首页 > 文献资料
-
黄连碱对软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达的影响
目的：观察黄连碱对Sprague Dawley大鼠关节软骨细胞体外增殖及转化生长因子β1mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制。方法取SD大鼠关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组加入含10μm黄连碱的培养基,对照组仅加入普通培养基。培养48小时后在倒置显微镜下观察软骨细胞形态,MTT法检测黄连碱在1,3,5,7天对软骨细胞增殖影响,实时荧光定量PCR分别检测培养7天后实验组和对照组细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果培养48小时后实验组软骨细胞生长密集程度明显优于对照组；MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组；培养7天后实验组转化生长因子β1mRNA表达显著高于对照组。结论黄连碱能促大鼠软骨细胞增殖,并提高转化生长因子β1mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的可能机制之一。
-
黄连碱改善脂肪肝SD大鼠模型的效应及机制研究
目的:观察黄连碱对脂肪肝SD大鼠模型脂代谢指标的影响,探讨作用机制.方法:采用高脂饲养构建SD大鼠脂肪肝模型,随机分组为正常对照组、高脂模型组、黄连碱低、高剂量组(10 mg/kg、50 mg/kg),给药30 d,分析大鼠体重、肝指数、三酰甘油(TG)、肝功能(ALT,AST)及肝脏病理等指标;采用人肝癌HepG2细胞系,蛋白免疫印迹法(WB)观察黄连碱对AMP-活化蛋白激酶(AMPK)蛋白的表达,反转录荧光定量PCR(RT-PCR)方法分析肉碱脂酰转移酶1(CPT-1)mRNA、羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-Coa)mRNA的表达,高效液相色谱(HPLC)测定细胞内AMP的含量.结果:与高脂饮食组比较,黄连碱低、高剂量组均降低了TG水平、改善AST以及肝脏组织学形态,且黄连碱高剂量组效果优于低剂量组.在HepG2细胞中,黄连碱显著提高AMP的浓度,激活AMPK蛋白磷酸化表达,上调CPT-1 mRNA的表达,抑制HMG-Coa mR-NA的表达.结论:黄连碱具有显著改善大鼠脂肪肝的效应,作用机制可能与提高AMP的浓度,激活AMPK信号通路有关.
-
湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化
目的:研究湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的累积变化过程,为标准化种植提供科学依据.方法:采用紫外分光光度法和HPLC测定黄连有效成分.结果:随着生长龄期的增长,黄连叶片数、根茎干重都在不断的增加；黄连不同部位中总生物碱含量的由大到小的顺序依次是根茎＞须根＞叶片；在黄连2～3龄阶段为黄连生长旺盛的时期,酪氨酸、总生物碱、小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量增长速度快；在5龄阶段,这4种生物碱含量的大小顺序依次是小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀,且这4种生物碱含量之和占总生物碱含量的比例在不断增加.结论:为黄连的种植管理提供了参考.
-
双波长HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中6种生物碱的含量
目的:建立HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱6种生物碱含量的方法.方法:Waters Symmetry ShieldTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(A)-水(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(B)梯度洗脱,体积流量1.0 mL· min-1,检测波长345,270 nm,柱温25℃.结果:木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱线性范围分别为0.012 06 ～0.241 2,0.038 24 ～0.7648,0.088 02 ～1.760 4,0.016 55～0.331 0,0.036 08～0.721 6,0.189 41 ～3.788 2μg(r≥0.999 8),平均加样回收率95％～105％.结论:方法专属性强、灵敏度高、重复性好、简便易行,可用于同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,可为金芪降糖片的现代制剂研究和质量控制提供依据.
-
HPLC 同时测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量
目的:测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量.方法:“三热论”复方经HPD 400大孔树脂,分别用10％,30％,60％,90％的乙醇洗脱后,采用HPLC测定4个洗脱部位中5种生物碱的含量.结果:HPD 400大孔树脂纯化后,30％乙醇洗脱部位生物碱含量高.结论:大孔树脂纯化法简单易行,30％纯化部位经HPLC检测,其中生物碱含量高,为有效部位筛选奠定了基础.
