第6、24、48、72 h观察局部和全身反应情况.在首剂免疫前和免疫后7、14、42 d采集全血标本,分离血清,采用WHO推荐的快速免疫荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血清中和抗体,计算抗体阳转率及几何平均滴度(GMT).结果 所有受试者接种疫苗后反应轻微,均未发生Ⅲ级及Ⅲ级以上不良反应,所有不良反应均在72 h内恢复.试验组和对照组局部反应总发生率分别为7.67％和6.83％,全身反应总发生率均为5.00％,两组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).试验组和对照组首剂免疫后7、14、42 d的抗体阳转率分别为28.77％、100％、100％和28.72％、98.96％、100％,两组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);血清中和抗体GMT分别为0.274 8、19.744 3、37.575 0 IU/ml和0.247 4、17.327 4、37.723 1 IU/ml,两组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 国产冻干人用狂犬病疫苗(HDCV)接种反应轻微,且具有良好的免疫原性.
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14型肺炎球菌多糖单克隆抗体的制备与初步应用
目的 制备14型肺炎球菌多糖单克隆抗体,并进行鉴定及初步应用.方法 制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,经3次亚克隆筛选单抗细胞株,并制备腹水.对筛选的单抗进行ELISA效价、特异性、亚型、中和效价、浊度法特异性等鉴定.采用制备的单抗腹水检测市售23价肺炎球菌多糖疫苗、7价肺炎球菌结合疫苗中14型肺炎球菌多糖含量,计算回收率;并与丹麦血清研究所(State Serum Institute,SSI)14型肺炎球菌多糖兔多抗血清检测结果进行比较,计算两者之间的变异系数(CV).结果 共获得7株14型肺炎球菌多糖单抗细胞株:PP-14-101 ～107,效价分别为105、104、104、104、105、105、105;7株单抗与23价肺炎疫苗中包含的除14型以外的其他所有血清型的多糖均不发生交叉反应;PP-14-101、104、105、106这4株单抗具有免疫浊度趋势,另3株单抗无浊度信号;PP-14-101和PP-14-104株单抗与6A、33F型肺炎球菌多糖具有一定的交叉反应,而PP-14-105和PP-14-106株单抗与23型多糖均无交叉反应;PP-14-101、PP-14-104株单抗为IgM亚型,PP-14-105、PP-14-106株单抗为IgG1亚型,pp-14-106比PP-14-105株单抗稀释倍数高,反应性更强,因此选择PP-14-106株单抗为目标单抗;PP-14-106株单抗腹水对14型肺炎球菌的中和效价远高于1∶17 496,中和效价较高;采用PP-14-106株单抗腹水检测市售23价肺炎球菌多糖疫苗和7价肺炎球菌结合疫苗,回收率为90.2％～120.0％,该单抗与SSI血清检测上述疫苗成品14型肺炎球菌多糖含量的CV值在2.5％～11.9％之间.结论 成功获得1株效价高、具有杀菌活性、特异性好的单抗,该单抗具有免疫浊度趋势,能准确测定肺炎球菌疫苗中的多糖含量,可替代SSI血清用于多糖疫苗和结合疫苗中14型肺炎球菌多糖含量的定量检测.
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邢台市2011～2013年乙肝疫苗疑似预防接种异常反应监测数据分析
乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由乙肝病毒引起的、以肝脏为靶器官、可引起多器官损害的一种传染病,给患者、家庭和社会造成沉重的经济负担.我国乙肝防治采取的是免疫预防为主、防治兼顾的综合措施.1992年,卫生部将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫管理;2002年,将乙肝疫苗纳入儿童计划免疫,实现了免费接种疫苗;2005年,国务院颁布《疫苗流通和预防接种管理条例》,实现了新生儿乙肝疫苗免费接种.
关键词： 乙肝疫苗 疑似预防接种异常反应
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
