cGAMP可显著增强针对诺如病毒(GⅡ.4)病毒样颗粒抗原的体液免疫应答

目的 评价环二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, cGAMP)在诺如病毒(GⅡ.4) 病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效应.方法 将cGAMP和铝盐佐剂(氢氧化铝)分别与不同剂量诺如病毒(GⅡ.4)VLPs抗原配伍,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过测定免疫血清中抗VLPs特异性IgG抗体及其亚型,检测阳性血清中模拟中和抗体水平,比较两种佐剂对VLPs抗原免疫效果的促进作用.结果 以cGAMP为佐剂,VLPs可诱导较高的血清特异性IgG抗体应答;用相同剂量VLPs抗原免疫,配伍cGAMP佐剂诱导的IgG抗体应答水平明显高于铝佐剂,cGAMP配伍低剂量VLPs加强免疫后诱导的IgG抗体水平与铝佐剂配伍高剂量VLPs相当,模拟中和抗体水平与血清IgG水平相对应.结论 cGAMP可显著增强针对诺如病毒(GⅡ.4)VLPs的特异性体液免疫应答,其佐剂活性高于传统铝佐剂,是一种有望应用于疫苗研发的新型佐剂.

免疫佐剂作用机制研究新进展

免疫佐剂能够增强机体对抗原的免疫应答反应,对于提升疫苗作用效果具有重要意义.新型佐剂的出现极大地推动了疫苗的研发进程,同时也促进了佐剂机理研究的新热潮.本文综述了近年来对传统铝佐剂与新型佐剂作用机制研究的新进展,旨在为疫苗研发中合理选择佐剂提供参考.建议在疫苗研发过程中还应继续加强免疫佐剂作用机制的研究,促进对疫苗佐剂安全性认识,处理好效益-风险关系,保持临床有效性与不良反应之间的平衡.

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响

目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响.方法 选取49只雌性ICR小鼠,分7组,每组7只,这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组,分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平.结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体,并且趋势为先升高后降低,且在免疫后的第8周高;第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组,且差异均具有统计学意义(P＜0.05),并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组,并具有统计学意义(P＜0.05),其中甘油-3-磷酸2 mg为佳剂量组,其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组,且在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值,抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382).结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用,能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答,是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂.

铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响

目的：探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。方法：BABL／c小鼠随机分为VLPs实验组、明矾佐剂实验组、PBS对照组和明矾佐剂对照组。实验组小鼠分别采用HBoV1 VP2 VLPs和HBoV1 VP2 VLPs加明矾佐剂肌肉注射免疫，对照组小鼠同期注射等量明矾佐剂或PBS缓冲液；实验8周后ELISA检测两实验组特异性IgG抗体效价和活性，ELIspot检测两实验组特异性细胞免疫反应强度，从细胞免疫和体液免疫强度探讨铝佐剂对HBoV1 VP2 VLPs诱导小鼠免疫应答的影响。结果：明矾佐剂降低HBoV1 VP2 VLPs诱导细胞免疫反应强度（P＜0．001），增强HBoV1 VP2 VLPs诱导的血清IgG效价（ P＜0．01）和IgG活性（ P＜0．05）。结论：明矾佐剂使HBoV1 VP2 VLPs诱导的体液免疫反应增强而细胞免疫反应减弱。 HBoV1 VP2 VLPs作为预防性疫苗使用时应添加明矾佐剂，作为治疗性疫苗使用时应不加明矾佐剂。

3型肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的研制

目的：研制3型肺炎球菌荚膜多糖－CRM197结合疫苗。方法：将3型肺炎球菌的荚膜多糖与蛋白CRM197通过化学方法偶联结合，制备成多糖蛋白结合疫苗并使用该疫苗免疫幼小鼠。结果：经过实验条件的考察，发现在85℃，0．2mol／L 乙酸水解处理多糖1 h，活化度为10．0，投料比为20∶10时制得的疫苗，在小鼠体内产生了高滴度的抗体。结论：该实验条件下制备的结合疫苗保留了完好的抗原性，以本工艺条件制备3型肺炎球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗是可行的。

铝佐剂效应的影响因素及铝佐剂疫苗改进的研究进展

铝佐剂是目前应用为广泛的疫苗佐剂,但其促进免疫反应的机制及其影响因素尚未完全明确.铝佐剂作用机制的前期研究主要集中于储存库效应、促吞噬效应及炎性反应等.进一步研究发现,铝佐剂在机体的固有免疫、获得性免疫、补体系统的反应中均发挥一定作用.除铝佐剂自身因素之外,抗原方面及铝佐剂与抗原的相互作用等均对其效应存在影响.在了解铝佐剂的特点、作用机制及其影响因素的基础上,研究人员正致力于通过改变铝佐剂的理化性质、优化疫苗配方等途径来确保铝佐剂疫苗工艺的稳定性和良好的免疫原性.本文就铝佐剂的作用机制、影响其效应的主要因素及铝佐剂疫苗的改进作一综述.

