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汉黄芩苷对糖尿病肾病大鼠肾组织中ANGPTL-4蛋白表达的影响
目的 采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)一次性腹腔注射诱导2型糖尿病肾病大鼠模型,观察汉黄芩苷对肾脏组织中肾小球细胞血管生成素样蛋白4(Angiopoietin like protein-4,ANGPTL-4)表达的影响,为黄芩的开发提供一定的参考.方法 60只清洁级雄性SD大鼠在适应性喂养7天后随机分成糖尿病肾病组(模型组)、空白组(正常组)以及汉黄芩苷治疗组.治疗组和模型组给予STZ 65 mg/kg一次性腹腔注射,空白组则不给予任何干预.造模成功后,正常组和模型组注射1 mL/(kg·d)生理盐水,治疗组给予汉黄芩苷0.2 mg/(kg·d)注射,于治疗4周和8周后处死大鼠各半,观察各组大鼠一般状况、血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)和空腹血糖(FBG)等的变化,HE染色观察肾脏组织病理学,免疫组化、RT-PCR和Western blotting检测肾脏组织中ANGPTL-4的表达.结果 正常组大鼠一般情况良好,模型组有明显的毛发发黄、粗糙和精神萎靡,同时表现有多饮、多食和多尿症状,汉黄芩苷干预后上述症状有明显好转;与正常组相比,模型组体重和肾脏重量明显降低(P<0.05),SCr、BUN和肾脏占体重百分比明显升高(P<0.05);与模型组相比,汉黄芩苷治疗4周后,SCr、BUN、体重、肾重和肾脏占体重百分比明显降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低(P<0.05);HE染色可见,正常组肾小球结构完整,系膜正常,模型组肾小球体积增大,同时伴有系膜区增宽和肾间质炎性细胞浸润,治疗4周后相较于模型组上述情况明显改善,治疗8周后进一步改善;空腹血糖比较,与正常组相比,模型组明显升高(P<0.05),汉黄芩苷治疗4周和8周后虽然有一定的降低(P<0.05),但与正常组差异依然明显;免疫组化、Western blotting以及RT-PCR可见,与正常组相比,模型组ANGPTL-4基因与蛋白表达水平显著上升(P<0.05),汉黄芩苷治疗4周后较模型组明显下降(P<0.05),治疗8周后进一步降低(P<0.05).结论 一次性STZ诱导的2型糖尿病肾病大鼠肾脏组织中ANGPTL-4呈明显高表达,汉黄芩苷可明显降低其表达,进而改善大鼠肾功能.
关键词： 汉黄芩苷 糖尿病肾病 血管生成素样蛋白-4 蛋白尿 -
大黄黄连泻心汤不同配伍下黄芩苷和汉黄芩苷在大鼠体内的药动学比较研究
目的:比较大黄黄连泻心汤不同配伍情况下黄芩有效成分黄芩苷和汉黄芩苷在大鼠血浆中的药动学差异.方法:大鼠灌服以黄芩、大黄黄芩、黄连黄芩、大黄黄连黄芩的不同配伍浸溃提取液,于不同时间点采血,经处理后测定血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的含量,计算在不同配伍情况下的药动学参数并进行比较分析.结果:在大黄黄连泻心汤的不同配伍中,黄芩配伍大黄后,黄芩主要成分原有的药时曲线双峰现象消失,Cmax及AUC均明显下降,消除过程加快；在配伍黄连后,黄芩主要成分的体内过程与单味黄芩相似,只是第2吸收峰有增高的趋势；大黄、黄连和黄苓3味药配伍时,黄芩主要成分的达峰浓度Cmax及AUC均明显下降,消除减慢.结论:在大黄黄连泻心汤的不同配伍中,大黄、黄连的加入使得黄芩中的主要成分黄芩苷和汉黄芩苷的药动学特征发生显著改变,大黄可减少黄芩苷、汉黄芩苷的吸收,加快其消除,而黄连则削弱了大黄的作用.
