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白藜芦醇对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞微小RNA-146a表达的影响
目的 观察白藜芦醇对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞微小RNA-146a(miR-146a)表达的影响.方法 将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)按2×106个/孔接种于六孔板,细胞贴壁90 min后,分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、终质量浓度LPS(1μg/mL)处理组、白藜芦醇(1 μg/mL)预处理30 min+终质量浓度LPS(1μg/mL)处理组、白藜芦醇(1 0μg/mL)预处理30 min+终质量浓度LPS(1μg/mL)处理组.细胞培养6h后,收集细胞和细胞培养上清液,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-146a的表达变化,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达变化.结果 与PBS对照组相比,LPS处理组细胞中miR-146a和TNF-α蛋白表达量均明显升高[miR-146a表达倍数(5.92±1.57)倍vs.(1.03±0.58)倍,P＜0.01;TNF-α质量浓度(644.2±36.82) pg/mL vs.(26.15±13.43)pg/mL,P＜0.01].与LPS处理组相比,白藜芦醇预处理组(1μg/mL和10 μg/mL)细胞中miR-146a表达量均明显升高[miR-146a表达倍数(8.67±1.18)倍、(11.17±1.40)倍vs.(5.92±1.57)倍,P＜0.01],TNF-α蛋白质量浓度均显著降低[TNF-α质量浓度(447.7±41.48) pg/mL、(345.0±42.54)pg/mL vs.(644.2±36.82)pg/mL,P＜0.01],且相比于较低质量浓度白藜芦醇组(1μg/mL组),较高质量浓度白藜芦醇组(10μg/mL)更能诱导miR-146a的表达、抑制TNF-α蛋白的分泌(P＜0.01).结论 白藜芦醇可以上调肺泡巨噬细胞内miR-146a的表达水平,推测miR-146a参与了白藜芦醇的抗炎过程.
关键词： 白藜芦醇 微小RNA-146a 肺泡巨噬细胞 肿瘤坏死因子-α -
全身炎症反应患者miRNA-146a的表达与病情发展相关性研究
目的 探讨miRNA-146a在全身炎症反应发生发展中的作用及其与疾病严重程度之间的关系,以证明miRNA-146a可作为炎症反应病情活动的判断指标.方法 应用荧光定量PCR法检测35例全身炎症反应综合征(SIRS)组、25例脓毒症组患者与25名对照组医务人员外周血单个核细胞中miRNA-146a的表达水平,并同时监测3组人员炎症因子TNF-a、IL-10的水平、反应炎症状况指标CPR的水平及评估全身状况的指标APACHE-Ⅱ评分水平的变化;将miRNA-146a与上述临床指标进行相关性分析.结果 SIRS组与脓毒症组miRNA-146a表达量明显高于对照组;3组miRNA-146a表达量呈现:脓毒症组＞SIRS组＞对照组(P＜0.05);miRNA-146a的表达量与TNF-a、CPR、APACHE-Ⅱ评分呈正相关性(P＜0.05),与IL-10水平无相关性.结论 炎症反应患者外周血单个核细胞miRNA-146a表达水平与炎症反应的病情严重程度呈正相关,提示miRNA-146a的检测可作为炎症反应病情活动的判断指标.