-
星点设计-效应面法优化黄连提取工艺
目的:优选黄连提取工艺.方法:以乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间为自变量,以总评“归一值”(包括浸膏得率,小檗碱、黄连碱、黄连总碱的质量分数)为因变量,对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合；采用效应面法优选提取工艺,并对结果进行预测分析.结果:优选的提取工艺为10倍量50％乙醇提取3次,每次50 min.提取率实测值与预测值偏差为-2.27％,二项式拟合r=0.9362.结论:优选的黄连提取工艺简便,预测性良好.
-
黄连饮片标准汤剂的制备及质量标准分析
目的:制备黄连饮片标准汤剂并建立其质量标准,为黄连配方颗粒的制备及其质量标准的建立提供参考.方法:根据中药饮片标准汤剂制备原则制备黄连饮片标准汤剂,计算表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率和饮片出膏率,建立黄连饮片标准汤剂的质量标准.流动相乙腈-0.05 mol·L-磷酸二氢钾溶液(50:50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4g,以磷酸调节pH 3.0),柱温30℃,流速1 mL· min-,检测波长225 nm.结果:黄连饮片中表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率范围分别为79.3％～111.9％,54.6％ ～76.2％,45.7％ ～70.7％和43.5％ ～64.4％,出膏率范围17.1％ ～22.3％,14批黄连饮片标准汤剂特征图谱中有7个共有峰,其相似度均＞0.999.结论:该研究建立的质量评价方法精密度和重复性良好,指纹图谱相似度高,适用于黄连饮片标准汤剂的质量评价.
-
正交试验优选樟帮姜黄连的炮制工艺
目的:优选樟帮姜黄连的炮制工艺,为该饮片的质量标准研究提供参考.方法:采用HPLC测定盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和黄连碱的含量,流动相乙腈-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(28:72),检测波长345 nm.以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄连碱的质量分数和出膏率的综合评分为指标,通过正交试验考察姜汤用量、锅底温度及炮制时间对樟帮姜黄连炮制工艺的影响.结果:佳炮制工艺为姜汤用量20％,炒制锅底温度140℃,炒制时间12 min.盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、黄连碱质量分数和出膏率分别为14.15％,1.89％,1.96％和28.80％.结论:优化的炮制工艺稳定可行,可为樟帮姜黄连的工业化生产提供参考.
-
LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中4种黄连生物碱的含量
目的:建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱含量的方法.方法:采用ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm ×50 mm,1.7 μm),流动相乙腈-水(含2 mmoL乙酸铵和0.05％甲酸),流速0.3 mL·min-1,柱温30℃,以士的宁为内标,血浆样品用4倍量乙腈萃取并沉淀蛋白,用电喷雾离子化(ESI)和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测,选择离子对为药根碱m/z338.227→m/z 322.824；黄连碱m/z 320.244→m/z 291.996；巴马汀:m/z 352.243→m/z308.016;小檗碱:m/z336.227→m/z 277.981；士的宁:m/z 335.264→m/z 184.017.结果:药根碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的线性范围分别为1.01 ～ 505,1.06～530,1.13～565,1.07 ～535 μg·L-1；定量下限分别为0.539 2,0.646 3,0.761 5,0.197 1 μg·L-1；平均回收率分别为103.90％,101.50％,101.58％,115.54％；日内和日间精密度、稳定性的RSD均＜10％.结论:建立的方法准确、灵敏、特异、简便,适用于大鼠血浆中黄连碱、药根碱、巴马汀和小檗碱的同时测定及药动学研究.
