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多指标优化吴茱萸的提取纯化工艺
目的:优选吴茱萸的提取纯化工艺.方法:以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱转移率的综合评分为指标,采用正交试验考察溶媒倍数、溶剂浓度、提取次数和提取时间对吴茱萸醇提工艺的影响；以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的质量分数为指标,通过单因素试验考察吴茱萸提取液逐步水沉纯化工艺.结果:佳提取工艺为加16倍量70％乙醇回流提取3次,每次3h;佳逐步水沉纯化工艺为回收乙醇,离心,取沉淀加20倍量90％乙醇超声提取15 min,离心,取上清液,加1/4倍量水进行二次水沉.结论:优选的提取、纯化工艺可确保吴茱萸中有效成分大限度保留.
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高效液相色谱法同时测定制吴茱萸及其提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内脂含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定制吴茱萸及其提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,Kromasail C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-四氢呋喃-乙酸(51:48:1:0.1),流速:1 mL·min-1;检测波长:225 nm:柱温:32℃.结果:吴茱萸碱回归方程:Y吴茱萸碱=10 300 000X-14 700,r=0.999 9;线性范围0.015～0.3 μg;吴茱萸次碱回归方程:y吴茱萸碱=5 380 000X-6 610,r=0.999 9,线性范围0.012～0.24 μg;吴茱萸内酯回归方程:y吴茱萸碱=227 000 X-5 110,r=0.999 6,线性范围0.059～1.18μg.吴茱萸碱平均回收率为99.6%,RSD 0.65%;吴茱萸次碱平均回收率为99.1%,RSD1.2%;吴茱萸内酯平均回收率为97.5%,RSD1.4%.结论:方法简便,结果准确.
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一测多评法测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量
目的:建立吴茱萸一测多评的含量测定方法,考察不同类型化合物之间采用相对校正因子进行一测多评含量测定的准确性和可行性.方法:以吴茱萸为研究对象,建立吴茱萸次碱与吴茱萸内酯、吴茱萸碱的相对校正因子,并用该校正因子进行吴茱萸内酯、吴茱萸碱的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定药材中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量,并比较计算值与实测值的差异.结果:11批吴茱萸药材中2种成分含量的计算值与实测值间无显著差异(RSD＜5%).结论:以外标法测定吴茱萸次碱,利用相对校正因子实现对吴茱萸内酯和吴茱萸碱测定是准确的、可行的,一测多评法可以用于特定的不同类型成分间的测定.
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吴茱萸中4种单体成分致肾细胞毒性的初步研究
目的 探讨吴茱萸中成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和辛弗林在体外对人胚肾细胞(HEK-293)的影响.方法采用MTT法检测吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯和辛弗林对肾细胞活力的影响;给药后检测肾细胞培养上清液中的功能性指标乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用倒置相差显微镜对给药后的细胞形态进行观察.结果 MTT法显示,8.3～33.2 g·mL-1的吴茱萸碱、5～40 g·mL-1的吴茱萸次碱和50～200 g·mL-1的吴茱萸内酯对HEK-293细胞活力有明显的抑制作用(P <0.01 or 0.05),辛弗林对肾细胞活力无明显影响.4.15～33.2 g·mL-1的吴茱萸碱、5～20 g·mL-1的吴茱萸次碱和50～200 g·mL-1的吴茱萸内酯能显著升高肾细胞上清液中的LDH(P <0.01),给予辛弗林后LDH无变化.给予4.15～33.2 g·mL-1的吴茱萸碱和100～200 g·mL-1的吴茱萸内酯后,肾细胞均不同程度的皱缩、减少、甚至死亡,吴茱萸次碱和辛弗林对肾细胞形态无明显影响.结论吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对肾细胞均有毒性作用,而辛弗林对肾细胞无毒性作用.
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不同炮制方法对吴茱萸中吴茱萸内酯的影响
目的:考察不同炮制工艺对中药吴茱萸中吴茱萸内酯的影响.方法:采用液质联用的方法,以A:0.1%醋酸/水溶液,B:0.1%醋酸/乙腈为流动相,梯度洗脱.结果:通过不同炮制工艺,吴茱萸中吴茱萸内酯含量依次按生品、姜汁、醋、甘草汁、黄酒、黑大豆下降.结论:各地区炮制工艺规范不同,吴茱萸内酯也就有差异.