关键词： 全身炎症反应 微小RNA-146a 相关性分析 -
褪黑素对脓毒症小鼠急性肾损伤及miR-146a水平的影响
目的 探讨褪黑素(MT)对内毒素(LPS)诱导的脓毒症肾损伤小鼠炎症及肾脏细胞凋亡的影响,以及MT对脓毒症肾损伤的作用及其与microRNA-146a(miR-146a)的关系.方法 将48只雄性Balb/c小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、MT治疗组(MT组)以及假治疗组(NS组),每组16只.MT组、NS组小鼠腹腔注射LPS(10 mg/kg体重)制备脓毒症模型,MT组小鼠于建模前半小时、建模时、伤后4h分3次注射MT(30 mg/kg体重),NS组及Sham组小鼠在MT组相应给药时间点注射等量生理盐水.LPS处理24 h后,检测各组白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA的水平、miR-146a的水平、凋亡蛋白Caspase-3、Bax的表达情况,以及血清肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平.LPS处理72 h后观察各组小鼠肾脏病理变化及损伤情况.结果 ①Sham组肾小球、肾小管结构完整,NS组肾小管内管型形成,肾小管结构不清,肾小球固缩,大量炎症细胞浸润;MT组坏死肾小球数目明显少于NS组.②NS组、MT组血清Cr、BUN含量显著高于Sham组(P＜0.01),MT组血清Cr、BUN含量则显著低于NS组(P＜0.01).③MT组肾脏组织Cleaved-caspase-3、Bax表达量显著低于NS组(P＜0.01).④三组肾脏组织中IL-1β和IL-6水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05),其中MT组肾脏组织IL-1β、IL-6显著低于NS组(P＜0.01).⑤三组肾脏组织中miR-146a水平比较,差异有高度统计学意义(P＜0.01),MT组显著高于NS组(P＜0.01).结论 MT对LPS诱导的脓毒症小鼠肾损伤有明显治疗作用,这种治疗作用可能是通过上调miR-146a,进而抑制炎症及细胞凋亡实现的.
关键词： 褪黑素 脓毒症 肾损伤 微小RNA-146a -
转染微小RNA-146a对肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响
目的 观察转染微小RNA-146a(miR-146a)对大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨转染miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用.方法 体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383,分别以25、50、100 nmol/L CyTM3标记的Pre-miRTM阴性对照转染细胞,选择转染效率高的浓度作为实验浓度.将NR8383细胞分成两组,转染组转染50 nmol/L Pre-miRTM miR-146a前体,对照组转染50 nmol/L CyTM3标记的Pre-miRTM阴性对照,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染后细胞内miR-146a的mRNA表达.用脂多糖(LPS)1 mg/L刺激细胞6h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养上清液内TNF-α蛋白表达,采用RT-qPCR检测细胞内TNF-α mRNA表达.结果 以50 nmol/LCyTM3标记的Pre-miRTM阴性对照转染细胞效率高,约为80％.与对照组(作为1)相比,转染组细胞内miR-146a的mRNA表达上调了(24.55±6.14)倍(P＜0.01).LPS刺激后,转染组细胞上清液TNF-α蛋白含量(ng/L)较对照组明显下降(211.5±30.4比616.6±42.3,P＜0.01),细胞内TNF-α mRNA表达下调了(47±6)％(P＜0.05).结论 转染miR-146a能下调肺泡巨噬细胞炎症因子TNF-α的表达,表明miR-146a能抑制LPS诱导肺泡巨噬细胞的炎症反应.
关键词： 微小RNA-146a 肺泡巨噬细胞 肿瘤坏死因子-α -
参附注射液对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞微小RNA-146a表达的影响
目的 观察参附注射液(SF)对脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞微小RNA-146a(miR-146a)表达的影响以及SF的可能抗炎机制.方法 将体外培养的大鼠NR8383肺泡巨噬细胞分为对照组、LPS刺激组、SF处理组.LPS刺激组培养基中LPS终浓度为1 mg/L,对照组给予LPS刺激组等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)；SF处理组细胞分别用不同浓度的SF(1 ml/L或10 ml/L)预处理30 min后,再加入LPS(终浓度1 mg/L).给予PBS或LPS刺激6h后收集细胞和上清液,检测各组细胞中miR-146a表达水平(逆转录-聚合酶链反应法)和上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(酶联免疫吸附试验).结果 与对照组相比,LPS刺激组细胞中miR-146a表达和上清液中TNF-α含量显著增高[miR-146a(表达倍数):5.92±1.57比1.04±0.38；TNF-α(ng/L):636.93±30.21比20.46±2.81;均P＜0.05].与LPS刺激组相比,1ml/L和10 ml/L的SF预处理后,细胞中miR-146a表达均显著增高,而上清液中TNF-α含量均显著下降[miR-146a(表达倍数):7.02±0.91、8.11±1.07比5.92±1.57; TN F-α(ng/L):447.24±21.29、357.83±19.73比636.93±30.21,均P＜ 0.05],且均呈剂量依赖性(均P＜0.05).结论 SF可以呈剂量依赖性地上调肺泡巨噬细胞miR-146a的表达水平,推测miR-146a参与了SF的抗炎过程.