铝吸附流感疫苗中血凝素含量检测方法的建立

目的 建立铝吸附流感疫苗中血凝素(HA)含量的检测方法.方法 选用不同的解离液,在不同的条件下对铝吸附疫苗进行解离,以单向免疫扩散法(SRID)检测血凝素含量,比较回收效果,并对选取的解离方法进行初步验证.结果 经解离液A处理后,测定HA的回收率为71%～80%,而解离液B的回收率在96%～110%之间.对不同温度、作用时间等考察,终确定以解离液B在室温解离2 h后进行检测.该方法试验内和试验间变异系数均小于20%.结论 采用解吸附结合传统SRD方法测定铝吸附流感疫苗中HA含量,重复性好,准确度高,可代替动物接种法.

壳聚糖纳米粒在甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白疫苗中的应用

目的 探讨壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒作为甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC的佐剂对小鼠的免疫效果.方法 采用离子交联法将甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC与CS结合制成CS纳米粒,扫描电镜观察纳米粒外观,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径和多分散系数,BCA法测定其包封率.将CS纳米粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a水平.结果 载蛋白CS纳米粒粒径约为300 nm,包封率达85％以上.NmpC和PagC的CS免疫组小鼠血清IgG抗体滴度远高于铝佐剂组,产生的IgG1和IgG2a抗体滴度也均高于相应的铝佐剂免疫组,且差异均有统计学意义(P＜0.05);IgG1和IgG2a之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CS纳米粒作为新型疫苗佐剂可用于甲型副伤寒蛋白疫苗的研究.

生物可降解微球作为HPV-E7蛋白免疫佐剂的研究

目的:对聚乳酸聚羟基乙酸(PGLA)作为疫苗运输载体进行免疫学评价.方法:用复乳法制备PLGA微球,通过表面吸附人乳头状瘤病毒(HPV)E7蛋白制备成聚乳酸聚羟基乙酸(PGLA)微球,考察粒径分布情况及体外释放水平,通过皮下免疫注射途径免疫C57BL/16小鼠,用间接ELISA法检测免疫鼠血清中的抗体水平,由此评价PLGA微球疫苗运输载体的佐剂效应..结果:复乳法制备的PLGA微球表面光滑,大小均匀,包封率20.1%,注射小鼠6周后(第2周加强免疫1次),微球疫苗诱导产生的IgG1抗体水平较同剂量的铝佐剂组和溴化二甲基双十八胺(DDA)组明显升高,(平均滴度分别为3805、1270、2262);微球疫苗诱导产生IgG2b的抗体水平明显高于铝佐剂组,略低于DDA组,(平均滴度分别为1131、475、2653)而IgG2c的抗体量高于铝佐剂组和DDA组(平均滴度分别为150、36、106).结论:人乳头状瘤病毒E7蛋白聚乳酸羟基乙酸微球作为疫苗输送体系可以明显的提高抗原的免疫原性.

正确认识预防接种的一般反应

疫苗接种的目的是激发人体产生对某种传染病的免疫力,在预防或消灭传染病中效果显著,功不可没.接种疫苗后,机体有时会出现不同程度的局部反应和轻微的发热等全身症状,这是人体正常免疫应答的表现之一.一个理想和受欢迎的疫苗,应在接种后使人体产生佳免疫力的同时,仅出现低微的反应性.疫苗的成分除含特定的抗原外,还有一些附加物,如铝佐剂、防腐剂和保护剂等,也有可能引起一系列生理病理反应.使用方法和个体因素也是产生反应的潜在根源[1].按照疫苗反应的分类,异常反应发生极少或罕见,应予重视;对一般反应只要正确处理而不必担心.

091 铝佐剂或加强剂量对Ⅲ型B群链球菌结合疫苗免疫原性的影响

079 重组hRSV亚单位疫苗BBG2Na吸咐于含铝佐剂的新型双极模式

093恒定pH条件下沉淀制备的磷酸铝佐剂的理化特性

092恒定pH条件下沉淀制备的磷酸铝佐剂的组成和结构

含铝佐剂疫苗的全球性影响

儿童期疫苗可预防疾病的免疫预防已对儿童健康产生了巨大影响.在扩大免疫规划中所使用的许多疫苗含有铝佐剂,这些佐剂在有效使用基础疫苗中起重要作用.本文讨论了广泛使用的铝佐剂及其对疫苗可预防疾病的作用.

疫苗中的铝佐剂专题讨论会

2000年5月11～12日波多黎各国家疫苗计划办公室在圣胡安主办了一个有关疫苗中铝佐剂的专题讨论会.参加会议的有疫苗学家、免疫学家、金属专家、病理学家、风湿病学家和其他有关学者.会议的目的是:(1)确立对疫苗中铝佐剂的作用和需要的正确理解;(2)探究疫苗中铝佐剂使用造成不良反应的可能性;(3)制订一项研究计划,以扩展铝佐剂对人体影响的现有认识.

