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黄连碱通过调控IκBα/NF-κB通路防治化疗相关性腹泻的实验研究
目的 观察黄连碱对化疗相关性腹泻(ClD)裸鼠的保护作用,并探讨其作用机制.方法 32只裸鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组,每组8只;正常组腹腔注射1 mL生理盐水,模型组、洛哌丁胺组、黄连碱组均腹腔注射伊立替康溶液(剂量为350 mg/kg)进行造模.正常组、模型组均灌胃1 mL 0.5％ CMC-Na溶液,洛哌丁胺组灌胃洛哌丁胺混悬液(0.3 mg/kg),黄连碱组灌胃黄连碱混悬液(30 mg/kg),2次/天,共4天.观察裸鼠腹泻情况、小肠病理改变,ELISA法检测回肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)含量,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB p65蛋白表达.结果 正常组均未发生腹泻,模型组、洛哌丁胺组及黄连碱组均出现腹泻;与模型组比较,洛哌丁胺组、黄连碱组2～3分腹泻发生率及腹泻评分均明显下降(P＜0.05尸＜0.01).洛哌丁胺组回肠破坏程度较模型组稍减轻,差异无统计学意义(P ＞0.05),黄连碱组裸鼠回肠黏膜损伤程度较模型组及洛哌丁胺组均明显减轻(P＜0.01).与正常组比较,模型组回肠组织中TNF-α、IL-6及NF-κB p65表达均升高(P＜0.01),IκBα表达明显降低(P＜0.01);与模型组和洛哌丁胺组比较,黄连碱组TNF-α、IL-6及NF-κBp65表达均明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),IκBα表达均明显升高(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 黄连碱可降低伊立替康引起的CID发生率,减轻腹泻程度及回肠黏膜损伤,其机制可能与其上调IκBα表达,抑制NF-κB通路活化,减轻肠道炎症反应有关.
关键词： 黄连碱 化疗相关性腹泻 炎症细胞因子 核因子κB抑制蛋白α 核因子κB -
医用臭氧通过下调神经病理性痛大鼠核因子κB/核因子κB抑制蛋白α/核因子κB抑制蛋白激酶β的表达发挥镇痛效应
目的 观察医用臭氧(OZ)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)致神经病理性痛大鼠的镇痛作用及对核因子κB(NF-κB)、核因子κB抑制蛋白d(IκBα)及核因子κB抑制蛋白激酶β(IKKβ)表达水平的影响.方法 采用CCI法复制大鼠神经病理性痛动物模型,同时给予不同剂量(0.8、0.4、0.2ml)的OZ予以干预,用Von Frey纤维丝机械刺激触痛仪及冷板测痛仪测定不同剂量OZ对CCI大鼠的机械缩足反射阈值与冷缩足反射阈值的影响;用RT-PCR法和Western blotting法检测不同剂量OZ对CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβ mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 与CCI神经病理性痛模型组比较,OZ0.8、0.4ml剂量升高CCI大鼠机械缩足反射阈值,降低冷缩足反射阈值(P ＜0.05,P＜0.01);OZ 0.8、0.4ml剂量可下调CCI大鼠脊髓组织NF-κB p65、IκBα及IKKβmRNA和蛋白表达水平(P ＜0.05,P＜0.01).结论 OZ对CCI致神经病理性痛大鼠有镇痛作用,其机制可能与下调NF-κB p65、IκBα及IKKβ的表达有关.
关键词： 臭氧 神经病理性痛 核因子κB 核因子κB抑制蛋白α 核因子κB抑制蛋白激酶β 免疫印迹法 大鼠 -
幽门螺杆菌对人组织淋巴瘤细胞的损伤作用及机制
目的 观察幽门螺杆菌(Hp)对人组织淋巴瘤细胞的损伤作用,探讨Hp诱导的胃黏膜慢性炎症反应机制.方法 取人组织细胞淋巴瘤细胞系U937,分为Hp组和对照组.Hp组按细菌与细胞100∶1的比例加入Hp,对照组加入等体积RPMI1640培养液,培养14 h.采用ELISA法检测两组细胞培养上清中炎症因子巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;RT-PCR法检测细胞中MIF、IL-1β、核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)、核因子κB(NF-κB) mRNA的相对表达量;CCK-8法检测细胞增殖情况,判断细胞毒性;Western boltting法检测细胞内IκB-α、NF-κB p65蛋白表达.结果 Hp组细胞培养上清中MIF、IL-1β水平较对照组升高(P均＜0.05),细胞中MIF、IL-1β、IκB-α、NF-κB mRNA表达较对照组升高(P均＜0.05),细胞增殖的OD值降低(P＜0.01),IκB-α、NF-κB pp65蛋白表达较对照组升高(P均＜0.05).结论 Hp感染人组织淋巴瘤细胞后可诱导相关炎症因子分泌增加,激活NF-κB信号通路,进而促进人组织淋巴瘤细胞的炎症损伤,扰乱机体免疫防御反应,导致胃黏膜慢性炎症的发生发展.
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miR-146a对肺纤维化小鼠成纤维细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)对肺纤维化小鼠成纤维细胞增殖的影响及其机制.方法 选择C57BL/6小鼠30只,随机分为模型组和假手术组各15只.模型组经气管滴入博来霉素建立肺纤维化模型,假手术组经气管滴入等体积生理盐水.造模第28天,采用RT-PCR法检测两组肺组织miR-146a相对表达量.提取并培养造模第28天模型组肺成纤维细胞,随机分为miR-146a过表达组、对照组、空白组,分别给予miR-146a mimics(miR-146a激活剂)、miR-146a阴性对照物及缓冲液转染.转染24 h,再培养36 h,收集细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用Western blotting法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子κB(NF-κB)p65及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达.结果 模型组肺组织miR-146a相对表达量明显低于假手术组(P<0.01).miR-146a过表达组细胞增殖率为(13.47±1.83)％,对照组为(33.87±1.32)％,空白组为(32.57±1.54)％,miR-146a过表达组低于其他两组(P均<0.05),而对照组与空白组比较P>0.05.与对照组和空白组比较,miR-146a过表达组TGF-β1、IκBα蛋白相对表达量均降低(P<0.05),NF-κB p65蛋白相对表达量升高(P均<0.05),而对照组与空白组比较P>0.05.结论 miR-146a可抑制肺纤维化小鼠成纤维细胞增殖,其机制可能与阻止细胞内NF-κB核转位有关.