关键词： 参附注射液 微小RNA-146a 肿瘤坏死因子-α 肺泡巨噬细胞 -
微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1和肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达
目的 观察转染微小RNR-146a(miR-146a)对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物(mimic)组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了(24.55±6.14)倍(t=-6.643,P=0.003).细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的(1.16±0.10)倍(t=2.701,P=0.054)和(1.19±0.16)倍(t=2.032,P=0.112).而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0％(t=-9.353,P=0.001)和64.1％(t=-6.839,P=0.002).结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.
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体内转染微小RNA-146a对脓毒症小鼠肺的保护作用
目的：观察体内转染微小RNA-146a（miR-146a）对脓毒症小鼠肺脏的保护作用。方法选择健康雄性BALB/C小鼠24只，按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、转染组、转染对照组，每组6只。转染组小鼠经气管内预先滴入转染试剂in vivo-jetPEITM处理的miR-146a模拟物（agomir），转染对照组滴入in vivo-jetPEITM处理的阴性对照物。转染12 h后采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型；假手术组仅开腹游离盲肠，不进行结扎穿刺。各组于术后24 h处死动物，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测肺组织 miR-146a表达，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，测定肺组织湿/干质量（W/D）比值，光镜下观察肺组织病理学改变并进行肺损伤病理评分。结果脓毒症组、转染组、转染对照组小鼠肺组织miR-146a表达量分别上调至假手术组的（3.56±0.43）、（27.64±3.46）、（3.72±0.54）倍（P＜0.05或P＜0.01），且转染组miR-146a表达上调量明显高于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）；而脓毒症组与转染对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组BALF中TNF-α水平均明显升高（ng/L：511.65±43.47、305.74±34.76、492.27±42.21比50.72±7.23，均P＜0.01），转染组TNF-α水平明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01）。与假手术组比较，脓毒症组、转染组、转染对照组肺W/D比值明显升高（6.11±0.32、5.02±0.29、6.05±0.43比4.18±0.10，均P＜0.01），转染组明显低于脓毒症组及转染对照组（均P＜0.01），且转染组肺损伤病理评分较脓毒症组及转染对照组明显下降（分：6.12±0.75比10.53±1.52、9.73±1.08，均P＜0.01）。结论通过体内转染in vivo-jetPEITM荷载的miR-146a agomir可以上调脓毒症小鼠肺组织miR-146a表达，减少肺部炎性因子TNF-α的产生，抑制肺部炎症反应，减轻肺组织损伤。
关键词： 体内转染 微小RNA-146a 脓毒症 急性肺损伤 -
超声微泡介导微小RNA-146a基因在缺血/再灌注肝损伤大鼠中的表达与作用
目的 评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达与大鼠缺血/再灌注(I/R)肝损伤的关系.方法 按随机数字表法将144只SD大鼠分为对照组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,各组再分为4个亚组(n=12),分别在实验前1 h静脉给予220μL生理盐水(A组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL生理盐水(B组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL超声微泡造影剂(C组)、20μL miR-146a抑制剂+200μL超声微泡造影剂(D组).