中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人前列腺癌PC-3细胞膜蛋白组学的分析
目的 分析人前列腺癌PC-3细胞中的所有膜蛋白,全面展示PC-3细胞中的蛋白质表达谱.方法 采用一维SDS-PAGE,结合高效液相色谱-串联质谱的方法,分离并鉴定PC-3细胞中的膜蛋白.结果 在严格的过滤参数条件下,PC-3细胞中鉴定出2 172种蛋白,其中1 499种经过基因本体评注(GOA)显示为已知细胞组分,其余为未知细胞组分.在已知细胞组分中,564种(37.6%)蛋白为质膜蛋白,其中138种为跨膜蛋白.跨膜蛋白中,21.17%被预测至少有1个跨膜区,57.66%有1～3个跨膜区,30.66%有4～9个跨膜区,11.66%有不少于10个跨膜区.许多新的蛋白也被鉴定,其中包括假设蛋白和一些cDNA序列.结论 这些被鉴定蛋白的生物学功能和理化性质将有助于进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制,为寻找与前列腺癌转移相关的分子提供新的实验证据.
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携带人白细胞介素-1受体拮抗剂基因腺病毒质粒的构建
目的 构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒.方法 用EcoRⅤ和Hind Ⅲ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1Ra cDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/h IL-IRa.经PmeⅠ酶切线性化,穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,二质粒在细菌内同源重组,得到重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.脂质体介导pAd/hIL-1Ra质粒转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染HEK293细胞扩增病毒后,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、纯度及滴度.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭质粒和重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.扩增纯化后,重组腺病毒颗粒数为1.19×1011 OPU/ml,A260/A280为1.279,滴度为3.6×109 CCID50/ml.结论 已成功构建重组腺病毒质粒pAd/hIL-1Ra,为hIL-1Ra基因在腺病毒载体介导下的免疫抑制治疗研究奠定实验基础.
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牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞一氧化氮系统的影响
目的 观察牛磺酸(Taurine,Tau)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblast,CFb)增殖的过程中对诱导型一氧化氮合酶-一氧化氮(iNOS-NO)系统的影响,以揭示Tau抑制CFb增殖的初步机制.方法 胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb,用AngⅡ诱导促进其增殖,采用MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量;ELISA法测定转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的含量;流式细胞仪检测细胞周期;硝酸还原酶法、分光光度法和免疫荧光法检测CFb NO含量、一氧化氮合酶(iNOS)活性和iNOS蛋白的表达.结果 Tau(40、80和160 mmol/L)可抑制AngⅡ诱导的CFb增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白含量增多,同时使细胞G0/G1期百分率增加,S期细胞百分率降低,并明显提高CFb NO含量、iNOS的活性及iNOS蛋白的表达量,且呈现剂量依赖性.结论 牛磺酸通过提高CFb iNOS-NO系统的活性,拮抗AngⅡ的部分生物效应,致使CFb的增殖和胶原合成受到抑制.
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百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性片段的筛选、克隆与表达
目的 筛选百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性的片段,并对其进行克隆及表达.方法 采用生物信息学软件对丝状血凝素分子的结构进行预测,从中筛选出具有强免疫原性的片段FHAs.经PCR扩增,T-A克隆后,构建表达质粒pET-22b(+)-FHAs,酶切鉴定正确后测序.将测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE分析及Western blot鉴定.结果 从丝状血凝素分子中筛选出具有138个氨基酸的肽段FHAs,经PCR扩增,得到约400 bp的目的基因片段,构建的重组质粒经双酶切和测序鉴定,证明质粒构建正确,重组工程菌pET-22b(+)-FHAs/BL21经IPTG诱导,目的蛋白的表达量在50%以上,主要以包涵体形式存在.Western blot分析证实该蛋白能与抗FHA单抗发生反应.结论 筛选出的肽段FHAs具有强的免疫原性和免疫反应特异性,为百日咳基因工程疫苗的研究奠定了基础.
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猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白功能性片段的原核表达及其免疫保护性
目的 表达猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的功能性片段(tmrp),并检测其对小鼠的免疫保护性.方法 将构建的重组克隆载体pMD-tmrp经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将切下的目的基因tmrp亚克隆至原核表达载体pGEX-3X中,转化E.coliBL21(DE3),鉴定正确后,用IPTG诱导,谷胱甘肽亲和层析纯化GST-tmrp,免疫BALB/c小鼠,测定其免疫保护率.结果 阳性工程菌经IPTG诱导,表达了可溶性目的蛋白,相对分子质量约为73 000.0.8 mmol/L IPTG,37℃,pH7.2诱导4 h,表达量高,为25.36%.经亲和层析纯化,融合蛋白纯度达93.7%.免疫BALB/c小鼠后,免疫保护率可达60%.结论 已成功获得了具有免疫活性的GST-tmrp.