-
HPLC测定胃康宁颗粒中5种指标成分含量
目的 建立胃康宁颗粒中指标成分表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量测定方法,为胃康宁颗粒的质量控制提供依据.方法 采用HPLC,色谱柱Agilent Eclipse Plus C18为(4.6 mm×250 mm,5μm).黄连生物碱流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50,每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH值为4.0),检测波长为345 nm;黄芩苷流动相为乙腈-0.2％磷酸(21:79),检测波长为280 nm.结果 黄连生物碱及黄芩苷测定均无阴性干扰,表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱及黄芩苷的进样量分别在0.00526～0.211μg(r=0.9996)、0.00537～0.215μg(r=1)、0.00555～0.222μg(r=1)、0.02806～1.123μg(r=1)、0.0965～1.930μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,精密度、稳定性均良好,平均回收率分别为97.63％(RSD=2.32％)、99.05％(RSD=2.21％)、97.66％(RSD=1.94％)、101.50％(RSD=1.92％)、100.31％(RSD=1.12％).结论 本方法准确、稳定、重复性好,可用于胃康宁颗粒中表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量测定.
-
黄连碱对胆固醇代谢关键基因的调节作用
该文主要研究胆固醇和25-羟胆固醇诱导对HepG2细胞胆固醇代谢的影响和黄连中黄连碱的降胆固醇活性及调节机制.用生化法检测了总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-c)水平;用qRT-PCR和Western bolt技术检测了胆固醇代谢关键基因LDLR,HMGCR,CYP7A1 mRNA和蛋白的表达水平.结果显示胆固醇和25-羟基胆固醇诱导能导致LDLR,CYP7A1的mRNA和蛋白的表达下降从而使TC和LDL-c含量上升.黄连碱能上调LDLR和CYP7A1的mRNA和蛋白表达水平而下调HMGCR的mRNA和蛋白表达水平,从而降低TC,LDL-c水平.这些结果表明黄连碱具有潜在的降胆固醇的药理活性,其分子机制可能是通过调节胆固醇代谢的关键基因LDLR,CYP7A1和HMGCR的mRNA和蛋白表达而达到降胆固醇的效果.该研究为开发新的具有降胆固醇活性的天然药物奠定了良好的理论基础.
-
均匀设计法优选左金丸方药的半仿生提取工艺
"左金丸"是由黄连与吴茱萸按6:1比例制成的水丸.具泄火,疏肝,和胃,止痛功能;用于肝火犯胃,脘胁疼痛,口苦嘈杂,呕吐酸水,不喜热饮.黄连具有抗微生物及抗原虫、抗病毒、镇痉、利胆、抗溃疡、抗腹泻、抗炎等药理作用.从黄连中已经分离得到的生物碱有小檗碱、巴马丁、黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、木蓝碱等,其中小檗碱含量高.吴茱萸具有抗胃黏膜损伤、抗菌、止泻、止呕、保肝利胆、镇痛等药理作用.从吴茱萸中分离得到多种生物碱,其中主要有吴茱萸碱、吴茱萸次碱.另外,吴茱萸中尚含挥发油、苦味素类等化学成分.
-
黄连碱药理活性研究进展
黄连碱是一种天然的原小檗碱型生物碱季铵盐,存在于毛茛科和罂粟科的多种植物中,资源丰富.尽管有关黄连碱的药理研究还不深入,但已有文献报道其有抑制A型单胺氧化酶、选择性抑制和双重抑制血管平滑肌细胞增殖、抑制破骨细胞分化和功能、选择性调节血管平滑肌细胞中的多药耐药蛋白质、抗真菌、胃黏膜保护、细胞毒、心肌保护等一些药理活性.鉴于目前缺少对黄连碱研究的系统回顾和综述,该文对近年来发表的黄连碱药理活性研究文献进行整理和分析,为深入开展以药理活性为基础的黄连碱创新药物研究提供信息.