通过制备载miR-146a的超声微泡造影剂,运用超声靶向破坏微泡,于实验前及实验后24 h检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织miR-146a表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)、IL-6、TNF-α蛋白表达,光镜下观察肝组织细胞损伤情况.结果 实验前各组以及实验后24 h N组和S组血浆ALT、IL-6、TNF-α含量差异均无统计学意义,病理观察也无明显肝组织细胞损伤.实验后24 h,与S组比较,I/R A组和D组肝组织miR-146a表达显著下降(miR-146a/U6 snRNA:0.51±0.13、0.22±0.09比1.01±0.02,均P<0.01),血浆ALT、IL-6、TNF-α含量及肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α表达量显著升高〔ALT(U/L):103.23±26.64比44.16±18.55,176.46±7.26比49.74±6.83;IL-6(μg/L):64.28±16.19比17.68±7.54,88.49±3.23比15.58±2.38;TNF-α(μg/L):31.28±2.57比5.58±3.35,59.12±8.74比5.27±1.37;TLR4/GAPDH:2.43±0.36、3.23±0.71比0.96±0.24;IRAK-1/GAPDH:2.34±0.52、3.14±0.63比0.76±0.21;IL-6/GAPDH:1.02±0.22、1.11±0.16比0.98±0.37;TNF-α/GAPDH:2.05±0.48、2.86±0.27比0.59±0.16;均P<0.01〕,且以I/R D组升高更为显著(均P<0.01);病理显示肝组织细胞损伤明显;而I/R B组和C组转染miR-146a模拟剂后肝组织miR-146a表达量显著升高(miR-146a/U6 nsRNA:1.56±0.31、2.40±0.53比1.01±0.02,均P<0.01),肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α的表达量显著下降(TLR4/GAPDH:0.77±0.18、0.65±0.27比0.96±0.24,IRAK-1/GAPDH:0.61±0.14、0.47±0.20比0.76±0.21,IL-6/GAPDH:0.80±0.13、0.54±0.22比0.98±0.37,TNF-α/GAPDH:0.41±0.14、0.16±0.03比0.59±0.16,均P<0.01),且以C组结合超声微泡后表达更为显著(P<0.01),病理显示肝组织细胞损伤也更为轻微,B组和C组血浆ALT、IL-6及TNF-α含量也与S组差异无统计学意义.结论 超声微泡能高效转染miR-146a模拟剂和抑制剂于肝组织细胞;miR-146a可能负调控TLR信号通路介导的I/R肝损伤.
关键词： 微小RNA-146a 缺血/再灌注 肝 超声微泡 基因转染 -
微小RNA-146a肿瘤坏死因子受体相关因子6白细胞介素-1受体相关激酶1在强直性脊柱炎患者外周血中的表达及其意义
目的 研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中微小RNA(miR)-146a、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAKl)的表达及其与病情活动度的相关性,探讨miR-146a、TRAF6、IRAK1在AS发病机制中的作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶反应(qRT-PCR)检测45例AS患者miR-146a、TRAF6、IRAK1的相对表达量与22名健康对照组比较,并与Bath AS疾病活动指数(BASDAI)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白(Ig)等进行相关分析.统计学处理采用t检验,非参数检验,单因素方差分析,Pearson、Spearman相关分析.结果 ①miR-146a在AS患者PBMCs中相对表达量显著高于健康对照组[1.46(0.39,4.79)与0.81(0.17,1.90),P＜0.05]、活动组显著高于稳定组[2.93(0.95,7.95)与0.54(0.28,1.69),P＜0.05]、用药组与未用药组差异无统计学意义[1.28(0.31,2.37)与2.22(0.49,7.71),P＞0.05]；②IRAK1表达水平明显高于健康对照组(1.4±0.7与1.1±0.4,P＜0.05),未用药组与用药组、活动组与稳定组表达量差异均无统计学意义(1.5±0.9与1.4-0.5;1.6±0.7与1.3±0.7,P＞0.05)；③TRAF6表达量明显低于健康对照组(1.3±0.6与1.7±0.8,P＜0.05),TRAF6在未用药组、活动组均明显低于健康对照组(1.1±0.7与1.7±0.8；1.1±0.5与1.7±0.8,P＜0.05).④AS患者miR-146a表达与BASDAI、晨僵时间呈正相关(r=0.557,P=0.000;r=0.363,P=0.018),IRAK1与IgM呈负相关(r=0.313,P=0.046).结论 ①miR-146a可能参与AS疾病活动；②IRAK1、TRAF6表达异常可能在AS的发病机制中起作用.