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HPLC-ESI-MS同时分析萸黄连饮片及其制剂中的活性成分
目的 以萸黄连为分析对象,建立萸黄连饮片及其制剂中的多成分分析方法,阐述其“反制”炮制前后的物质基础差异,探讨萸黄连“反制”炮制的科学内涵.方法 首次采用高效液相-电喷雾-三重四极杆质谱(HPLC-ESI-MS)同时测定3批萸黄连饮片,以及其制剂3批香连丸、3批香连片中绿原酸、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱8个主要活性成分的量.结果 在萸黄连饮片及其制剂中均能同时检测到黄连饮片和吴茱萸饮片中的多种成分,实验结果证明萸黄连饮片中加入了吴茱萸饮片中的多种成分.结论 方法学考察结果表明此方法符合测定要求,结果准确,对阐述萸黄连的物质基础和炮制机制以及萸黄连饮片及其制剂的质量控制研究具有一定的理论意义和实用价值.
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戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱研究
目的 建立戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,确定各色谱峰的药材来源,同时对各成分进行定性研究,为其物质基础、质量控制、研究开发和应用提供科学依据.方法 采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.05％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,进样量2 μL.利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”对其进行相似度评价.结果 建立了戊己丸UPLC-MS/MS指纹图谱的共有模式,确定了38个共有峰,并根据对照品和参考文献定性指认了9个共有峰分别为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、黄连碱、表小檗碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯、芍药苷,推断出4个共有峰分别为木兰花碱、芍药内酯苷、格陵兰黄连碱、1-甲基-2-壬基-4(1H)-喹诺酮.对11批由不同产地和品种药材制备的戊己丸的相似度进行了考察,其相似度在0.90以上.结论 建立了戊己丸的UPLC-MS/MS指纹图谱分析方法,该分析方法快速、灵敏、简便,为戊己丸的质量控制提供实验依据.
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HPLC测不同产地吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量
目的:对不同产地吴茱萸药材的质量进行客观评价.方法:采用高效液相色谱法,十八烷基键合硅胶柱,流动相乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(41∶59∶ 1∶0.2),流速为1.0mL · min,检测波长:225nm,结果:不同产地药材其吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯含量有一定差异.结论:该方法为吴茱萸药材中三种成分的同时测定及质量控制提供了一定的参考.
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反相HPLC法同时测定复方黄连素片中的8种成分
目的 建立反相HPLC法同时测定复方黄连素片(盐酸小檗碱、木香、吴茱萸、白芍)中芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的方法.方法 复方黄连素片提取物的定量分析采用月旭XB-C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.03 mol/L磷酸二氢钾水溶液(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;检测波长220 nm.结果 芍药内酯苷、芍药苷、盐酸小檗碱、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯分别在0.054～0.804 μg、0.080 ～1.21μg、0.132 ～1.99 μg、0.034 ～0.504μg、0.035 ～0.519 μg、0.031 ～0.468 μg、0.048 ～0.714 μg、0.053 ～0.792 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)分别为100.2％、99.2％、99.5％、99.2％、98.8％、100.5％、98.6％、99.0％,RSD分别为1.7％、1.5％、1.2％、1.9％、2.0％、1.9％、1.8％、1.0％.结论 在80％甲醇溶液和超声30 min的提取条件下,该方法适用于复方黄连素片中这8个成分的测定.
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中草药及制剂中吴茱萸内酯的LC-MS/MS测定方法
目的:用LC-MS/MS法测定中药吴茱萸、黄柏、白鲜及其制剂中吴茱萸内酯的含量.方法:分析柱:Discovery C18,150mm×2.1mm;预柱:Symmetry C18;柱温20℃.流动相:A:水-0.1%醋酸;流动相B:乙腈-0.1%醋酸;梯度洗脱;流速:0.2mL@min-1.检测通道1(1S)187.0＞130.9;检测通道2(吴茱萸内酯)471.7＞161.2供试品用甲醇-氯仿(1:3)提取,与适量内标溶液(补骨脂素)混合后进样分析.结果:吴茱萸内酯在25～1000ng@mL-1浓度范围内呈良好的线形关系,其回归方程为C=3.124As/Ai-1.935×10-3,r=0.9996;样品的平均加样回收率100.2%.结论:本法的检测灵敏度高、专属性强,样品预处理简便、分析测试过程快捷.