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大肠杆菌色氨酸操纵子基因的克隆与表达
目的 克隆并表达大肠杆菌色氨酸操纵子基因,提高其酶活性.方法 利用PCR方法,从大肠杆菌31 884基因组中直接克隆出色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pET-22b(+)中,构建重组质粒pET-22b(+)-Trp operon,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析,并测定酶活性.结果 凝胶电泳可见PCR扩增产物大小约为7 000 bp,SDS-PAGE鉴定目的蛋白分别得到了表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了2.7和3.2倍.结论 已成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-Trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性在大肠杆菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础.
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马立克病潜伏期L-meq基因对CEF细胞p53 mRNA转录水平的影响
目的 研究鸡马立克病(MD)潜伏期L-meq基因对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)p53 mRNA转录水平的影响,并探讨L-meq基因与端粒酶活性的关系.方法 构建真核转染质粒pcDNA-L-meq,转染CEF细胞,采用实时荧光相对定量RT-PCR法检测MD潜伏期L-meq基因对CEF细胞p53 mRNA转录水平的影响,并用改进的TRAP法检测端粒酶活性.结果 质粒pcDNA-L-meq经PCR及双酶切鉴定,均可见大小为1 200 bp的特异性片段.L-meq基因能激活CEF细胞中p53 mRNA的转录,在转染后48和72 h,p53 mRNA的转录水平较相应的内参照升高,但在转染后72 h,p53 mRNA转录水平降低,其RQ值由48 h的0.15下降为72 h的0.05.转染L-meq基因48和72 h后,CEF细胞中端粒酶活性均比对照组稍微升高,但在48 h的端粒酶活性比72 h的稍高.结论 鸡马立克病潜伏期L-meq基因能微弱地刺激端粒酶活性和p53 mRNA转录.
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甘油脱水酶α亚基基因的克隆、表达及纯化
目的 克隆甘油脱水酶α亚基基因,构建表达载体,表达并纯化融合蛋白.方法 采用PCR技术克隆甘油脱水酶α亚基gldA基因,并将其重组到含组氨酸标签的表达质粒pET-32a(+)中.将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达.表达产物经金属螯合层析柱纯化,并进行Western blot分析及活性检测.结果 重组表达质粒pET/gldA经酶切鉴定及序列分析,证明构建正确.转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达,融合蛋白相对分子质量约81 000,与预期大小一致.经Western blot分析,纯化蛋白能与6-Histidine抗体产生特异性免疫反应.α亚基经检测,未显示活性.结论 已成功获得甘油脱水酶α亚基蛋白,为进一步研究其生物学性能奠定了基础.
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2007年吉林省散发野型麻疹病毒H基因序列分析
目的 分析2007年吉林省散发野型麻疹病毒的基因型别和特征.方法 对2007年吉林省分离到的3株散发麻疹野型病毒,经RT-PCR扩增血凝素(H)基因片段,克隆到pMD19-T载体,进行酶切鉴定及序列测定,并分析核苷酸序列,与GenBank中麻疹病毒的22个代表株H基因序列的同源性进行比较.结果 RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见大小约为570 bp的片段,克隆至pMD19-T载体后,酶切鉴定结果与预期相符.3株麻疹病毒均属H1基因型,其H基因之间同源性为98.5%～99.6%,与其他已知麻疹病毒的22个基因代表株相比,在核苷酸水平上大变异为9.7%.3株病毒与H1a参考株Chin93-2、H1b参考株Chin94-5和H1c参考株Chin94-7的平均遗传距离分别为0.007～0.015、0.013～0.021和0.015～0.023.结论 H1a基因型毒株是导致吉林省2007年春季麻疹散发的优势毒株.
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丙型肝炎病毒NS5B全长基因及截短形式基因的克隆、表达及鉴定
目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-FL、NS5B-C21和NS5B-C51重组原核表达载体,并进行目的蛋白的表达及鉴定.方法 利用PCR技术扩增3种长度的NS5B基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,并进行纯化及鉴定.结果 所构建的3种重组质粒pET-28a(+)-NS5B-FL、pET-28a(+)-NS5B-C21和pET-28a(+)-NS5B-C51,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经PCR及酶切鉴定,均能扩增或酶切出相应大小的目的基因片段,表达的6His-NS5B-FL融合蛋白主要以包涵体形式存在,而表达的6His-NS5B-C21和6His-NS5B-C51融合蛋白的可溶性明显增加.纯化的6His-NS5B-C21蛋白未发生降解,6His-NS5B-FL和6His-NS5B-C51蛋白发生了部分降解.纯化后的3种蛋白均能与丙肝患者血清发生反应.结论 已成功构建了3种NS5B基因的重组表达载体,并获得了目的蛋白表达,为进一步抗HCV药物的筛选奠定基础.