-
外翻肠囊法研究扶正消症方中黄连碱类在大鼠肠内的吸收
采用大鼠外翻肠囊模型,研究扶正消症方中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱4种黄连碱在大鼠不同肠段的吸收情况,计算各成分的吸收参数,用SPSS20.0统计学软件对数据进行分析处理,分析其在不同肠段的吸收特征.结果显示,各生物碱成分在不同肠段的吸收均符合零级吸收速率;4种生物碱成分在低剂量时的吸收速率常数(Ka)与中、高剂量比较有显著性差异(P＜0.05),但是中剂量与高剂量比较Ka并没有明显差异.扶正消症方提取物不同剂量时,4个生物碱在不同肠段的吸收方式除被动扩散外还存在主动转运.4个生物碱在回肠中的吸收量略高于空肠,但无显著性差异,表明这4个生物碱在小肠无特定吸收窗.
-
黄连碱通过调控IκBα/NF-κB通路防治化疗相关性腹泻的实验研究
目的 观察黄连碱对化疗相关性腹泻(ClD)裸鼠的保护作用,并探讨其作用机制.方法 32只裸鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组,每组8只;正常组腹腔注射1 mL生理盐水,模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组均腹腔注射伊立替康溶液(剂量为350 mg/kg)进行造模.正常组、模型组均灌胃1 mL 0.5％ CMC-Na溶液,洛哌丁胺组灌胃洛哌丁胺混悬液(0.3 mg/kg),黄连碱组灌胃黄连碱混悬液(30 mg/kg),2次/天,共4天.观察裸鼠腹泻情况、小肠病理改变,ELISA法检测回肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)含量,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB p65蛋白表达.结果 正常组均未发生腹泻,模型组、洛哌丁胺组及黄连碱组均出现腹泻;与模型组比较,洛哌丁胺组、黄连碱组2～3分腹泻发生率及腹泻评分均明显下降(P＜0.05尸＜0.01).洛哌丁胺组回肠破坏程度较模型组稍减轻,差异无统计学意义(P ＞0.05),黄连碱组裸鼠回肠黏膜损伤程度较模型组及洛哌丁胺组均明显减轻(P＜0.01).与正常组比较,模型组回肠组织中TNF-α、IL-6及NF-κB p65表达均升高(P＜0.01),IκBα表达明显降低(P＜0.01);与模型组和洛哌丁胺组比较,黄连碱组TNF-α、IL-6及NF-κBp65表达均明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),IκBα表达均明显升高(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 黄连碱可降低伊立替康引起的CID发生率,减轻腹泻程度及回肠黏膜损伤,其机制可能与其上调IκBα表达,抑制NF-κB通路活化,减轻肠道炎症反应有关.
关键词： 黄连碱 化疗相关性腹泻 炎症细胞因子 核因子κB抑制蛋白α 核因子κB -
三种生物碱与氟康唑体外协同抗白色念珠菌活性研究
目的 探索滇产黄藤中3种小檗碱型生物碱(黄连碱、黄藤素、药根碱)体外协同氟康唑抗白色念珠菌作用.方法 采用微量稀释法测定各单药的低抑菌浓度(MIC80);并以部分抑菌浓度指数(FICI)为评价指标,通过棋盘式微量稀释法测定各单药与氟康唑对白色念珠菌的联合抑制作用;进一步使用时间-杀菌曲线试验验证两药体外联用效果.结果 黄连碱、黄藤素、药根碱对所测试菌株的MIC80分别为128、256、512μg·ml-1,单用抗白色念珠菌作用微弱,但与氟康唑联用后可显著增加氟康唑对耐药白色念珠菌的敏感性(MIC80＞ 256 μg ·ml-1降至MIC80≤8μg ·ml-1),FICI值分别为0.078 ～0.375、0.039 ～0.156、0.039 ～0.266;时间-杀菌曲线结果显现联用24 h后与氟康唑单药相比,联合组分别降低2.09、2.02、2.11 lgCFU ·ml-1;联用48 h后与氟康唑单药相比,联合组分别降低2.12、2.06、2.12 lg CFU ·ml-1,联用效果显著.结论 滇产黄藤中3种小檗碱型生物碱体外与氟康唑有很好的协同抗耐药白色念珠菌活性.
