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半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏CYP450酶活性的影响
目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性.方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性.结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P＜0.01)；辛开组对CYP2C6有抑制作用(P＜0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用；甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P＜0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用.结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著.
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表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用
表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性.该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1 A2,CYP2E1,CYP2 C9亚型活性的影响.结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22 μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用.该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据.
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药物基因组学的发展及其在个体化用药中的应用
药物基因组学是20世纪90年代末发展起来的基于功能基因组学与分子药理学的一门科学.它从基因水平研究基因序列的多态性与药物效应多样性之间的关系,研究基因及其突变体对不同个体药物作用效应差异的影响,并以此为平台指导药物开发及合理用药,为提高药物的安全性和有效性,避免不良反应,减少药物治疗费用和风险,实现个体化医疗提供有力的信息和技术保障.
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药物对人肝CYP450酶诱导和抑制作用体外评价体系的建立与验证
建立药物对CYP450酶诱导与抑制作用的体外评价方法并进行验证.LC-MS/MS法测定人肝微粒体CYP450酶7种主要亚型的8个底物代谢产物;在优化的温孵条件下,底物法测定人肝微粒体CYP450酶的活性;应用已知抑制剂对所建立的温孵体系进行验证.LC-MS/MS法测定人肝细胞CYP450酶3种主要亚型的底物代谢产物;底物法测定人原代肝细胞CYP450酶的活性,同时收集温孵后的人肝细胞,应用Taqman荧光探针法测定主要亚型mRNA的表达量;应用已知诱导剂对所建立的温孵体系进行验证.建立的LC-MS/MS分析方法符合生物分析要求;已知抑制剂和诱导剂在本实验温孵体系下均表现出明显的抑制作用或诱导作用.建立的实验方法准确、可靠,可用于体外评价药物对CYP450酶的诱导或抑制作用.
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D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制和诱导作用
目的:本文探讨了D-异苯环戊胺对大鼠肝脏细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)酶活性的抑制和诱导作用.方法:采用探针底物法,通过考察D-异苯环戊胺在体外温孵体系中对大鼠肝微粒体CYP1A1/2,2C6,2D1/2,2E1和3A1/2的IC50值评价其对各亚型的抑制作用.通过考察大鼠连续灌胃10d后肝微粒体中CYP1 A 1/2和CYP3A1/2活性的变化评价其诱导作用.结果:D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP2C6和CYP2D1/2的IC50分别为5.3和2.3 μmol·L-1,对分别以睾酮和咪达唑仑为底物时CYP3A1/2的IC50分别为8.3和1.7 μmol·L-1.30和100 mg· kg-1剂量D-异苯环戊胺连续灌胃给药10 d后,大鼠肝脏CYP1 A1/2和CYP3A1/2酶活性为空白对照组的2倍以上.结论:D-异苯环戊胺对大鼠肝微粒体CYP2C6,CYP2D1/2和CYP3A1/2表现出中等强度的抑制作用,对CYP1A1/2和CYP3A1/2有一定的诱导作用.
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慢性肝疾病对肝CYP450酶活性的影响
慢性肝疾病是临床常见疾病之一,CYP450s基因是由一组超家族的P450同工酶基因编码,主要在肝脏中合成和表达.慢性肝疾病对CYP450s的合成和表达均会产生影响,从而影响肝脏CYP450s对内源性物质和外源性物质的代谢.而且肝疾病对CYP450的各个酶的影响不很一致,具有选择性.肝硬化患者的给药需要临床医生根据实际情况进行调节.
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不同急性肝损伤大鼠模型对5种CYP450酶的影响
目的 比较研究不同化学品致急性肝损伤大鼠模型体内CYP450酶活性的变化.方法 以正常大鼠作为对照,分别采用四氯化碳(CC14)、D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)、d-萘异硫氰酸酯(ANIT)复制大鼠急性肝损伤模型,以Cocktail探针法,单剂量尾静脉注射由CYP450 5种同工酶的特异性探针底物非那西丁(CYP1 A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2 C19)、右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑(CYP3 A4)配置的Cocktail探针溶液后,从大鼠眼底静脉丛采集不同时间点的血样,采用UPLC-MS/MS检测5种探针药物的血药浓度,采用PK Solution 2TM对数据进行处理,并计算主要药动学参数.与正常大鼠相比,不同模型大鼠的探针药物药动学行为的改变作为CYP450同工酶代谢活力评估依据.结果 与正常大鼠相比:CC14模型大鼠的CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6与CYP3A4的活性均受到抑制,其中对CYP3A4的抑制作用比较轻微;D-GalN/LPS模型大鼠的CYP2C9、CYP2D6与CYP3A4的活性均受到诱导,其中对CYP2D6与CYP3 A4的诱导较轻微,CYP2C19的活性被抑制,但对CYP1 A2的影响不明显;ANIT模型大鼠的CYP2C9、CYP2C19与CYP3A4的活性被诱导,对CYP3A4的诱导较轻微,CYP1 A2的活性被强烈抑制,对CYP2D6作用不明显.结论 不同化学品致急性肝损伤模型大鼠体内CYP450酶活性存在非常显著差异.