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黄芩提取物多指标成分鉴定及指纹图谱的研究
目的:应用超高效液相串联飞行时间质谱法鉴定黄芩提取物中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种活性成分及其指纹图谱同时检测的方法.方法:以ACQUITYTM UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7 μm),乙腈-0.1％甲酸溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1,检测波长275 nm,柱温30c.结果:4种成分色谱显示分离度良好,经质谱得到各成分离子碎片,查阅相关文献均得以证实,并在同一色谱条件下检测指纹图谱,结果显示相似度良好.结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于黄芩提取物的质量控制研究.
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黄芩中4种黄酮的抗肿瘤细胞株活性比较
目的:汉黄芩苷、汉黄芩素、黄芩苷及黄芩素是黄芩的主要成分.对前三种黄酮的抗癌活性文献有不同的报导.方法:本研究比较了4种黄酮在相同浓度下对4个肿瘤细胞株24 h及48 h存活率的影响.结果:实验结果显示,汉黄芩素对4种细胞株都有明显的抑制作用,48 h半抑制浓度分别为97.9 μM(肺腺癌A549)、15.3 μM(子宫颈癌HeLa)、147 μM(肝细胞癌HepG2)及104 μM(乳腺癌MCF-7).其相应的糖化物,汉黄芩苷对4种细胞均未显示抑制.黄芩素抑制HeLa细胞,而糖化的黄芩苷抑制HepG2,且对MCF-7显示刺激作用.结论:以上结果显示,汉黄芩素在4种主要黄芩黄酮中具有强的抑制肿瘤细胞生长效能,而其他3种黄酮的抗肿瘤作用并不一致,黄芩苷甚至促进个别肿瘤细胞株的生长.因此,黄酮抗癌作用的研究及可能的临床应用更应在单体水平进行.
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UPLC同时测定银黄颗粒中4种黄酮类成分含量
目的:建立银黄颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的UPLC含量测定方法.方法:采用ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪,ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm× 50 mm,1.7 μm)；流动相甲醇-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长274 nm,柱温30℃.结果:黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的线性范围分别为1.09 ～21.8,0.340～6.80,0.116 ～2.32,0.102～2.04 μg,加样回收率分别为100.8％(RSD 0.32％),97.1％ (RSD 0.95％),101.5％ (RSD 1.6％),98.7％(RSD 0.059％).结论:该方法简便、快速,分离效果好,可为全面控制银黄颗粒的质量提供参考.
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栀子金花丸中2个黄酮苷类成分的分析
目的:建立栀子金花丸中2个黄酮苷类成分的含量标准.方法:以HPLC法对栀子金花丸中的黄芩苷、汉黄芩苷进行定量分析.Kromasil C18柱(4.6 mm×250mm,5μm)；流动相甲醇-0.3％冰醋酸溶液(43∶57)；检测波长275 nm.结果:黄芩苷、汉黄芩苷分别在0.105 5 ～2.110 0 μg,0.036 2 ～0.724 0 μg(r ＞0.999 8)线性关系良好,平均回收率大于97.50％,RSD小于1.95％.结论:该研究同时进行黄芩苷、汉黄芩苷的定量分析,可作为栀子金花丸的质量控制标准.
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银黄煎液多级膜分离物有效成分的含量及其体外抑菌作用
目的:研究银黄煎液及其五级膜截留液中黄芩苷等3个有效成分的含量变化和体外抑茵作用.方法:采用多级膜分离方法按相对分子质量大小分离银黄煎液,HPLC测定成分含量,用金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌体外测试原液及各级分离物的低抑菌浓度(MIC).结果:抑菌作用由强到弱依次为4级、3级、5级、2级、原液、1级.结论:膜分离方法町分段分离抑黹活性物质;微滤后的银黄煎液各级膜分离物抑菌作用均比原液强.