-
生物碱和黄酮类成分在泻心汤复方配伍中的含量研究
目的 建立同时测定泻心汤中黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法,并探索配伍对各成分含量的影响.方法 采用C18柱,流动相:甲醇-2%甲酸水溶液(0.1%三乙胺)梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:40℃;检测波长:346 nm;不同配伍之间的差异采用SPSS软件进行方差分析.结果 建立了同时测定生物碱和黄酮类成分含量的方法,这7个成分在一定浓度范围内线性关系良好,高、中、低质量浓度加样回收率稳定.与单味黄连、黄芩相比,复方中7个成分含量均降低.大黄使黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷和汉黄芩苷含量降低,使黄芩素和汉黄芩素含量增加;黄连使黄芩素和汉黄芩素的含量降低,使汉黄芩苷含量增加,对黄芩苷影响不大;黄芩使黄连碱、小檗碱和巴马汀的含量降低.结论 本法准确可靠,重现性好,结果稳定,适合于泻心汤中生物碱和黄酮类成分的分析.不同配伍对各成分含量有影响,其影响非常复杂.
-
黄连碱对过氧化氢损伤的血管内皮细胞保护作用
目的 探讨黄连碱对过氧化氢(H2O2)损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制.方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)分为对照组、模型组、给药组.对照组加入新鲜培养基,模型组给H2O2刺激4h,给药组用不同浓度的黄连碱(2.5、5、10、20、40 μmol/L)预处理4h,再用H2O2刺激4h.采用MTS法检测细胞活力,荧光探针-二氢乙啶(DHE)染色法检测细胞内活性氧(ROS),Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化.结果 与对照组比较,模型组细胞存活率和Bcl-2蛋白的表达明显降低,细胞内ROS含量、细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白的表达明显升高(P＜0.01);而与模型组比较,给药组细胞的存活率和Bcl-2蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐升高,细胞内ROS含量、细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐下降,差异均有高度统计学意义(P＜0.01).结论 黄连碱是通过抑制H2O2诱导的EA.hy926细胞存活率降低、细胞内ROS升高、细胞凋亡增多、caspase-3和Bax蛋白表达的上调以及Bcl-2蛋白表达的下调,发挥其对H2O2损伤的血管内皮细胞的保护作用,且呈剂量依赖性.
关键词： 黄连碱 EA.hy926细胞 氧化应激 细胞凋亡 -
吴茱萸次碱对5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用
目的 考察吴茱萸主要成分吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱肝代谢的抑制作用,为深入研究黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据.方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵法,考察吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱(黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀和药根碱)肝代谢的抑制作用.结果 吴茱萸次碱对黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱均存在体外肝代谢抑制作用,半数抑制浓度(IC50)均大于50 μmol/L,表现为体外弱抑制作用;抑制常数(Ki)的差异性具有统计学意义(P＜0.05),抑制作用强弱程度顺序为小檗碱＞药根碱＞巴马汀＞表小檗碱＞黄连碱.结论 为了解吴茱萸对黄连生物碱主要作用环节和揭示黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据.
-
黄连提取物与肠道菌群的相互作用研究
目的 研究人体肠道菌群对黄连提取物主要活性成分的代谢及黄连提取物对人体肠道菌群生长的影响.方法 采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析肠道菌群对黄连提取物转化后的代谢物;并应用浊度法测定不同质量浓度黄连提取物对4类肠道细菌(乳酸菌、双歧杆菌、肠杆菌和肠球菌)生长的影响.结果 肠道菌群对黄连提取物生物碱类成分主要进行氢化和去甲氧基作用,其中小檗碱和黄连碱被代谢为氢化产物,巴马汀被转化为去甲氧基产物;黄连提取物显著抑制病原菌(肠杆菌、肠球菌)的生长,显著促进益生菌(乳酸菌、双歧杆菌)的生长.结论 肠道菌群对黄连提取物生物碱类成分具有多种代谢作用,且黄连提取物具有改善肠道微生态的功能.
