中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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乳糖诱导重组人睫状神经营养因子在大肠杆菌中的可溶性表达
目的 利用乳糖替代IPTG,诱导重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)在原核工程菌BL-TCS中可溶性表达,并选择适的诱导表达条件.方法 在不同的温度下,利用不同浓度的乳糖及0.5 mmol/L的IPTG,诱导含有人CNTF基因的工程菌9 h,比较菌体生长、乳糖消耗以及目标蛋白的表达规律.结果 乳糖组的菌体A600值均高于IPTG组.乳糖诱导产生的rhCNTF主要以可溶形式表达,各浓度乳糖的诱导效果均能接近或超过IPTG的效果.以2%乳糖在25℃下诱导6 h,可以达到比较好的诱导效果.结论 乳糖可取代IPTG诱导人CNTF基因表达,并获得良好效果.
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表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒对新生小鼠的被动免疫保护作用
目的 探讨表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒(Ad5/VP4)对新生小鼠的被动免疫保护作用.方法 在293细胞上扩增表达猴轮状病毒SA11株VP4抗原的重组腺病毒并纯化.将轮状病毒抗体阴性的小鼠交配后的雌性小鼠,分别通过肌肉注射、滴鼻和口服免疫纯化后的重组腺病毒,生产后第7天和第8天,用轮状病毒SA11(1.0×106 PFU)口服攻击乳鼠2次,观察出现腹泻症状的乳鼠的比例,并用ELISA检测母鼠的血清以及乳鼠胃囊乳块中的轮状病毒特异性抗体.同时以含有部分E1区基因的腺病毒5型载体(Ad5)作为对照.结果 经3种不同途径免疫母鼠后,在血清和乳汁中均能检测到轮状病毒VP4特异性抗体.经滴鼻免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为100%(11/11);经肌肉注射免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为30%(3/10);经口服免疫的母鼠喂养的乳鼠,经轮状病毒攻击后保护率为80%(8/10).对照组的小鼠全部出现了腹泻症状.结论 表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒经滴鼻免疫母鼠后,能在乳汁中产生特异性的IgA和IgG抗体,并能保护新生小鼠对抗轮状病毒的攻击,保护率达100%.
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小鼠激活素受体相互作用蛋白5的基因克隆
目的 克隆新的小鼠激活素受体相互作用蛋白5(ActRIP5)基因.方法 应用酵母双杂交技术,筛选出与激活素ⅡA型受体(ActRⅡA)相互作用蛋白的基因片段,再以此基因片段作为探针,从小鼠脑cDNA文库中钓取ActRIP5 cDNA.采用哺乳动物细胞双杂交系统,进一步确定ActRIP5与ActRⅡA的相互作用.采用RT-PCR检测ActRIP5 mRNA在组织中的转录.结果 克隆的ActRIP5全编码基因长1 839 bp,编码145个氨基酸残基,与ActRⅡA具有特异结合作用.ActRIP5 mRNA在小鼠多种组织中均可检出.结论 ActRIP5属于ActRIP家族新成员,可以与ActRⅡA相互作用.
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人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定
目的 克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体.方法 将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109.挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白.结果 在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22.3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%.Western blot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性.通过Ni2+-NTA亲和柱,从1 L诱导产物中纯化出约15～20 mg重组蛋白,纯度在80%以上.结论 已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础.
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表达HIV-1 Gag-Pol抗原的重组痘病毒的构建及免疫原性
目的 构建稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体疫苗,并检测其体液免疫效果.方法 将修饰型HIV-1 Gag-Pol基因插入到痘病毒表达载体pSC11m2启动子P7.5下游,经与野生型痘病毒同源重组后,进行蓝白斑筛选.用筛选得到的重组病毒rM-GP转染HEK293细胞,经SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白.用该重组病毒免疫BALB/c小鼠,并检测体液免疫应答.结果 已筛选到稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白的重组痘病毒载体rM-GP,经Westernblot,在免疫小鼠血清中检测到抗HIV-1 p24蛋白的特异性抗体.结论 重组痘病毒载体rM-GP能稳定高效表达HIV-1 Gag-Pol蛋白,并能引起有效的体液免疫应答.
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乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2在乳鼠脑内连续传代后病毒基因的变化
目的 研究乙型脑炎病毒(JEV)减毒株SA14-14-2的编码弱毒力基因变化与病毒毒力关系.方法 乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2在乳鼠脑内连续传代,检测各代病毒的生物学特性和病毒主要结构蛋白即E蛋白的基因序列,并与基因库中登录的JEV强毒株SA14和弱毒株的相应序列比较.结果 JEV SA14-14-2在乳鼠脑内连续传代后,病毒的复制滴度增加,对小鼠的脑内毒力也有所增强,但仍低于其亲代强毒株SA14的水平.JEV SA14-14-2在乳鼠脑内传1代后,病毒E蛋白的基因序列未发生改变;传第2代时,E107位点氨基酸发生了变化;第3代开始,E138位点氨基酸出现了改变.其他个别位点氨基酸也发生变化,但无规律性.乙型脑炎病毒强弱毒株间发生变化的其余7个氨基酸未再发生改变.结论 JEV SA14-14-2在乳鼠脑内传代过程中,E蛋白基因E107和E138位氨基酸是决定病毒毒力的关键氨基酸.其他非结构蛋白基因也可能与毒力有关.
