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湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化
目的:研究湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的累积变化过程,为标准化种植提供科学依据.方法:采用紫外分光光度法和HPLC测定黄连有效成分.结果:随着生长龄期的增长,黄连叶片数、根茎干重都在不断的增加；黄连不同部位中总生物碱含量的由大到小的顺序依次是根茎＞须根＞叶片；在黄连2～3龄阶段为黄连生长旺盛的时期,酪氨酸、总生物碱、小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量增长速度快；在5龄阶段,这4种生物碱含量的大小顺序依次是小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀,且这4种生物碱含量之和占总生物碱含量的比例在不断增加.结论:为黄连的种植管理提供了参考.
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双波长HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中6种生物碱的含量
目的:建立HPLC同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱6种生物碱含量的方法.方法:Waters Symmetry ShieldTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(A)-水(0.3％甲酸和0.3％三乙胺)(B)梯度洗脱,体积流量1.0 mL· min-1,检测波长345,270 nm,柱温25℃.结果:木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱线性范围分别为0.012 06 ～0.241 2,0.038 24 ～0.7648,0.088 02 ～1.760 4,0.016 55～0.331 0,0.036 08～0.721 6,0.189 41 ～3.788 2μg(r≥0.999 8),平均加样回收率95％～105％.结论:方法专属性强、灵敏度高、重复性好、简便易行,可用于同时测定黄连及金芪降糖片中木兰花碱、表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,可为金芪降糖片的现代制剂研究和质量控制提供依据.
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HPLC 同时测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量
目的:测定“三热论”方各纯化部位中药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量.方法:“三热论”复方经HPD 400大孔树脂,分别用10％,30％,60％,90％的乙醇洗脱后,采用HPLC测定4个洗脱部位中5种生物碱的含量.结果:HPD 400大孔树脂纯化后,30％乙醇洗脱部位生物碱含量高.结论:大孔树脂纯化法简单易行,30％纯化部位经HPLC检测,其中生物碱含量高,为有效部位筛选奠定了基础.
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黄连饮片标准汤剂的制备及质量标准分析
目的:制备黄连饮片标准汤剂并建立其质量标准,为黄连配方颗粒的制备及其质量标准的建立提供参考.方法:根据中药饮片标准汤剂制备原则制备黄连饮片标准汤剂,计算表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率和饮片出膏率,建立黄连饮片标准汤剂的质量标准.流动相乙腈-0.05 mol·L-磷酸二氢钾溶液(50:50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4g,以磷酸调节pH 3.0),柱温30℃,流速1 mL· min-,检测波长225 nm.结果:黄连饮片中表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的转移率范围分别为79.3％～111.9％,54.6％ ～76.2％,45.7％ ～70.7％和43.5％ ～64.4％,出膏率范围17.1％ ～22.3％,14批黄连饮片标准汤剂特征图谱中有7个共有峰,其相似度均＞0.999.结论:该研究建立的质量评价方法精密度和重复性良好,指纹图谱相似度高,适用于黄连饮片标准汤剂的质量评价.
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HPLC法同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱的含量
目的:建立同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱4种主要成分的高效液相色谱方法.方法:通过高效液相色谱分析双花百合片甲醇提取液,采用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液(C,pH=3)(0-20 min,5％A-20％A;20-65min,20％A),梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;检测波长为320nm;柱温30℃;进样量10μL.结果:绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱进样量分别在5.0-500.0 μ g/mL(r=0.9994)、10.0-500.0μg/mL(r=0.9967)、10.0-1 000.0μg/mL(r=0.9985)、20.0-1 000.0μg/mL(r=0.9994)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.63％、101.22％、98.30％、98.93％,RSD值分别为0.97％、1.58％、1.48％、1.93％.结论:本方法简便、准确、重复性好,可为双花百合片的质量标准研究提供参考.
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HPLC测定胃康宁颗粒中5种指标成分含量
目的 建立胃康宁颗粒中指标成分表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量测定方法,为胃康宁颗粒的质量控制提供依据.方法 采用HPLC,色谱柱Agilent Eclipse Plus C18为(4.6 mm×250 mm,5μm).黄连生物碱流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50,每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g,再以磷酸调节pH值为4.0),检测波长为345 nm;黄芩苷流动相为乙腈-0.2％磷酸(21:79),检测波长为280 nm.结果 黄连生物碱及黄芩苷测定均无阴性干扰,表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱及黄芩苷的进样量分别在0.00526～0.211μg(r=0.9996)、0.00537～0.215μg(r=1)、0.00555～0.222μg(r=1)、0.02806～1.123μg(r=1)、0.0965～1.930μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,精密度、稳定性均良好,平均回收率分别为97.63％(RSD=2.32％)、99.05％(RSD=2.21％)、97.66％(RSD=1.94％)、101.50％(RSD=1.92％)、100.31％(RSD=1.12％).结论 本方法准确、稳定、重复性好,可用于胃康宁颗粒中表小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量测定.