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葛根芩连汤中黄芩活性成分在大鼠体内的组织分布
目的:考察大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩活性成分在心、肝、胃、肺、脾、肾、小肠中分布特性.方法:采用LC-MS/MS测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素在大鼠各组织中的含量,Shiseido CAPCELL PAK C18色谱柱(2.0 mm×100 mm,5 μm),流动相0.1％甲酸乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,采用ESI正离子检测,多反应监测模式测定.按15 g·kg-1灌胃葛根芩连汤,分别于给药后2,4,6,8,12 h断颈动脉放血处死动物,立即分取心、肝、胃、肺、肾、脾、小肠7个组织处理,测定各组织中活性成分的分布情况.结果:黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素的线性范围分别为6.150 ～3 077,3.030～1 515,6.170～3 085,3.140～1 569 μg·L-1,日内精密度RSD5.4％ ～11.7％,日间精密度RSD7.8％ ～11.9％,准确度RE-6.4％～7 5％,各组织中4种活性成分的提取回收率均＞75.5％,基质效应可忽略,大鼠肝脏组织中4种活性成分在放置4℃保存24h,-20℃冰箱内反复冻融1,3次及-70℃冰箱内保存4周条件下稳定性良好.结论:活性成分在各组织中浓度差异较大,大鼠灌服葛根芩连汤后黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷及汉黄芩素主要分布于肝脏、胃及小肠中,其次为肾、心、肺、脾.
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栀子金花丸中黄芩苷、汉黄芩苷成分的定量分析
目的 探讨栀子金花丸中黄芩苷、汉黄芩苷成分的定量分析.方法 使用HPLC法测定栀子金花丸中的黄芩苷和汉黄芩苷,本组研究的检测波长为275 nm,流动相甲醇-0.3％的冰醋酸溶液(比例为43:57),KromasilC18柱(4.6 mm×250 mm,5μm).结果 黄芩苷和汉黄芩苷分别在0.1055～2.1100 μg、0.0362～0.7240μg范围内时,其线性关系较好,平均回收率均在97.50％以上,而RSD在1.95％以下.结论 本组研究使用HPLC法同时对栀子金花丸中的黄芩苷与汉黄芩苷进行定量分析,可将其作栀子金花丸的质控标准.
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高效液相色谱法测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量
目的:测定不同产地黄芩中黄酮类化合物的含量,以评价其道地性.方法: 高效液相色谱法(HPLC). 结果: 17个产地25份样品中黄芩苷含量变化在6%～19%、汉黄芩苷在2%～8%、黄芩素在0.1%～1.6%、黄芩新素在0.01%～0.2%、汉黄芩素在0.01%～0.3%,粘毛黄芩素、木蝴蝶素为痕迹量或未检出. 结论: 单纯以黄芩苷的含量来评价其质量是不够的,建议将黄芩苷与汉黄芩苷的含量比值在3以下、黄芩苷与黄芩素、黄芩苷与汉黄芩素的含量比值在20～50等参数列为质量控制指标.
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缙云黄芩HPLC指纹图谱的建立及其不同部位活性成分含量研究
目的:建立重庆特有药用植物缙云黄芩HPLC指纹图谱,对其根、茎、叶中4种主要的黄酮类活性成分进行分离、含量测定和比较研究.方法:采用梯度洗脱方法进行色谱分离和含量测定,记录10个种群缙云黄芩指纹图谱,采用国家药典委"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"建立指纹图谱共有模式.结果:建立了同时分离和测定4种活性成分的梯度洗脱程序;缙云黄芩指纹图谱14个共有峰分离度良好、保留时间稳定、重现性好;供试样品间相似度较高;4种活性成分总量多少依次为根>茎>叶,尤其是黄芩苷在根中的积累量达茎中的5倍以上.结论:本研究建立的色谱指纹图谱分析方法稳定、可靠,能为缙云黄芩种源的宏观分析、探明其遗传变异模式及其保护和合理开发利用等提供重要的理论依据.
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酒黄芩与生黄芩不同提取工艺对黄芩苷煎出量的影响
据文献记载[1]黄芩的根为清热解毒常用中药,从中分离出的黄酮类化合物有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等20多种成分.其中黄芩苷是主要有效成分,具有抗菌、消炎作用.与黄芩中有效成分黄芩苷共存的有黄芩酶[2],其在适宜条件下可酶解黄芩中的苷,而导致黄芩苷含量下降.在制剂工艺[3]中由此而导致的含量不合格屡见不鲜.为验证酒炙黄芩在制剂提取工艺中的投料方法,我们制备了酒黄芩、生黄芩热水投料、冷水投料的样品,采用高效液相色谱法对其黄芩苷含量进行了研究,为制剂中的煎煮工艺提供依据.