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大明胶囊对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法研究大明胶囊对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响.方法 将大鼠随机分组,低剂量和高剂量组分别给予大明胶囊50、100 mg·kg-1,空白对照组给予生理盐水,通过HPLC测定探针药物的血药浓度并计算其药动学参数,评价大明胶囊对相应大鼠细胞色素P450酶活性的影响.结果 低剂量和高剂量组中美托洛尔、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的药动学参数与空白对照组相比无显著性差异；高剂量组中咖啡因和奥美拉唑AUC,t1/2,ρmax显著增加,Vd/F和CL/F明显降低,tmax无明显变化,低剂量组各参数与空白对照组无显著性差异；低剂量和高剂量组中氨苯砜AUC,t1/2,ρmax显著增加,Vd/F和CL/F 明显降低,tmax无明显变化.结论 大明胶囊对大鼠CYP3A4有抑制作用,对CYP2C9、CYP216和CYP2E1无显著影响,高剂量大明胶囊对CYP1A2和CYP2C19有抑制作用,低剂量则无明显影响.
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西酞普兰与氟西汀治疗抑郁症的对照研究
目的:评估西酞普兰改善抑郁症的效果.方法:应用西酞普兰和氟西汀治疗抑郁症随机取样30例,采用随机、单盲方法,60例患者随机分为西酞普兰和氟西汀组,疗效用HAMA量表分别于用药前、用药后第7天、14天、56天各评1次,安全性评定用TESS量表.结果:两组总体疗效相当,但在治疗的第2周,这种差异达到显著性.接受西酞普兰治疗的患者第2周平均HAMD减分率显著高于接受氟西汀治疗的患者,存在统计学意义;治疗第2周开始,西酞普兰组症状显著轻于氟西汀组,17项HAMD减分率也明显高于氟西汀组;以上结果表明,合用苯二氮(艹卓)部分掩饰了组间抗抑郁疗效的差异性.西酞普兰的抗焦虑效应提示其对伴发睡眠障碍和焦虑的患者是一种更好的单药治疗方法.结论:西酞普兰是一种安全有效、不良反应少、并有极佳的安全性和耐受性的理想抗抑郁药物.
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苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶5个亚型的体外抑制作用
目的 研究苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶的体外抑制作用.方法 制备大鼠肝微粒体.将苦碟子注射液分别与混合探针药物非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、睾酮和氯唑沙宗共同孵育,UPLC-MS/MS法检测各探针药物的代谢物.结果 在测定浓度范围内,苦碟子注射液对CYP2E1、CYP2C9和CYP2C19的活性抑制率小于50％;对CYP1A2、CYP3A4的IC50值分别为12.68％、8.11％,远高于临床日用药浓度0.20％～0.80％.结论 在正常剂量下,苦碟子注射液对大鼠CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19几乎不显示抑制作用,对CYP1A2、CYP3A4几乎没有抑制作用.
关键词： 苦碟子注射液 肝微粒体 CYP450酶 探针药物 UPLC-MS/MS -
附子双酯型二萜生物碱对代谢酶的影响及心肌毒性研究进展
附子是一种常用的中草药,具有广泛的药理作用,但心脏毒性显著.其主要毒性成分为双酯型二萜生物碱,如:乌头碱、中乌头碱、次乌头碱,如何减轻附子毒性但又不影响药效格外重要.多年来,众多学者不断深入研究附子生物碱的毒性机制,并取得了一定的共识.文章通过总结国内外研究资料,阐述了附子所含有的双酯型二萜生物碱对细胞色素P450酶系的影响,以及与其心脏毒性相关心肌的氧化损伤、细胞凋亡、缝隙连接蛋白Cx43和钠、钾、钙离子稳态的影响,并阐述了与上述机制相关的甘草、人参与附子配伍的作用机制.