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温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响
目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制.方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型.再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组).中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d.采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度.给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P＞0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P＞0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高.中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用.
关键词： 温化蠲痹方 大鼠 胶原诱导性关节炎 外周血单个核细胞 微小RNA-146a -
微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制
背景:微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道.目的:观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制.方法:采用脂质体2000将50 nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照.结果与结论:微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48 h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P < 0.01)、凋亡增多(P < 0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P < 0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P < 0.05).说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关.
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微小RNA-146a在新生隐球菌、格特隐球菌诱导THP-1细胞炎性反应中的机制研究
目的 观察并分析微小RNA-146a(miR-146a)在新生隐球菌(标准株WM148)、格特隐球菌(标准株R265)刺激人单核巨噬细胞系(THP-1细胞)中表达的差异,探讨miR-146a在隐球菌所致隐球菌脑膜炎中的调控作用及机制.方法 体外培养的人单核巨噬细胞系THP-1细胞分成新生隐球菌诱导组、格特隐球菌诱导组,按灭活菌数∶THP-1=5∶1的比例与THP-1细胞共孵育0、3、6、9和12h后离心收集上清液和细胞沉淀.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组细胞miR-146a的表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放量.结果 新生隐球菌诱导组细胞中miR-146a表达量与0h相比明显升高(P＜0.01),且在3h达到峰值,随后呈下降趋势;上清液中TNF-α的表达量在诱导后12h达到高值,IL-6的表达各时间点没有明显变化.格特隐球菌诱导后,miR-146a的表达逐渐升高,12h达到高值,但3h、6h点变化与0h比较差异并无统计学意义;上清液中YNF-α的表达12h到达峰值;IL-6的表达逐渐增加,12h达到高值,变化无统计学意义.结论 新生隐球菌、格特隐球菌刺激THP-1细胞炎性反应后,miR-146a表达随时间延长呈现不同的规律,TNF-α、IL-6的动态变化表现不同的特点.研究表明新生隐球菌、格特隐球菌诱导THP-l炎性反应可能存在不同的调控机制.
关键词： 微小RNA-146a 新生隐球菌 格特隐球菌 THP-1细胞 炎性反应 -
微小RNA-146a在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中的表达及其作用
目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)在小鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中的表达和具体作用机制.方法 取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠,随机分为3组:假手术对照组;miR-146a的反义核苷酸联合缺血再灌注(I/R)干预组(anti-miR-146a+ I/R组)于小鼠尾静脉注射锁核苷酸(LNA)修饰的miR-146a的反义核苷酸(anti-miR-146a),继之行I/R手术;阴性对照寡核苷酸(anti-scrambled)联合I/R干预组(anti-scrambled+I/R组)于小鼠尾静脉注射LNA修饰的anti-scrambled反义核苷酸,继之行I/R手术.恢复灌注后每组分别于6、24、48 h各处死6只小鼠并留取血液和肾组织标本.为观察I/R小鼠肾脏miR-146a表达的时相变化,分为假手术组和I/R手术组(I/R组),分别于恢复灌注后1、3、5和7d每组各处死4只小鼠取肾组织标本.使用QuantichromTM肌酐测定试剂盒测定小鼠血清肌酐(sCr)浓度;采用过碘酸-雪夫(PAS)染色和Jablonski评分法评估肾组织的病理改变;TUNEL法检测细胞凋亡情况;通过实时PCR检测miR-146a及其靶基因TNF受体相关因子6(TRAF6)和IL-1受体相关激酶1(IRAK-1)和细胞因子[TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、单核细胞趋化因子(MCP-1)]表达;Western印迹法检测miR-146a靶基因TRAF6和IRAK-1蛋白的表达.结果 与假手术组比较,I/R组小鼠肾组织miR-146a的表达随时间延长而上调,7d到达高峰.与假手术对照组、anti-scrambled+I/R组比较,6、24、48 h时miR-146a在anti-miR146a+I/R组的表达显著下降(P值均＜0.05).但抑制miR-146a的表达并没有使anti-miR-146a+ I/R组小鼠sCr水平明显上升,在24 h时,anti-miR-146a+ I/R组与anti-scrambled+ I/R组sCr水平的差异无统计学意义(P＞0.05),这两组小鼠TRAF6和IRAK-1合成、肾脏细胞凋亡和炎性细胞因子表达的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 IRI可以上调miR 146a表达,但在再灌注早期(6～48 h)抑制miR-146a并不会进一步加重肾脏IRI.