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HPLC测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量
黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根,具有清热燥湿,泻火解毒,止血安胎等作用[1].黄芩中含有多种黄酮类化合物,其中含量较高的成分有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等.2005年版药典一部只对黄芩中黄芩苷进行含量测定,由于黄芩中苷类与其苷元在极性和含量上的差异,很难用单一的方法使几种成分都达到满意的分离和测定效果.本研究采用2种分离方法并用HPLC[2-4]分析了不同产地黄芩中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,以为有效控制生药质量及合理利用该药用植物资源提供参考.
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HPLC同时测定小柴胡汤中5种有效成分
目的:建立小柴胡汤中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素和甘草酸的HPLC-PDA测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,symmetry Shield~(TM) RP_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm);流动相乙腈-0.01%磷酸溶液梯度洗脱;流速0.45 mL·min~(-1);检测波长251 nm;柱温30℃.结果:本方法的准确度、精密度、重复性、专属性和定量线性范围均符合要求,同时测定了小柴胡汤中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素和甘草酸的含量.结论:该方法简便快速、准确可靠,可用于同时测定小柴胡汤中5种有效成分的含量.
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黄芩提取物中有效成分黄芩苷和汉黄芩苷在糖尿病大鼠中的药动学研究
目的:比较黄芩提取物中主要成分黄芩苷和汉黄芩苷在糖尿病大鼠和正常大鼠体内的药动学.方法:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,灌胃黄芩提取物后取血分离血浆,采用HPLC-Uv法检测血浆中黄芩苷和汉黄芩苷浓度,以矩量法计算药动学参数,AUC(0-τ)的计算采用梯形法.采用黄芩提取物与大鼠粪便温孵,从肠道代谢研究黄芩苷和汉黄芩苷动力学改变的初步机制.结果:与正常大鼠比较,糖尿病大鼠给予黄芩苷和汉黄芩苷后体内Cmax1明显增加[黄芩苷:(6.07±0.95)vs.(17.01±3.60)μg·mL-1,P＜0.01;汉黄芩苷:(3.50±0.72)vs.(9.34±2.04)μg·mL-1,P＜0.01],Cmax2明显增加[黄芩苷:(1.61±0.18)vs.(7.39±3.04)μg·mL-1,P＜0.01;汉黄芩苷:(1.95±0.52)vs.(6.72±2.60)μg·mL-1,P＜0.01],AUC(0-τ)也明显增加[黄芩苷:(38.72±7.25)vs.(86.70±20.91)μg·mL-1·h,P＜0.01;汉黄芩苷:(39.20±12.10) vs.(69.40±24.20)μg·mL-1·h,P＜0.01],粪便悬浮液中黄芩苷降解也加快(Ke:0.087 vs.0.173 min-1).结论:黄芩苷和汉黄芩苷在糖尿病大鼠与正常大鼠之间存在明显的药动学差异,在糖尿病大鼠肠道内代谢加快.
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高效液相色谱法同时测定复方芩兰口服液中绿原酸等5种成分的含量
目的:建立测定复方芩兰口服液中绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩苷含量的HPLC分析方法.方法:采用Agilent Eclipse plus C18(4.6 mm× 150 mm,3.5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-10％冰醋酸溶液,梯度洗脱;绿原酸和咖啡酸的检测波长为324 nm,黄芩苷、连翘苷和汉黄芩苷的检测波长为274 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温为40℃.结果:绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、连翘苷和汉黄芩苷5种成分在测定的范围内均呈良好的线性关系(r≥0.999 8),平均回收率为97.80％～101.94％ (n =6).测定复方芩兰口服液样品三批,结果为绿原酸含量分别为1.05、1.05、1.04 mg· mL-1;咖啡酸含量分别为0.28、0.29、0.29 mg· mL-1;黄芩苷含量分别为13.65、13.78、13.81 mg·mL-1;连翘苷含量分别为0.51、0.52、0.53 mg· mL-1;汉黄芩苷含量分别为0.47、0.48、0.48 mg·mL-1.结论:该方法操作快速简便,分离效果好,灵敏度高,重现性良好,为测定复方芩兰口服液中主成分的含量提供了一种快速高效可靠的方法.