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单克隆抗体人源化的进展及应用
鼠源性单克隆抗体由于可引起免疫反应而逐渐被人源化抗体所代替,本文介绍了几种人源化抗体构建的策略和表达系统以及人源化抗体在临床方面的应用.
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siRNA作为小分子药物的研究现状
RNA干扰(RNAi)主要通过长度只有21～22个核苷酸的小分子干扰RNA(siRNA)与含其互补序列的基因相结合,并抑制该基因的表达,将设计过的siRNA双链作为药物,通过病毒载体表达siRNA前导序列,经细胞间的传递到达药物作用部位,从而达到基因治疗的目的.本文对以siRNA小分子为基础的药物研究进展及其应用的潜在障碍进行了综述.
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红细胞代用品的研究进展
近年来国内外多家研究机构在红细胞代用品的研究上取得了可喜的进展,其中血红蛋白氧载体、全氟碳化合物和血红蛋白微囊三大类有着良好的发展前景,为缓解日益紧张的血源供应和解决输血引起的副作用问题提供了可能.本文对红细胞代用品的结构、性质及临床应用的研究进展作一综述.
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一种提取猪血铜锌超氧化物歧化酶的新方法
超氧化物歧化酶(SOD)在我国目前虽有生产,但由于技术原因,产量很低,在临床上很少应用.为此,本文从猪血中提取出Cu,Zn-SOD,采用凝胶层析的方法,一步即可生产出纯酶.
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镉离子多克隆抗体ELISA竞争法的初步建立
目的 制备抗镉离子螯合物的多克隆抗体,初步建立检测镉离子的ELISA竞争法.方法 用双功能螯合剂iEDTA螯合Cd2+后,再与匙血蓝蛋白(KLH)偶联,合成完全抗原(Cd-iEDTA-KLH),免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体.ELISA法检测其抗血清效价、特异性和灵敏度.结果 多克隆抗体效价均大于1∶80 000;特异性检测结果显示均产生了抗Cd-iEDTA抗体,与OVA、BSA无交叉反应.抗体除与Hg2+有较强的交叉反应外,同等抑制情况下,Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Ni2+、Zn2+与Cd2+浓度相差约1 000倍,交叉反应率很低;ELISA竞争法对镉离子的检测限约为50 ng/ml.结论 初步建立了镉离子的ELISA竞争法,检测限达到无公害的国家卫生限量标准(100 ng/g).
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重组人睫状神经营养因子的纯化
目的 纯化重组人睫状神经营养因子(rhCNTF).方法 破菌液上清经硫酸铵分级沉淀和G-25脱盐后,用Q Sepharose FF阴离子交换层析初纯,再经Superdex 75 prep grade凝胶过滤精制,并对纯化产物进行各项检测.结果 纯化的rhCNTF纯度达95%以上,蛋白浓度约为2 mg/ml,收率约30%,相对分子质量21 600,等电点为6.15,与理论值相符合.Western blot检测证明纯化蛋白能够与特异性抗体结合,并能够明显刺激鸡胚背根神经节突触生长.结论 采用盐析、离子交换、凝胶过滤等方法有机组合,成功分离纯化了rhCNTF蛋白.
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铝吸附流感疫苗中血凝素含量检测方法的建立
目的 建立铝吸附流感疫苗中血凝素(HA)含量的检测方法.方法 选用不同的解离液,在不同的条件下对铝吸附疫苗进行解离,以单向免疫扩散法(SRID)检测血凝素含量,比较回收效果,并对选取的解离方法进行初步验证.结果 经解离液A处理后,测定HA的回收率为71%～80%,而解离液B的回收率在96%～110%之间.对不同温度、作用时间等考察,终确定以解离液B在室温解离2 h后进行检测.该方法试验内和试验间变异系数均小于20%.结论 采用解吸附结合传统SRD方法测定铝吸附流感疫苗中HA含量,重复性好,准确度高,可代替动物接种法.
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冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的稳定性
目的 观察冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存的稳定性.方法 将冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗放置在2～8℃条件下30个月,定期取样,观察其物理外观,进行鉴别试验,并测定多糖含量、分子大小、水分含量、异常毒性等质量控制指标,评价疫苗质量的稳定性.结果 冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗于2～8℃30个月保存,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准.结论 冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存,其质量稳定.
