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CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗免疫效果的影响
目的 研究CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗和解决流感疫苗产能不足的问题提供依据.方法 以不同剂量的2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、氢氧化铝以及CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂为疫苗佐剂免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果.结果 与无佐剂对照组相比,CpG-ODN或氢氧化铝单独使用能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍.CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～ 57倍、9～20倍和16～64倍.根据体液免疫结果,复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍.此外,复合佐剂能够显著增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4+T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8+T细胞的CTL杀伤活性.结论 CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量.
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氢氧化铝与黄连碱复合佐剂对甲肝疫苗诱导小鼠体液免疫影响
目的 探讨氢氧化铝与黄连碱复合佐剂对甲肝疫苗诱导小鼠体液免疫的影响.方法 选取6～8周龄雌性ICR小鼠49只,随机分为空白组、单纯抗原组、单纯黄连碱佐剂组、铝佐剂组及复合佐剂低、中、高剂量组,每组7只;在免疫后第4、8、12、16周,采用间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠分离血清中的抗HAV IgG抗体水平.结果 在免疫后第4、8、12、16周,除空白组外,各组小鼠均能检测到抗HAV IgG抗体,且抗体水平随免疫后时间的延长均先升高而后降低;在免疫后第12周,各组小鼠血清中抗HAV IgG抗体水平达到峰值,单纯抗原组、单纯黄连碱佐剂组、铝佐剂组及复合佐剂低、中、高剂量组小鼠分别为log10(2.908 ±0.413)、log10(2.960±0.315)、log10(3.460±0.295)、log10 (3.460±0.351)、log10(3.470±0.251)、log10 (3.470 ±0.251);在免疫后第4周,复合佐剂低剂量组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P＜0.05);在免疫后第8、12、16周,复合佐剂低、中、高剂量组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P＜0.05);在免疫后第12周,铝佐剂组小鼠抗HAV IgG抗体水平均高于单纯抗原组和单纯黄连碱佐剂组(均P＜0.05);在免疫后第16周,铝佐剂组小鼠抗HAV IgG抗体水平高于单纯抗原组(P＜0.05).结论 适当配比的黄连碱和氢氧化铝复合佐剂可快速、显著提高甲肝疫苗诱导小鼠的体液免疫应答,有望成为一种新的人用疫苗佐剂.
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BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析
目的 初步分析BC02(BCG CpG DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用.方法 采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01 (BCG CpG DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-l(monocyte chemotactie protein 1,MCP-1)细胞因子水平和mRNA转录水平的影响.信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况.结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/mL BC01+20 μg/mL Al(OH)3]和24 h.Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力.信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-KB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p 100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平.结论BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用.
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氢氧化锌与低分子量透明质酸复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原的体液免疫增强作用
目的 探讨氢氧化锌与低分子量透明质酸(Low molecular weight hyaluronic acid,LHA)复合佐剂对甲肝乙肝联合抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响.方法 在甲肝乙肝联合抗原中加入不同配比的Zn(OH)2与LHA复合佐剂,经皮下免疫ICR小鼠,并设铝佐剂组、生理盐水对照组和单纯抗原组.分别于免疫后4、8、12和16周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清抗-HAV IgG和抗-HBsAg IgG水平.结果 除对照组小鼠血清检测不到抗-HAV IgG抗体外,其余各组小鼠血清抗-HAV IgG水平在12周时达峰值,抗-HBsAg IgG水平在8周时达峰值,以后逐渐下降；免疫后4、8、12和16周,多数复合佐剂组抗-HAVIgG和抗-HBsAg IgG水平与抗原组和铝佐剂组相比,显著增强(P＜0.05).且抗体水平持续时间较长.结论 适当剂量配比的氢氧化锌与LHA复合佐剂能增强甲肝乙肝联合抗原诱导的体液免疫应答.
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不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响
目的 探讨不同佐剂和免疫途径对结核分枝杆菌多表位融合蛋白TP15免疫原性的影响.方法 制备多表位融合蛋白TP15,分别以MF59和hBCG单独或联合作为佐剂,经皮下或肌肉注射BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗TP15特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体,流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中多功能CD4+T细胞含量,夹心ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中细胞因子IL-1β和IL-12的含量.结果 多表位融合蛋白TP15免疫小鼠只产生抗TP15特异性IgG和IgG1抗体,不产生IgG2a抗体.MF59和hBCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射和肌肉注射均能显著提高机体抗TP15特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平,且复合佐剂MF59+ hBCG的免疫效果更佳.MF59和hBCG单独或联合作为TP15抗原佐剂,皮下注射较肌肉注射更有利于产生IgG2a抗体,其中复合佐剂MF59+ hBCG疫苗免疫小鼠产生IgG2a抗体的效果佳,且IgG1/IgG2a值显著低于肌肉注射.MF59和hBCG单独或联合作为TP15抗原佐剂经皮下免疫小鼠,脾淋巴细胞IL-2+ CD4+T细胞含量增加,IL-10+ CD4+T细胞含量减少,腹腔巨噬细胞分泌IL-1β和IL-12水平增强.结论 MF59+ hBCG复合佐剂诱导Th1型细胞免疫漂移,且皮下注射免疫效果优于肌肉注射.
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水油微球/BCG复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响
目的 探讨水油微球与热灭活BCG(heat-killed BCG,HKBCG)或无细胞BCG(acellular BCG,ABCG)复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响.方法 制备水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,经皮下注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周采血,处死小鼠并无菌摘脾;ELISA法检测小鼠血清抗PstS1-LEP的IgG、IgG1和IgG2a抗体,ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经PstS1-LEP刺激分泌IFNγ、IL-4和IL-17的斑点形成细胞数(spots forming cell,SFC).结果 水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠诱导PstS1-LEP特异性IgG、IgG1和IgG2a水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠的IFNγ-SFC、IL-17-SFC及IL-17-SFC/IL-4-SFC均高于水油微球/HKBCG复合佐剂PstS 1-LEP疫苗,而两种疫苗免疫小鼠的IL-4-SFC、IFNγ-SFC/IL-4-SFC和IFNγ-SFC/IL-17-SFC比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗诱导偏向Th1和Th17型细胞免疫,IFNγ-SFC、IL-4-SFC和IL-17-SFC的两两比值显示,水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗更有利于诱导Th17型细胞免疫漂移.