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一测多评法测定银黄制剂中4种黄酮类成分含量
目的 建立一测多评法测定银黄制剂中黄芩黄酮类成分含量的分析方法,证明一测多评法用于复方制剂的可行性.方法 以银黄制剂为研究对象,建立汉黄芩苷(wogonoside)、黄芩素(baicalein)和汉黄芩素(wogonin)与黄芩苷(baicalin)间的相对校正因子.分别采用外标法和一测多评法测定银黄制剂中4种黄酮类成分的含量,并将一测多评法的计算值与外标法实测值用相对误差进行比较.结果 黄酮类成分间的相对校正因子分别为f274nm黄芩素/黄芩苷=1.20,f274nm黄芩素/黄芩苷=1.62,f274nm黄芩素/黄芩苷=1.68.一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著性差异,实验所得的相对校正因子可信.结论 一测多评法可作为一个新的质量评价模式用于银黄制剂中黄酮类成分的含量测定.
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HPLC-UV定量分析清热灵颗粒中的5个成分
目的 建立一种HPLC-UV同时测定清热灵颗粒中5种成分(黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素)的含量.方法 采用Asilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),以0.05%甲酸-水和0.05%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱.流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长为274 nm.结果 5个成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r~2≥0.999 7);加样回收率(RSD≤3.77%)、精密度(RSD≤0.65%)、重现性(RSD≤2.78%)和稳定性(RSD≤3.19%)均符合有关要求.结论 该方法简单,准确可靠,重现性好,可用于清热灵颗粒质量的控制和评价.
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高效液相色谱法同时测定赤丹丸中6种有效成分的含量
目的 建立高效液相色谱法测定赤丹丸中丹参素钠、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、汉黄芩苷和丹参酮ⅡA含量的方法.方法 Agilent Zorbax Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)柱;流动相组成为A:甲醇,B:水(磷酸调pH 3.0),C:乙腈,进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长280 nm.结果 丹参素钠线性范围16.4～327.0 mg·L-1,平均回收率为97.5%,RSD为1.31%;黄芩苷线性范围15.8～316.0 mg·L-1,平均回收率为97.4%,RSD为1.02%;黄芩素线性范围10.3～206.0 mg·L-1,平均回收率为99.3%,RSD为0.68%;汉黄芩素线性范围12.6～251.0 mg·L-1,平均回收率为100.2%,RSD为1.76%;汉黄芩苷线性范围11.3～225.0 mg·L-1,平均回收率为99.4%,RSD为2.6%;丹参酮ⅡA线性范围5.04～100.7 mg·L-1,平均回收率为97.8%,RSD为1.4%;结论 本方法测定结果准确可靠,可用于测定赤丹丸中6成分的含量.
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生物碱和黄酮类成分在泻心汤复方配伍中的含量研究
目的 建立同时测定泻心汤中黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法,并探索配伍对各成分含量的影响.方法 采用C18柱,流动相:甲醇-2%甲酸水溶液(0.1%三乙胺)梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:40℃;检测波长:346 nm;不同配伍之间的差异采用SPSS软件进行方差分析.结果 建立了同时测定生物碱和黄酮类成分含量的方法,这7个成分在一定浓度范围内线性关系良好,高、中、低质量浓度加样回收率稳定.与单味黄连、黄芩相比,复方中7个成分含量均降低.大黄使黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷和汉黄芩苷含量降低,使黄芩素和汉黄芩素含量增加;黄连使黄芩素和汉黄芩素的含量降低,使汉黄芩苷含量增加,对黄芩苷影响不大;黄芩使黄连碱、小檗碱和巴马汀的含量降低.结论 本法准确可靠,重现性好,结果稳定,适合于泻心汤中生物碱和黄酮类成分的分析.不同配伍对各成分含量有影响,其影响非常复杂.