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外翻肠囊法研究扶正消症方中黄连碱类在大鼠肠内的吸收
采用大鼠外翻肠囊模型,研究扶正消症方中小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱4种黄连碱在大鼠不同肠段的吸收情况,计算各成分的吸收参数,用SPSS20.0统计学软件对数据进行分析处理,分析其在不同肠段的吸收特征.结果显示,各生物碱成分在不同肠段的吸收均符合零级吸收速率;4种生物碱成分在低剂量时的吸收速率常数(Ka)与中、高剂量比较有显著性差异(P＜0.05),但是中剂量与高剂量比较Ka并没有明显差异.扶正消症方提取物不同剂量时,4个生物碱在不同肠段的吸收方式除被动扩散外还存在主动转运.4个生物碱在回肠中的吸收量略高于空肠,但无显著性差异,表明这4个生物碱在小肠无特定吸收窗.
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表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用
表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性.该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1 A2,CYP2E1,CYP2 C9亚型活性的影响.结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22 μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用.该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据.
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HPLC法同时测定一清颗粒中5种成分含量
目的 建立HPLC法同时测定一清颗粒中5种有效成分的含量.方法 色谱柱:Ageia Technologies,VenusilMP C18(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相:乙腈-0.05 mol ·L-1磷酸二氢钾(20∶80);体积流量:1.0 ml·min-1;检测波长:280 nm和345 nm;柱温:30℃;进样量:5μl.结果 盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱、表小檗碱和黄芩苷在一定的质量范围内均呈现良好的线性关系,r均大于0.999;平均加样回收率为97.0％～103.0％,RSD≤2.0％(n=6).结论 该含量测定方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于一清颗粒的质量控制.
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表小檗碱和小檗碱与牛血清白蛋白相互作用的比较分析
目的:比较表小檗碱和小檗碱与牛血清白蛋白(BSA)相互作用,并探讨与结构的关系.方法:采用荧光猝灭法与紫外分光光度法探讨表小檗碱和小檗碱对BSA的猝灭机制,测定不同温度下与血浆蛋白的结合常数、结合位点数及结合力类型.结果:表小檗碱和小檗碱都能够使BSA的内源性荧光发生淬灭,其荧光淬灭过程均是静态淬灭.在25,30和37℃时,表小檗碱和小檗碱与BSA的结合常数分别为9.623 9,10.087 6和10.206 0×104 L·moL-1,以及11.373 5,11.264 3和9.869 0×104 L·moL-1;结合分子数均为1;表小檗碱-BSA体系的结合力以疏水作用为主导,而小檗碱-BSA体系的结合是由彼此产生的静电及疏水力共同作用的结果.结论:表小檗碱和小檗碱与血浆蛋白具有中等强度的结合,小檗碱与BSA的结合能力稍高于表小檗碱,但差异不大;两者结合力类型明显不同,这可能与母核上甲氧基的位置和极性大小有关.
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吴茱萸次碱对5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢的抑制作用
目的 考察吴茱萸主要成分吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱肝代谢的抑制作用,为深入研究黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据.方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵法,考察吴茱萸次碱对黄连中5种生物碱(黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀和药根碱)肝代谢的抑制作用.结果 吴茱萸次碱对黄连碱、表小檗碱、小檗碱、巴马汀、药根碱均存在体外肝代谢抑制作用,半数抑制浓度(IC50)均大于50 μmol/L,表现为体外弱抑制作用;抑制常数(Ki)的差异性具有统计学意义(P＜0.05),抑制作用强弱程度顺序为小檗碱＞药根碱＞巴马汀＞表小檗碱＞黄连碱.结论 为了解吴茱萸对黄连生物碱主要作用环节和揭示黄连吴茱萸药对配伍机制提供依据.