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中药影响华法林抗凝作用的研究进展
中药临床应用日益广泛，与华法林合用增多，中药可能通过影响华法林与血浆蛋白的结合、影响 CYP450酶的活性、影响转运体作用干扰华法林代谢而影响抗凝效果；中药本身具有抗凝或抗血小板聚集作用与华法林合用产生协同作用而增强抗凝效果。本文总结近年来影响华法林抗凝作用的中药及可能机制，为临床合理用药提供参考。
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石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶系中CYP1 A2和 CYP2 E1的影响
目的：研究石膏水煎液对肝微粒体细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2E1活性的影响，指导临床合理用药。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ ELISA）对肝脏细胞色素P450酶CYP1A2和CYP2 E1进行了初步研究。结果：与空白对照组比较，石膏水煎液对大鼠肝脏中的CYP1 A2含量有降低的趋势，对CYP2 E1的含量没有显著影响。结论：石膏对大鼠肝微粒体CYP1 A2活性有抑制作用，临床上当与经过CYP1 A2代谢的药物合用时应适当调整药量。
关键词： 石膏 抗体夹心酶联免疫吸附法 CYP450酶 CYP1A2 CYP2E1 -
混合探针法评价白香丹胶囊对大鼠体内CYP450酶活性的影响
目的：建立同时测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物的方法，并采用Cocktail法研究白香丹胶囊对大鼠CYP450酶活性的影响。方法：选用茶碱（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C6）、右美沙芬（CYP2D2）、奥美拉唑（CYP2D1）、咪达唑仑（CYP3A2）作为探针药物。大鼠随机分为对照组和给药组，给药组每天灌胃白香丹胶囊0.675 g·kg-1，对照组灌胃等量生理盐水，连续给药14 d。第15天均灌胃给予6个探针药物，于不同时间点眼眶取血，采用LC-MS/MS法测定各探针药物浓度，计算药动学参数并进行组间t检验。结果：与对照组相比，给药组茶碱（P<0.01）、氯唑沙宗（P<0.01）、甲苯磺丁脲（P<0.05）代谢显著加快；右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑代谢无显著性差异。结论：白香丹胶囊对大鼠 CYP1A2有中强诱导作用，对CYP2E1、CYP2C6有弱诱导作用。
关键词： 白香丹胶囊 CYP450酶 混合探针法 高效液相色谱串联质谱法 -
CYP450酶基因多态性对丙戊酸血药浓度的影响
目的 探究CYP2C9、CYP2A6和CYP2B6基因多态性对单用丙戊酸(Valproic acid,VPA)治疗的癫痫患儿血药浓度的影响.方法 收集单用VPA治疗的癫痫患儿400例,记录患儿的年龄、性别、体质量、日服药剂量等基本信息;应用荧光偏振免疫法(fluorescence polarigation immunoassay,FPIA)测定VPA血药浓度;采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,分别采用直接测序法、巢式PCR法和质谱法检测CYP2C9*3、CYP2A6*4和CYP2B6*6位点的基因型.应用单因素方差分析(ANOVA)考查基因多态性对VPA血药浓度的影响.结果 400例癫痫患儿CYP2C9*3、CYP2A6*4、CYP2B6*6的等位基因频率分别为2.75％、6.50％、23.00％,其中CYP2C9*3和CYP2A6*4基因多态性可以显著升高VPA标准化血药浓度(concentration dose ratio,CDRVPA)(P=0.024;P=0.000),但CYP2B6*6基因多态性对CDRVPA的影响差异无统计学意义(P=0.95).结论 CYP2C9*3和CYP2A6*4等位基因多态性均能影响CDRVPA,因此CYP2C9*3和(或)CYP2A6*4等位基因携带的患儿VPA使用剂量应低于常规剂量,以避免发生不良反应.