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重组B7-H1IgV融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定
目的 以B7-H1为靶点,研制肿瘤免疫治疗蛋白疫苗.方法 将人B7-H1胞外片段IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达.Ni2+-NTA亲和层析纯化蛋白,Western blot鉴定.用纯化的rhB7-H1IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术、免疫组化技术和CDC试验测定融合蛋白及其抗血清的生物学活性.结果 所构建的pQE-30-TT-B7-H1IgV表达载体,能稳定表达rhB7-H11gV蛋白,经纯化后免疫昆明小鼠,可获得高滴度抗B7-H1抗血清.经流式细胞术和免疫组化检测显示,其抗血清可与HT-29/B7-H1+及SP2/0肿瘤细胞结合,且在CDC试验中,可依赖补体杀伤HT-29/B7-H1+及SP2/0肿瘤细胞.结论 rhB7-H1IgV融合蛋白不仅可引发小鼠体液免疫应答,而且其抗体还能与表达B7-H1的肿瘤细胞相结合,并介导补体依赖的体外杀伤作用.
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shRNA表达载体对耐阿霉素的人红白血病细胞株P-gp表达的抑制作用
目的 探讨靶向mdr1基因的shRNA表达载体对耐阿霉素的人红白血病细胞(K562/ADM)P-gp表达的抑制作用.方法 合成靶向mdr1基因的短发夹shRNA表达载体,转染K562/ADM细胞.利用RT-PCR检测转染细胞中mdr1基因mRNA,Western blot、免疫细胞化学和流式细胞术分别检测P-gp的表达.结果 在瞬时转染pSilencerTM 3.1-H1 neo mdr1-A和mdr1-B shRNA表达载体的K562/ADM细胞中,mdr1基因mRNA转录分别减少到39.1%(P＜0.05)和30.8%(P＜0.01).Western blot、免疫细胞化学和流式细胞术检测显示P-gp表达被明显而特异地抑制.结论 靶向mdr1基因的shRNA表达载体能够特异而有效地抑制耐药的人红白血病细胞中的P-gp表达.
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靶向高迁移率族蛋白A1基因RNA干扰真核表达载体的构建
目的 构建针对人高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究HMGA1基因在肿瘤细胞中的作用奠定实验基础.方法 设计合成特异性针对人HMGA1基因的寡核苷酸序列,梯度退火后,与pU6mRFP载体连接,构建重组载体,转染人肝癌细胞SMMC-7721.通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光,估测转染效率,RT-PCR法检测转染细胞HMGA1 mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 DNA测序证实,成功构建了特异性HMGA1 siRNA真核表达载体,转染后72 h,转染效率为40%左右.所构建的载体能够特异性沉默转染细胞HMGA1基因的表达.转染细胞HMGA1基因沉默后,细胞凋亡率(27.86%±2.44%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为2.82%±2.39%和2.04%±0.70%),G0-G1期细胞百分数(77.73%±1.78%)明显高于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为42.19%±3.28%和39.23%±3.63%),G2-S期细胞百分数(22.27%±1.78%)明显低于空载体对照组和SMMC-7721对照组(分别为57.81%±3.28%和60.77%±3.63%).结论 成功构建了HMGA1的RNA干扰真核表达载体.
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外水相对胰岛素载药纳米颗粒胶体系统分散性的影响
目的 探索不同外水相组成对胰岛素纳米颗粒胶体系统分散性的影响,为深入开展纳米载药颗粒研究提供依据.方法 采用高速高压联合均质机,经乳化-溶剂挥发法制备不同粒径的纳米载药颗粒,再通过光学显微镜、扫描电镜、激光粒径分析仪分析颗粒在胶体系统中的分散情况.结果 高速均质和高速高压均质聚乙烯醇组粒径分布(d50)分别为(5.410±0.487)μm和(0.389±0.034)μm,高速均质和高速高压均质偏磷酸钠-柠檬酸盐缓冲液组粒径分布(d50)分别为(5.505±0.854)μm和(0.204±0.020)μm.联合均质结果缓冲液组粒径分布小于聚乙烯醇组,颗粒表面光滑平整;比表面积与之相反,聚乙烯醇组低于缓冲液组.结论 偏磷酸钠-柠檬酸盐缓冲液作为乳化-溶剂挥发法制备胰岛素纳米载药颗粒的外水相,能够获得更好的分散体系.