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基于支持向量机的黄连饮片产地识别研究
目的 建立基于支持向量机的黄连饮片产地区分识别模型.方法 采集4个产地多批黄连样本,量化外部特征值(包括形状、气味、味道等),并按《中国药典》2010年版方法测定内部特征值(包括水分、总灰分、醇浸出物,指标成分表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱质量分数),在Matlab 7.0平台进行数据降维和融合,建立黄连产地区分模型.结果 单独分析各项数据不能较好区分各产地黄连饮片,而采用支持向量机建模后所有特征叠加识别率达到97.1％,能准确区分各黄连饮片产地,内外特征的高识别率说明各特征子集间具有一定的互补性,可综合辨识不同产地黄连饮片的差异性.结论 建立的基于支持向量机的识别模型,实现产地的区分,为黄连产地区分提供研究思路和基础.
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基于一测多评法研究配伍比例及pH值环境对黄连-大黄配伍后4种生物碱成分溶出的变化规律
目的 研究配伍比例及pH值环境对黄连-大黄配伍后4种生物碱成分溶出的变化规律.方法 在一测多评法的基础上,采用HPLC法测定小檗碱、巴马汀、黄连碱及表小檗碱的量.结果 黄连-大黄合煎组及分煎合并组中4种生物碱的量及相对溶出率随着大黄比例增加均有相似的降低趋势,2组黄连与大黄配伍比例为1∶2时,4种生物碱的量及相对溶出率均达到大值;且配伍比例与4种生物碱的量及相对溶出率无效应关系;盐酸溶液单煎黄连组pH值为5.2时,4种生物碱的量及相对溶出率达到大值,pH值与4种生物碱的量及相对溶出率无效应关系.结论 pH值环境对黄连-大黄配伍后4种生物碱成分的量有影响,且不同比例黄连-大黄配伍后形成的pH值环境与用盐酸调配的pH值环境对生物碱成分的溶出产生的影响不一致.
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基于UHPLC-ESI-QqQ-MS/MS技术的中药复方新天泰1号多类别多成分质量控制方法研究
目的 建立同时快速测定新天泰1号制剂中19种药效成分(人参皂苷Rg1、Rb1、Rd,小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、非洲防己碱、黄连碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、金丝桃苷、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、松果菊苷、毛蕊花糖苷)的超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱(UHPLC-ESI-QqQ-MS/MS)新方法,为产品提供全面高效的质量控制方法.方法 采用Agilent 1290Ⅱ高效液相色谱系统,Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;采用正负离子多反应监测模式对各成分特定离子对进行监测,测定新天泰1号样品中19种活性成分含量.结果 在15 min内完成19种活性成分的准确测定,极大地提高了分析效率;19种活性成分在线性范围内线性关系良好(r2＞0.999 0);19种活性成分人参皂苷Rg1、Rb1、Rd及小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、非洲防己碱、黄连碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、金丝桃苷、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、松果菊苷、毛蕊花糖苷的回收率分别为94.80％、96.78％、95.59％、96.88％、97.74％、100.08％、96.27％、100.25％、98.32％、97.16％、95.60％、95.28％、96.81％、95.22％、96.85％、95.31％、93.86％、94.79％、95.20％;19种成分在3批样品中的定量测定结果分别为2.28～2.49 mg/g、0.82～0.90 mg/g、1.22～1.32 mg/g、14.44～15.50 mg/g、3.71～3.99 mg/g、3.26～3.49 mg/g、3.09～3.33 mg/g、4.39～4.72 mg/g、4.56～4.92 mg/g、0.52～0.57 mg/g、0.30～0.33 mg/g、4.46～4.76 mg/g、3.02～3.24 mg/g、2.59～2.76 mg/g、6.03～6.38 mg/g、1.47～1.58 mg/g、1.90～2.08 mg/g、3.40～3.88 mg/g、1.53～1.74 mg/g.结论 UHPLC-ESI-MS/MS多反应监测法可同时快速对新天泰1号中多种不同类型的活性成分进行监测,该方法快速,灵敏度高,重复性好,可用于本品质量控制,亦为中药质量研究提供参考和借鉴.
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HPLC法测定黄连不同部位中6个生物碱
目的 建立黄连不同部位中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的测定方法.方法 色谱条件为Phenomenex Gemini-NX C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为乙腈-30 mmol/L碳酸氢铵溶液(每1 000mL碳酸氢铵溶液含7mL氨水及1mL三乙胺)；体积流量1.0 mL/min;检测波长270 nm;柱温30℃.结果 黄连须根、根茎、叶中6个生物碱量具有较明显差异.经比较,黄连适宜在移栽后第4年采挖,7～10月的佳采挖月份是10月.结论 该法简便、准确、分离效果好,适用于黄连主要生物碱的定量分析.