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基于CYP450酶的复方苦参注射液代谢及其与紫杉醇相互作用的研究
目的 基于细胞色素P450酶(CYP450s)的代谢,考察复方苦参注射液体外与紫杉醇的相互作用,为临床应用提供参考.方法 将不同体积百分比浓度的复方苦参注射液与CYP2C8同工酶的探针底物紫杉醇及人肝微粒体共同孵育,采用LC-MS/MS检测特异性探针底物代谢物6α-羟基紫杉醇的生成量,计算半数抑制浓度(IC50).结果 复方苦参注射液在0.600 g/mL时对CYP2C8的抑制率为100.0％,其IC50值为0.052 8 g/mL.结论 复方苦参注射液在体外与紫杉醇注射液之间存在基于CYP2C8的代谢性相互作用,为临床应用两药抗肿瘤提供了参考.
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小肠CYP450酶在药物代谢中的作用
小肠是口服药物的主要吸收器官,同时也是进行药物代谢的重要场所.小肠黏膜上皮细胞含有大量Ⅰ、Ⅱ药物代谢酶,其中以CYP450酶为重要,参与众多药物的生物转化.小肠CYP450主要有CYP1A1、CYP2C9、CYP2C19、CYP2J2、CYP2D6、CYP3A 6种同工酶,其中CYP3A和CYP2C在小肠中表达高,分别约占CYP450总含量80%和16%.与肝脏相比,小肠CYP450酶活性及其表达更易受到外源性化合物影响.本文重点讨论小肠CYP450s活性与表达及其在药物代谢中的作用以及由CYP450s的诱导或抑制引起的药物相互作用.
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刺五加注射液对大鼠肝微粒体四种CYP450亚型酶活性的影响
目的:研究刺五加注射液在大鼠体外肝微粒体中对CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,为临床合理联合用药提供参考.方法:在大鼠体外肝微粒体中分别加入四种亚型酶的探针药物甲苯磺丁脲(TB)、右美沙芬(DM)、氯唑沙宗(CLZ)、睾酮(TS)和低、中、高剂量的刺五加注射液,温孵后用HPLC法测定各空白对照组和不同剂量刺五加注射液给药组中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异,以评价刺五加注射液对各亚型酶活性的影响；中剂量组活性显著降低的亚型酶进一步考察抑制作用的强弱(即IC50和Ki值).结果:与空白对照组比较,刺五加注射液低、中、高剂量给药组对CYP3A4活性的影响均有统计学意义(P＜0.01),抑制率分别为 10.22％、19.00％、30.29％,其IC50和K1值分别为3.96％和2.74％(V/V)；低、中、高剂量给药组对CYP2D6活性的影响均无统计学差异(P＞0.05)；低剂量给药组对CYP2C9、CYP2E1活性的影响无统计学差异(P＞0.05),中、高剂量给药组对两个亚型的抑制作用有统计学差异(P＜0.05),但中剂量给药组抑制率均小于8.50％,高剂量给药组抑制率均小于12.00％.结论:刺五加注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A4有抑制作用,且符合混合型抑制模型；对CYP2C9、CYP2E1抑制作用较弱；对CYP2D6活性无影响.
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“N-in-One Cocktail”探针法评价4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷对CYP450酶的抑制作用
目的:建立基于UFLC-ESI-MS/MS技术的“N-in-One Cocktail”探针法,预测4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷可能出现的食物-药物、药物-药物相互作用,评价其在体外对人肝微粒体CYP450酶活性的影响.方法:4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷与CYP450酶特异性探针底物:非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19、CYP3A)、咪达唑仑(CYP3 A4)、睾酮(CYP3A4)、咪达唑仑(CYP2C)在人肝微粒体进行孵化反应.同时检测对应的9种代谢产物(乙酰氨基酚、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、1'-羟基咪达唑仑、6β-羟基睾酮、4-羟基咪达唑仑、奥美拉砜)的浓度,通过与对照组比较,确定4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷对以上CYP450酶活性的影响.结果:4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷在0～200μmol/L时对所研究的CYP450酶亚型基本不存在抑制作用.结论:4-羟甲基苯基-O-β-D-吡喃阿洛糖苷可能不会引起有临床意义的CYP450酶抑制现象的发生.
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补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响
目的 研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分(羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响.方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围,以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响,利用Cocktail 探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用.结果 从顶侧(apical,AP)到底外侧(basolateral,BL)(AP→BL),芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp＞10-6 cm/s,表明其吸收性良好,羟基红花黄色素A的Papp为10-6cm/s,表明其吸收性一般;且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高,BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5,其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用;补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P＜0.05).结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运,毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用,补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度.