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脓毒症患儿CD14+单核细胞中miR-146a的表达及其临床意义
目的 观察儿童脓毒症患者CD14+单核细胞(MC)中miR-146a的表达水平.方法 选取 40例脓毒症患儿.选择15例手术后全身性炎症反应综合征(SIRS)患儿和15例健康儿童作为对照组.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测CD14+MC中miR-146a水平和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)的表达水平.流式细胞仪检测CD14+ MC HLA-DR水平.测定外周血超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)水平.结果 脓毒症患儿CD14+MC的HLA-DR水平均>30%.脓毒症患儿CD14+MC的miR-146a表达水平较SIRS组和健康对照组显著升高(P<0.05),在恢复期其水平显著下调(P<0.05).脓毒症患儿CD14+MC的TNF-α、IL-10水平均较健康对照组显著升高(P<0.05).结论 脓毒症患儿CD14+MC中miR-146a表达上调.
关键词： 儿童 微小RNA-146a 脓毒症 CD14+单核细胞 -
SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测类风湿关节炎患者血清miR-146a的表达及意义
目的 用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测类风湿关节炎(RA)患者血清miR-146a的表达水平,探讨其在RA诊断中的意义.方法 以U6为内参照,用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测RA患者48例(活动期30例、缓解期18例)、骨性关节炎(OA)患者22例和体检健康者25例血清miR-146a的表达水平,并进行ROC曲线分析;对各组进行红细胞沉降率(ESR)检测.结果 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测结果表明,活动期RA患者血清miR-146a水平为(2.42±0.75),显著高于缓解期RA患者(1.66±0.29)、OA患者(1.12±0.43)和体检健康者(1.01±0.34),差异均有统计学意义(P均＜0.05);miR-146a诊断活动期RA的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.914(95％ CI:0.872 ～0.926);以1.96为cut off值,敏感性为95.0％、特异性为87.5％、准确性为91.9％.活动期RA组ESR为(37.5±5.2) mm/h,缓解期RA组为(14.4±4.7)mm/h,OA组为(11.6±5.1) mm/h,健康对照组为(9.6±3.9) mm/h,各组间差异有统计学意义(F=177.01,P＜0.01).结论 建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可用于RA患者血清miR-146a的检测.miR-146a可用于诊断活动期RA.