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戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱研究
目的 建立戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,确定各色谱峰的药材来源,同时对各成分进行定性研究,为其物质基础、质量控制、研究开发和应用提供科学依据.方法 采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.05％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,进样量2 μL.利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”对其进行相似度评价.结果 建立了戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了38个共有峰,并根据对照品和参考文献定性指认了9个共有峰分别为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、黄连碱、表小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、芍药苷,推断出4个共有峰分别为木兰花碱、芍药内酯苷、格陵兰黄连碱、1-甲基-2-壬基-4(1H)-喹诺酮.对11批由不同产地和品种药材制备的戊己丸的相似度进行了考察,其相似度在0.90以上.结论 建立了戊己丸的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,该分析方法快速、灵敏、简便,为戊己丸的质量控制提供实验依据.
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基于网络药理学的黄芩抗炎作用机制研究
目的 运用网络药理学的方法探究黄芩抗炎的作用机制.方法 通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库搜索黄芩中的成分,结合“类药五原则”与“口服生物利用度＞30％”筛选黄芩活性成分.采用PharmMapper网络服务器预测其作用靶点,并采用Cytoscape 3.4.0软件构建黄芩活性成分-预测靶点网络.在TTD数据库中以“Anti-inflammatory”为关键词搜索抗炎靶点,使用String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,并将其与活性成分-预测靶点融合,获得黄芩活性成分的抗炎作用靶点.使用DAVID数据库对黄芩抗炎作用靶点进行KEGG通路富集分析,以探究黄芩抗炎的作用机制.结果 获得黄芩中具有类药性、口服吸收良好的28个成分,包括黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等黄酮类成分,表小檗碱、黄连碱等生物碱类成分以及二氢木蝴蝶素等酚类物质.黄芩抗炎作用的主要靶点有丝裂原活化蛋白激酶14 (MAPK14)、肿瘤坏死因子受体超家族成员1A (TNFRSF1A)、表皮生长因子受体(EGFR)、E-选择素(SELE)等.其中丹参素、表儿茶素、黄连碱等成分主要作用于MAPK14;红花素等作用于TNFRSF1A;二氢木蝴蝶素A、5,7,4'-三羟基-8-甲氧基黄酮、5,7,4'-三羟基-8-甲氧基黄烷酮、黄芩苷等成分主要作用于EGFR.KEGG分析得到与黄芩抗炎作用有关的通路11条,主要涉及肿瘤坏死因子信号通路、MAPK信号通路等.结论 黄芩中的活性成分主要通过MAPK14、EGFR、TNFRSF1A、SELE等靶点抑制炎症因子的产生、抑制炎症因子与相应受体结合、阻断炎症反应的启动等,终发挥抗炎效应.
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HPLC法测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和丹皮酚
目的建立HPLC法同时测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、丹皮酚6种成分.方法 Waters SymmetryShield RP18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(0.3%甲酸和0.3%三乙胺)–水(0.3%甲酸和0.3%三乙胺),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长270 nm;柱温25℃;进样体积20 μL.结果表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、丹皮酚分别在1.856~18.56、14.230~142.30、1.070~10.79、2.485~24.85、38.915~389.15、9.824~98.24μg/mL线性良好,r值均大于0.999 0.平均回收率分别为98.66%、99.49%、99.59%、98.66%、100.40%、99.95%,RSD值分别为2.91%、2.67%、2.65%、1.91%、3.42%、2.28%(n=9).结论 该方法专属性强,灵敏度高、重复性好、简单易行,可用于同时测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、丹皮酚6种成分,对完善癃清片的质量控制具有参考价值.
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黄连配方颗粒薄层鉴别方法研究
目的:建立黄连配方颗粒的鉴别方法.方法:采用薄层色谱法对味连、雅连和云连中的多个生物碱成分进行表达,以寻找鉴别特征.结果:建立鉴别川连(味连、雅连)和云连的TLC特征谱,并对10批市售黄连配方颗粒进行鉴别.结论:所建立的黄连配方颗粒TLC鉴别法专属性高,实用性强.
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HPLC法测定芩连平胃汤中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀含量
目的:建立芩连平胃汤中小檗碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的高效液相色谱测定方法.方法:采用Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50,每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.1 g,再以磷酸调节pH为4.0),检测波长为345 nm,流速:1.0 mL/min,柱温:25 C.结果:盐酸小檗碱的进样量在0.238～1.428μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9.结论:该测定方法简便、准确、重复性好,可用于芩连平胃汤的质量控制.