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流感裂解疫苗纯化及裂解工艺的优化
目的 优化大规模生产的流感病毒裂解疫苗的纯化及裂解工艺.方法 比较凝胶层析和蔗糖密度梯度超速离心的纯化效果,以及Triton X-100和去氧胆酸钠两种裂解剂在不同条件下的裂解效果.结果 层析法纯度稍高于蔗糖密度梯度超速离心法,而蔗糖密度区带超速离心法的收率优于层析法.Triton X-100的裂解效果优于去氧胆酸钠,裂解剂浓度为0.5%或0.8%,裂解3或4 h,裂解率达90%以上.疫苗在4℃保存1年后,所有检测项目均合格,4℃保存18个月和37℃保存28 d后,HA含量仍保持在30 μg/ml以上.结论 已建立了切实可行的流感病毒裂解疫苗规模生产的纯化及裂解工艺.
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伏立康唑PLGA纳米微粒的制备及其形态和释放特点分析
目的 制备伏立康唑PLGA纳米微粒,并分析其形态及释放特点.方法 采用乳化-溶剂挥发法制备伏立康唑PLGA纳米微粒,用激光粒径分析仪及扫描电镜分别进行分散性和形态学分析,经HPLC分析其载药量及释放特点.结果 经激光粒径分析,样品粒径峰值为(126±20)nm,分布指数为1.5.电镜观察颗粒分布均匀,表面光滑.HPLC分析载药量为(1.9±0.6)%,包封率约为12%,24 h内存在突释,第2天到第8天缓慢释放.结论 已成功制备了伏立康唑PLGA纳米微粒,能实现缓慢释放,减少给药次数的目的.
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人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究
目的 研究人参皂苷Rh2(G-Rh2)对人胃癌细胞SGC-7901的影响.方法 采用MTT法检测G-Rh2对SGC-7901细胞存活率的影响;流式细胞分析法检测凋亡小体的含量;免疫印迹技术及体外Caspase-3/-7活力测定方法检测Caspase 的激活状态.结果 G-Rh2对SGC-7901细胞生长有明显的抑制作用,且呈量-效关系,IC50为9.3 μg/ml.7.5 μg/ml G-Rh2作用SGC-7901细胞24 h,凋亡细胞数量为6.97%.7.5 μg/ml G-Rh2作用SGC-7901细胞20 h,出现多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly (ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂,Caspase-3/-7活力开始出现,并随作用时间的延长而增强.结论 G-Rh2诱导Caspase参与SGC-7901细胞凋亡.
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新生牛肝活性肽对小鼠的免疫增强作用
目的 观察新生牛肝活性肽对小鼠免疫功能的调节作用.方法 采用清洁级ICR小鼠,分别经口给予2.08、4.16和12.48 ml/kg 3个剂量的新生牛肝活性肽,以生理盐水为对照组,通过淋巴细胞转化试验、小鼠迟发型变态反应试验、血清溶血素测定、抗体生成细胞检测、小鼠碳廓清试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验及NK细胞活性测定来评价其对小鼠的免疫增强作用.结果 3个剂量组均能促进淋巴细胞增殖,中、高剂量组能增强小鼠迟发型变态反应强度和小鼠血清溶血素作用,提高溶血空斑数及NK细胞活性,但对小鼠的碳廓清能力及腹腔巨噬细胞的吞噬能力无明显影响.结论 新生牛肝活性肽能增强小鼠的免疫功能.
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人用无佐剂狂犬病疫苗的接种反应及免疫效果
目的 观察人用无佐剂狂犬病疫苗的接种反应及免疫效果.方法 使用无佐剂CTN-Ⅳ株Vero细胞疫苗和无佐剂AG株原代地鼠肾细胞疫苗免疫健康成人,按暴露后全程免疫程序接种,Vero细胞疫苗接种41人,地鼠肾细胞疫苗接种32人,观察其接种反应及免疫效果.结果 接种人用无佐剂狂犬病疫苗后,无严重局部或全身不良反应出现.首剂免疫后14 d,两组疫苗抗体阳转率均达100%,中和抗体滴度分别为7.29和6.35 IU/ml,二者差异无显著意义.结论 无佐剂狂犬病疫苗接种后无严重不良反应出现,且免疫效果良好.
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丙型肝炎病毒核心总抗原检测试剂的评价
目的 评价国外丙型肝类病毒核心抗原检测试剂盒的质量以及窗口期检测核心总抗原(HCVcAg Trak-C)的意义.方法 用该试剂检测8 649份自然献血员及566份HCV可疑感染者血清的核心总抗原,并与抗体试剂(Anti-HCV)、游离抗原(HCV free Ag)试剂、核酸(HCV RNA)试剂进行比较.结果 筛出核心总抗原和抗体同时阳性血清152份,抗体阴性而总抗原阳性血清5份.利用RNA试剂检测这5份血清,结果 HCV RNA阳性.利用HCV free Ag试剂检测这9 215份血清,发现2份阳性,其中1份为抗原和抗体同时阳性,RIBA检测确证这份血清产生的是核心区抗体.另1份为单独抗原阳性.结论 在应用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时使用HCVc Ag试剂检测,可以减少因窗口期造成的漏检.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