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非小细胞肺癌患者血清微小RNA-146a水平及其临床意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-146a(miR-146a)的水平及临床意义.方法 收集2015年4月至2017年3月本院收治的93例NSCLC患者和67例同期体检者的血清标本,采用荧光定量PCR(QPCR)检测 NSCLC患者与健康对照血清miR-146a的表达水平,进一步分析血清miR-146a水平与临床病理学参数(性别、年龄、肿瘤大小、 TNM分期、组织学类型和淋巴结转移)的关系,绘制血清miR-146a诊断NSCLC的ROC曲线,计算曲线下面积并取约登指数(敏感性+特异性-1)高的临界点确定血清miR-146a诊断的佳界点.利用miRBase数据库预测miR-146a的靶基因,利用 cytoscape 3.5.1软件及其插件ClueGO绘制miR-146a富集的KEGG信号通路注释图.结果 QPCR检测发现,93例NSCLC患者的血清miR-146a水平为2.798±1.615,高于67例健康对照的1.190±0.738(P<0.001).NSCLC血清miR-146a水平与性别、年龄、组织学类型及淋巴结转移无关,与肿瘤大小及TNM分期有关,其中肿瘤>3 cm的血清miR-146a水平为3.298±1.553,高于≤3 cm的2.074±1.434,而Ⅲ、Ⅳ期的血清miR-146a水平为3.917±1.434,高于I、Ⅱ期的1.750±0.928,差异有统计学意义(P<0.05).血清miR-146a诊断NSCLC的曲线下面积为0.825(95％CI:0.763～0.887),当血清miR-146a水平为1.928处的约登指数大,敏感性为65.6％,特异性为1％.miR-146a预测靶基因共182个,主要富集于炎症及各类肿瘤相关的信号通路中.结论 血清miR-146a在NSCLC患者外周血中的表达升高并与疾病严重程度有关,有望成为NSCLC的诊断指标和生物治疗靶点.
关键词： 非小细胞肺癌 微小RNA-146a 临床意义 -
复方苦参注射液影响HL-60细胞迁移的机制研究
目的 探讨复方苦参注射液(CKI)影响HL-60细胞迁移的机制.方法 选取HL-60细胞株作为研究对象,根据不同加药方案分为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组(40ng/mL)、CKI组(0.5ng/mL)、G-CSF和CKI联合加药组和空白对照组,共培养48h后采用蛋白质印迹法(WB)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测微小RNA-146a(miR-146a)、趋化因子CXC受体4(CX-CR4)等信使RNA(mRNA)、CXCR4蛋白表达变化情况;同时采用Transwell小室检测CKI、G-CSF作用前后细胞迁移率变化情况.结果 (1)与空白对照组相比,基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)能促进HL-60细胞的迁移[(2.01±0.13)比(1.05±0.10),P<0.05],而CKI组、G-CSF组、CKI联合G-CSF组均能阻断HL-60细胞向SDF-1α迁移[(1.50±0.04)、(1.68±0.08)、(1.27±0.02)比(2.01±0.13),P<0.05].(2)与空白对照组相比,CKI、G-CSF处理HL60细胞后,CXCR4的mRNA、蛋白表达均受抑[(0.75±0.10)、(0.47±0.09)比(1.00±0.08),P<0.05];与CKI组、G-CSF组相比,CIK联合G-CSF组CXCR4的mRNA蛋白表达受抑更明显[(0.24±0.04)比(0.47±0.09)、(0.75±0.10),P<0.05].(3)与空白对照组比较,G-CSF、CKI处理HL-60细胞后,miR-146a表达显著上调[(5.59±0.46)、(3.53±0.39)比(1.03±0.11),P<0.01];而联合加药组上调更明显[(6.76±0.54)比(5.59±0.46)、(3.53±0.39),P<0.05].结论 CKI能协同G-CSF上调miR-146a表达,通过降低HL-60细胞表面的CX-CR4表达而阻断CXCR4/SDF-1α信号轴,终导致HL-60细胞体外迁移能力明显下降.