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基于化学指纹图谱和多成分含量测定的吴茱萸质量评价
目的 建立吴茱萸药材的HPLC指纹图谱,并同时测定其中去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量.方法 采用phenomenex luna C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),乙腈-0.02％磷酸水二元梯度流动相,检测波长225 nm.对10批吴茱萸药材进行了指纹图谱和含量测定研究.结果 建立了吴茱萸的HPLC指纹图谱,标定了19个共有峰,并对其中4个成分进行了含量测定.去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴莱萸内酯分别在相应的浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.9％,98.9％,97.0％和98.8％.结论 该方法所建立的吴茱萸指纹图谱特征性强、方法简便,结合4种主要成分的含量测定可更好的控制其质量,为吴莱萸药材的质量控制提供科学依据.
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HPLC方法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸内碱的研究
目的 建立HPLC法测定华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量.方法 采用Waters SunFire C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,阿魏酸检测波长为323nm,吴茱萸内酯、吴茱萸碱检测波长为225nm,吴茱萸次碱检测波长为343nm,柱温30℃.结果 表明阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在3.91～39.10μg·mL-1(r=1.0000)、10.70～64.20μg·mL-1(r=0.9998)、7.60～76.00μg·mL-1(r=0.9999)、3.65～36.50μg·mL-1(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为96.6%(RSD=1.0%)、98.1%(RSD=2.2%)、100.3%(RSD=0.8%)、95.3%(RSD=1.2%).结论 本文方法简便准确,可用于华佗再造丸中阿魏酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量测定.
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吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤体外透皮吸收研究
目的:考察吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤的体外透皮吸收特性.方法:采用改良的Franz扩散池,以离体小鼠皮肤为透皮屏障,通过体外透皮吸收实验,用高效液相色谱法检测接收液和皮肤中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的质量浓度,拟合渗透曲线方程,计算累积透过量、渗透速率、皮肤滞留量.结果:吴茱萸碱、关茱萸次碱和吴茱萸内酯的透皮吸收速率分别为0.64、0.44、4.91μg/(crn2·小、时),24小时累积透过量分别为15.05±2.40、10.69±1.04、114.16±6.83 μg/cm2,24小时滞留量分别为0.77±0.42、1.66±0.81、4.97±0.691μg/cm2.结论:吴茱萸粉末醋调敷小鼠皮肤,吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯均可透皮吸收,为吴茱萸醋调敷外治法的研究提供了实验依据.
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HPLC同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯含量的方法.方法:采用高效液相色谱法,Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水梯度洗脱,0～30 min,甲醇-水(32∶68),30 min以后,甲醇-水(63∶37);流速:0.8 ml/min;检测波长:225 nm;柱温:32℃.结果:吴茱萸碱的回归方程:Y=4252.1X+16.231,R2=1,线性范围0.20～4.0 μg;吴茱萸次碱回归方程:Y=988.18X-18.269,R2=1,线性范围0.20～4.0 μg;吴茱萸内酯回归方程:Y=131.09X-9.113,R2=0.9992,线性范围0.363～7.26μg.吴茱萸碱平均回收率为97.8%,RSD1.11%;吴茱萸次碱平均回收率为97.3%,RSD1.17%;吴茱萸碱平均回收率为97.8%,RSD2.10%.结论:该方法稳定,重现性好,操作简单.
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高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱及吴茱萸内酯的含量
目的:建立以高效液相色谱法测定吴茱萸提取物中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱含量的方法.方法:十八烷基键合硅胶柱,流动相乙腈-水-四氢呋喃-乙酸(51:48:1:0.1).检测波长210nm.结果:3种成分能很好的分离.吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的线性范围分别为:0.866～2.599μg·ml-1(r=0.9999)、0.419～1.258μg·ml-1(r=0.9999)、0.407～1.707μg·ml-1(r=0.9995).平均回收率吴茱萸内酯(%)为97.01(n=5),RSD(%)为1.68;吴茱萸碱(%)为99.74,RSD(%)为0.17;吴茱萸次碱(%)为99.01(n=5),RSD(%)为0.24.结论:方法简便快速,重现性好.