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Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖的抑制作用
目的 研究Bcl-2、C-Raf及双靶点的RNA干扰质粒对人结肠癌HCT-8细胞株增殖的抑制作用.方法 利用Ambion公司网上设计软件,分别以Bcl-2和C-Raf为靶标,设计合成63个核苷酸的双链RNA,构建质粒pSilencer 3.1-H1/Bcl-2、pSilencer 3.1-H1/C-Raf及pSilencer 3.1-H1/Bcl-2/C-Raf,分别转染结肠癌细胞株HCT-8,用MTT法检测其对细胞增殖的抑制作用,RT-PCR检测Bcl-2和C-Raf的mRNA转录.结果 经MTT法检测,构建的Bcl-2和C-Raf基因及双靶点RNAi质粒3个转染组的细胞存活率均降低,双靶点质粒转染组较两个单靶点转染组细胞存活率明显降低,差异有显著意义.经RT-PCR检测,转染双靶点质粒后,HCT-8细胞中Bcl-2和C-Raf基因的表达均较对照组明显减弱.结论 Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖有抑制作用.
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构建大容量噬菌体抗体库及获得人源抗体的策略
构建大容量噬菌体抗体库,可实现不经免疫直接制备针对任意抗原的人源性抗体.本文综述了噬菌体抗体库技术的原理、抗体库的构建方法、不经免疫制备人源抗体的策略以及提高抗体体外亲和力的方法.
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表位疫苗的设计与优化
表位疫苗是近年发展起来的一种独特的疫苗设计思路,其安全性好,诱发的免疫应答针对性强.要发挥表位疫苗中各表位的功能,合理的设计至关重要.本文就表位疫苗的设计及优化作一简要综述.
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两种脂质体制备方法对碱性成纤维细胞生长因子活性的影响
目的 考察两种脂质体制备方法对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)活性的影响.方法 采用薄膜分散法和冻干重建法制备bFGF脂质体,MTT法检测两种方法制备的脂质体中bFGF的活性.结果 薄膜分散法和冻干重建法制备的bFGF脂质体活性分别为1.99×107和1.94×107 IU/ml.与对照bFGF水溶液相比,两种脂质体制备方法均未降低bFGF活性,且包封率与粒径差异无显著意义.结论 采用薄膜分散法和冻干重建法制备bFGF脂质体,对其活性均无影响.
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纯化胸腺肽抗白色念珠菌的效果
目的 观察纯化胸腺肽抗小鼠感染白色念珠菌的效果.方法 选取昆明小鼠,建立白色念珠菌感染模型,感染浓度为0.5×106个/ml,实验分纯化胸腺肽组、胸腺肽组及空白对照组,实验组给药剂量为1.5 mg/kg,对照组接种0.5 ml生理盐水,感染前后10 d,隔天肌肉注射,观察小鼠各项生命指标及抗感染效果.在后一次注射后第8天,检测各组小鼠血清溶菌酶含量.结果 纯化胸腺肽组各项生命指标均优于胸腺肽组及空白对照组,小鼠血清溶菌酶含量均显著高于空白对照组和胸腺肽组.结论 纯化胸腺肽抗白色念珠菌感染的效果优于胸腺肽.
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B.abortus 544A和B.melitensis 16M多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备高效价、高纯度的布鲁菌多克隆抗体,作为检测布鲁菌的诊断试剂.方法 采用弗氏佐剂乳化抗原家兔背部皮下多点免疫,制备抗体,纯化后用SDS-PAGE进行鉴定,ELISA法检测抗体水平,紫外分光光度仪检测蛋白质含量,AlphaScreen Rabbit IgG Detection Kit检测IgG含量,并计算纯度.结果 SDS-PAGE结果显示多抗片段大小与预期相符,B.melitensis 16M和B.aborius 544A抗体效价分别为1∶25 600和1∶51 200,纯化后抗体蛋白含量分别为11.32和14.03 mg/ml,IgG含量分别为10.45和13.12 mg/ml,且纯度分别达到92.3%和93.5%.结论 已获得高效价、高纯度的多克隆抗体IgG,为建立布鲁菌免疫检测方法奠定了基础.
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流感疫苗(WHO新立场性文件)
遵照为成员国在健康政策方面提供建议的要求,WHO定期发布一系列有关疫苗和联合疫苗的新立场性文件,这些疫苗是指可预防对全球公共健康造成危害的疾病的疫苗.这些文件主要是针对大规模免疫接种疫苗的使用,而不是针对主要由小型私营单位来完成的小规模接种,尽管后者对国家免疫计划也可起到一定补充作用.这些文件主要汇总了有关疾病和疫苗的背景资料,并就该疫苗在全球范围内的使用表明了WHO的立场.文件已经由WHO内外的专家进行了审定,主要适用于从事国家公共健康管理的官员和计划免疫部门的管理人员,也可能会引起国际基金会、疫苗制造业、医学界和科学媒体的兴趣.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