铝佐剂特性及其研究进展

铝佐剂吸附抗原主要通过静电作用和磷酸配位基交换作用,但吸附量和吸附强度与免疫反应并不呈正比关系.常温下,铝佐剂的稳定性即使随存储时间延长有所降低但并不一定会影响疫苗的免疫增强效应.高温下暴露时间过长对铝佐剂的稳定性影响较大,磷酸盐等缓冲盐能提高含铝佐剂疫苗在高温时的稳定性.铝佐剂的磷酸化处理、纳米铝佐剂的制备和疫苗干粉制剂可提高其免疫增强效应和含佐剂疫苗的稳定性.本文简要综述铝佐剂与抗原的相互作用、相关稳定性研究及铝佐剂的发展趋势.

疫苗中铝佐剂的危害性研究进展

铝佐剂疫苗被长期广泛应用于全球儿童计划免疫中,但疫苗中铝佐剂所致的毒副反应尤其是神经系统毒副反应尚未引起学术界的普遍重视.此文对疫苗中铝佐剂与巨噬细胞肌筋膜炎及慢性疲劳、认知功能障碍、海湾战争综合征、自闭症、克罗恩病、皮肤淋巴组织增生症、急性类肉瘤状病及其他局部病变等的相关性进行综述.

铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究

目的 建立铝吸附甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗中甲肝病毒(HAV)抗原的解离方法.方法 选择20％二乙醇胺1.25 mL、10％Triton X-100 0.2 mL和PBS 8.55 mL混合液作为解离液A;pH7.2的3％(w/v)柠檬酸缓冲液作为解离液B;20％(w/v)柠檬酸三钠为解离液C.分别检测3种解离液在不同的解离条件下对铝佐剂甲型肝炎灭活疫苗的解离情况,用ELISA法检测解离后的HAV抗原含量,计算抗原回收率,确定佳解离液及解离条件,并验证其可重复性.结果 3种解离液HAV抗原解离试验显示,解离液C在室温(20～28℃)条件下解离1h,HAV抗原的回收率高,可达95％及以上,重复试验的变异系数均＜10％.结论 20％ (w/v)柠檬酸三钠可作为铝佐剂甲肝灭活疫苗的首选抗原解离剂,该解离剂配方简单,操作简便,结果重复性好,准确度高.

铝佐剂Aβ42及其亚单位疫苗可有效诱导大鼠产生特异性抗体

[目的] 探讨铝佐剂 Aβ 42及其 C端亚单位肽 Aβ 36～ 42疫苗接种大鼠能否产生特异性抗 Aβ 42抗体.[方法] 24只 SD大鼠随机分为 Aβ 42肽疫苗、 Aβ 36～ 42肽疫苗和对照组,每组 8只.将 Aβ 42肽疫苗及 Aβ 36～ 42与七聚赖氨酸耦联制成的亚单位疫苗分别接种于 SD大鼠,对照组用等体积 PBS加铝佐剂.用间接 ELISA法检测大鼠血清和脑匀浆上清液中特异性抗体的滴度;用 Morris水迷宫测试大鼠的行为学变化;用 HE染色观察大鼠的脑、肝、脾和肾组织学变化;用接种后血清与老年性痴呆患者的脑片作免疫组织化学染色.[结果]第 3次接种后 Aβ 42和 Aβ 36～ 42组鼠的血清均开始有抗 Aβ 42抗体产生,抗体滴度随接种次数的增多而增高,第 6次接种后两组鼠血清的抗 Aβ 42抗体滴度均达到 1∶ 1 600以上,同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗 Aβ 42抗体,血和脑匀浆的抗体滴度与对照组相比,差异有显著性 (P< 0.01);对照组、 Aβ 42组和 Aβ 36～ 42组鼠逃避潜伏期分别为 54.81± 17.06、 43.18± 18.70和 52.27± 15.13,差异均无显著性( P >0.05);对照组、 Aβ 42组和 Aβ 36～ 42组鼠平台象限游泳距离占总游泳距离百分比分别为 59.78± 5.68、 65.14± 4.98和 61.34± 4.19,各组间差异也无显著性( P >0.05); 3组鼠的脑、肝、脾和肾均未出现病理性变化; Aβ 42组鼠的血清能结合 AD患者脑组织中的老年斑,而 Aβ 36～ 42组鼠的血清则不能结合老年斑.[结论] 铝佐剂 Aβ 42和 Aβ 36～ 42疫苗均有效诱导 SD大鼠产生特异性的抗 Aβ 42抗体,但两者与老年斑结合的特性不同;实验证实两种疫苗均有良好的安全性.