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不同采收期对吴茱萸品质的影响
目的 考察吴茱萸不同采收期的主要成分的差异,为吴茱萸药材合理利用提供参考.方法 应用HPLC方法测定吴茱萸果实中吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,以此为指标考察不同采收期药材主要成分的变化规律.结果 吴茱萸品种随成熟期不同,生物碱含量呈先升高、再保持稳定、后随药材的老熟而呈降低的趋势.结论 湖南浏阳地区吴茱萸的佳采收期是8月底,湖南浏阳地区石虎的佳采收期是9月初,广西柳城地区疏毛吴茱萸的佳采收期是8月中下旬,广西桂林地区疏毛吴茱萸的佳采收期是8月中旬.
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吴茱萸化学成分研究
目的研究吴茱萸的活性成分.方法用硅胶色谱技术和重结晶等方法分离化学成分,用IR、NMR和 MS等波谱方法确定其结构.结果获得4个化合物,分别鉴定为吴茱萸碱(Ⅰ)、吴茱萸次碱( Ⅱ)、吴茱萸内酯(Ⅲ)和羟基吴茱萸碱(Ⅳ).结论首次系统归属吴茱萸碱和吴茱萸次碱的波谱数据
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基于物质基础研究甘草用量对吴茱萸和制吴茱萸煎出率的影响
目的: 考察吴茱萸用甘草炮制前后,其有效成分含量以及水煎出率的差异,探索甘草与吴茱萸配伍比例与煎出率的关系.方法: 以吴茱萸有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为研究对象,采用HPLC-DAD 检测吴茱萸用甘草炮制前后有其效成分含量变化,以及不同比例甘草与吴茱萸同煎有效成分煎出率,并绘制有效成分煎出量与甘草比例的关系曲线.结果: 甘草制吴茱萸后,有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱含量均有下降,但煎出率显著升高; 吴茱萸和制吴茱萸水煎液中吴茱萸内酯煎出率分别为5. 317 和6. 451％,吴茱萸碱煎出率分别为0. 166％和0. 437％,吴茱萸次碱煎出率均为0; 甘草与吴茱萸同煎组,甘草比例小于1∶3 时,吴茱萸内酯煎出率较不加甘草组高,比例在小于1∶2 时,吴茱萸碱煎出率较不加甘草组高; 而制吴茱萸各组,加入甘草组吴茱萸内酯和吴茱萸碱煎出率均小于不加甘草组.结论: 甘草炮制吴茱萸有利于有效成分吴茱萸内酯、吴茱萸碱的煎出; 吴茱萸次碱水煎不能煎出,可能为"外用吴茱萸有降压作用,而水煎内服无此作用"的科学解释; 制吴茱萸与甘草配伍会降低吴茱萸有效成分的煎出,建议临床配伍慎用.
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HPLC法同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴茱萸内酯的含量
目的:建立同时测定吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱与吴茱萸内酯含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为迪马C18(200 mmx4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.04％庚烷磺酸钠溶液(48:52,V/V),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为225 nm,柱温为35℃.结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸内酯的选样浓度分别在5.38～53.80、5.02～50.20、10.30～103.00 μg·mL-1(r均为0.9999)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系；三者平均加样回收率分别为99.75％、97.66％、85.68％,RSD分别为0.67％、1.16％、1.54％(n=6).结论:本方法简便、可行、重复性好,可用于吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定；但吴茱萸内酯的回收率较低,需进一步改进其测定方法.
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高效液相色谱法波长切换法同时测定吴茱萸中3组分含量
目的 建立同时测定吴茱萸中吴茱萸内酯、吴茱碱和吴茱萸次碱含量的高效液相色谱(HPLC)波长切换法.方法 色谱柱为C18柱(250 mm × 4. 6 mm,5μm),流动相为乙腈-0. 2%磷酸溶液(35:65),流速为2. 0 mL/min,柱温为30℃,波长切换(0~15 min,205 nm;15. 01~28 min,225 nm).结果 吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱进样量分别在0. 186~3. 72μg,0. 040 24~0. 804 8μg,0. 040 08~0. 801 6μg范围内与峰面积线性关系良好( r=0. 999 7,0. 999 9,0. 999 9 ) ,平均回收率分别为96. 30%,97. 66%,97. 46%,RSD分别为1. 43%,1. 32%,1. 80%( n=6).结论 该法简便,快速准确,灵敏度高,重复性好,可用于吴茱萸药材的质量控制.