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急性缺血性脑卒中患者溶栓后血浆miR-146a、miR-21表达变化及意义
目的 探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者溶栓后血浆微小RNA-146a (miR-146a)、miR-21表达变化及意义.方法 AIS患者89例,根据颅内是否存在出血性转化分为出血性转化组26例与非出血性转化组63例.采用实时荧光定量PCR法检测血浆miR-146a、miR-21表达;多因素Logisitic回归分析AIS患者溶栓后发生出血性转化的影响因素.根据改良Rankin量表评分将患者分为预后良好组58例、预后不良组31例,对比两组血浆miR-146a、miR-21表达.结果 出血性转化组血浆miR-146a表达低于非出血性转化组,miR-21表达高于非出血性转化组(P均＜0.05).糖尿病、血糖水平升高、血浆miR-21高表达为AIS患者溶栓后出血性转化的独立危险因素(P均＜0.05),血浆miR-146a高表达是保护因素(P＜0.05).预后良好组血浆miR-146a表达高于预后不良组,血浆miR-21表达低于预后不良组(P均＜0.05).结论 AIS溶栓后易并发出血性转化的患者血浆miR-146a表达低、miR-21表达高,预后差的患者血浆miR-146a表达低、miR-21表达高.
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雷公藤多苷治疗对中重度类风湿关节炎患者外周血单个核细胞miR-146 a表达的影响
目的 观察中重度类风湿关节炎(RA)患者应用雷公藤多苷(TwHF)治疗前后外周血单个核细胞(PB-MC)中miR-146a表达的变化,评价miR-146a与RA患者临床应答的关系.方法 选择62例中重度RA患者(RA组)和60例健康志愿者(对照组),RA组接受24周的TwHF治疗.采集RA组基线期、12周、24周及对照组基线期的全血,采用实时荧光定量PCR方法检测PBMC中miR-146a表达水平.将RA患者根据治疗效果分为临床应答和临床不应答两个水平,比较两组基线期miR-146a表达水平;采用单因素和多因素Logistic回归分析TwHF治疗RA患者临床应答的影响因素.结果 RA组PBMC中miR-146a表达水平高于对照组(P<0.01).经TwHF治疗12、24周后,miR-146a表达水平降低(P均<0.01).RA组临床应答者基线期miR-146a、CRP水平高于临床不应答者(P均<0.05).多因素Logistic回归结果显示,miR-146a和CRP均与TwHF治疗RA的临床应答无关(P均>0.05).结论 中重度RA患者经TwHF治疗后PBMC中miR-146a表达水平下降,基线期PBMC中miR-146a表达水平升高可能影响TwHF治疗RA的临床应答.
关键词： 微小RNA-146a 雷公藤多苷 类风湿关节炎 外周血单核细胞 临床应答 -
应用右美托咪啶的老年全麻手术患者术后血清miR-146 a和miR-572水平变化及其意义
目的 探讨在老年患者术中应用右美托咪啶对于术后认知功能障碍(POCD)相关微小RNA(miR-146a和miR-572)水平的影响.方法 连续性纳入2017年4月～2017年12月于我院住院接受择期手术治疗的老年患者292例,随机平均分为2组,右美组146例和对照组146例.所有入选患者分别在术前1天(T0)和术后第1天(T1)和术后第3天(T2)三个时间点通过简易智力状态检查法(MMSE)进行神经精神测试评分,并检测血清miR-146a和miR-572水平.结果 对照组患者T1时MMSE水平较T0时明显下降(P<0.01).右美组POCD总体发生率明显低于对照组(P<0.05).T1和T2时,右美组miR-146a水平均明显低于对照组(P<0.01),而miR-572水平均明显高于对照组(P<0.01).组内比较可见,右美组患者miR-146a在T1时明显上升,T2时明显回落(P<0.05);而miR-572在T1和T2时均较T0时明显下降(P<0.05).对照组患者可见miR-146a在T1和T2时较T0明显上升,miR-572则明显下降(P<0.05).相关性分析可见POCD发生率与miR-146a呈正相关(r=0.629,P<0.01),与miR-572呈负相关(r=-0.609,P<0.01).miR-572与使用右美托咪定呈正相关(r=0.607,P<0.01),与总体POCD发生率呈负相关(r=-0.612,P<0.01).结论 POCD相关miR-146a和miR-572可能是右美托咪定降低POCD发生的潜在药物靶点因子.
关键词： 右美托咪啶 微小RNA-146a 微小RNA-572 老年患者 术后认知功能障碍
