血浆纤维结合蛋白修复皮肤创伤的临床应用

目的观察血浆纤维结合蛋白修复皮肤创伤的临床效果.方法60例皮肤创伤患者随机分成两组,Fn观察组和红汞对照组,创面做常规清洗后,分别涂Fn制剂及红汞.结果Fn观察组用药次数少,平均20次左右,平均停止渗出时间为9.5h,平均愈合时间为5d,一期愈合率为90%,无一例感染,而且止痛效果较好.结论Fn制剂修复皮肤创伤临床疗效优于红汞.

人胎盘组织液HPLC指纹图分析

目的建立人胎盘组织液制品批间一致性的质量控制方法.方法采用HPLG指纹图方法,观察同一生产单位不同生产批之间,以及不同生产单位之间人胎盘组织液制品HPLC主要色谱峰的变化.结果同一生产单位不同批的人胎盘组织液指纹图谱基本一致;不同生产单位的人胎盘组织液的指纹图谱有差异.结论HPLC指纹图方法可以作为常规质量控制指标,用于控制胎盘组织液制品批间一致性.

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒核蛋白合成基因的表达及应用

目的用合成基因表达产物取代淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)或其他方法重组蛋白抗原,用于LCMMV感染的诊断.方法采用Prosis软件对LCMV核蛋白(Np)全长氨基酸序列进行亲疏水性分析,合成LCMVsRNA第1816～2178位核苷酸序列编码的Np第380～500位氨基酸基因,克隆在His-tagpET-28a融合表达,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,建立ELISA检测试剂.结果表达产物主要以包涵体形式存在,表达量达20%以上.表达产物经Ni-NTA-Agarose纯化后纯度达到90%以上.经检测93份人血清,有6份病毒抗体阳性,阳性率为6.5%(6/93),与全病毒抗原检测结果7.5%(7/93)相近.结论用合成基因表达产物取代LCMV抗原检测病毒抗体,不仅可以消除病毒传播可能,而且特异性强.为LCMV感染诊断及生物材料质量控制提供有效方法.

葡萄糖、丁酸钠和乳酸对重组CHO细胞表达EPO糖基化的影响

目的研究葡萄糖、丁酸钠和乳酸对CHO细胞表达的重组人红细胞生威素(EPO)糖基化的影响.方法将重组CHO细胞在添加一定浓度的葡萄糖、丁酸钠和乳酸的培养基中培养,从收获上清中分离纯化EPO,定量测定其唾液酸含量和分析其糖基化位点占有率.结果在实验范围内,葡萄糖对糖基化影响较小;丁酸钠明显降低了唾液酸含量,但使N-连接寡糖的位点占有率略有增加;L-乳酸的作用相反,高浓度的乳酸增加了唾液酸含量,N-连接寡糖的位点占有率略有降低.结论丁酸钠和乳酸对重组CHO细胞表达的人EPO的糖基化有明显影响,葡萄糖的作用较小.

家兔肌钙蛋白的分离纯化

目的分离提纯肌钙蛋白I(TnI)以便制备心肌梗塞诊断试剂.方法采用离子交换、分子筛、疏水层析相结合的方法分离纯化兔骨骼肌肌钙蛋白C(sTnC),制备TnC-epharose4B亲和层析柱.结果所提纯的sTnC,经SDS-PAGE分析已达到电泳纯,经UV-250扫描显示出特异性吸收曲线,证明其含有较多的苯丙氨酸,而不含色氨酸,进一步证明其纯度.结论为提纯TnI创造了条件.

多元醇和糖类对菠萝蛋白酶热稳定性的影响

目的寻找能提高菠萝蛋白酶热稳定性的物质.方法当温度恒定时,菠萝蛋白酶的热失活过程遵循一级蜕变规律:d[E]-dt=-Kd@t,失活半寿期是常数,可以用作衡量菠萝蛋白酶热稳定性的指标.结果某些多羟基、多羧基化合物能明显延长菠萝蛋白酶在较高温度下的半寿期.结论这些物质的稳定化作用可能是由于影响了溶剂结构和疏水相互作用,从而维护了酶分子活性的三维构象.

LHRH-PE40注射剂对体外培养人肿瘤细胞系的细胞毒作用

目的观察LHRH-PE40注射剂对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用.方法用MTT检测LHRH-PE40对体外培养的人肿瘤细胞的细胞毒作用,找出敏感肿瘤细胞系.结果LHRH-PE40对体外培养的多种人肿瘤细胞具有细胞毒作用,细胞对药物的敏感程度依次为:smmuu7721(人肝癌)＜HEPG2(人肝癌)＜HCT-8(人结肠癌)＜MCF-7(人乳腺癌)＜A549(人肺腺癌)＜MGC-803(人胃癌).结论为动物体内的药效学研究和临床用药提供依据.

聚乙二醇活性酯对干扰素α2b化学修饰的初步研究

目的探讨聚乙二醇活性酯(mPEG-ss MW5000和MW 20000)修饰重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)的佳反应条件.方法在不同反应条件下,用聚乙二醇活性酯修饰rhIFNα2b,采用VSV-Wish细胞病变抑制法测定修饰后rhIFNα2b的生物学活性.结果随着PEG对rhIFNα2b摩尔比的增加或修饰反应时间的延长,rhIFNα2b的修饰产物相对分子质量和不均一性增加,且随着rhIFNα2b,修饰度的提高,其生物学活性逐渐降低.结论初步确立了PEG修饰rhIFNα2b的反应条件,反应摩尔比与聚乙二醇活性酯的相对分子质量是影响反应的关键因素.

甲型肝炎病毒(H2株)快速适应变异株全基因序列分析

目的探索甲型肝炎病毒(H2株)细胞适应的分子机制.方法将甲型肝炎减毒活疫苗毒株(HAVH2K7)在人胚肺二倍体细胞KMB17上快速连续传代增强适应(14d),检测连续传代后抗原滴度和感染性滴度,测定第18代(HAV H2K7P18)全基因组序列.结果适应至第18代抗原滴度达1:512,感染性滴度为7.5LogCCID50/ml.整个基因组出现了10个核苷酸突变,变异率为0.13%,变异较大区域位于5'末端非编码区(5'UTR),有3个核苷酸变异.编码区7个突变,2个是无义突变,5个有义突变导致5个氨基酸变化,分别位于VP2 A-S;2C,Q-P;3A,RC;3C,T-A和3D,V-G.结论HAV H2K7基因组5'UTR、2C区、3A区、3C区和3D区变异协同作用促进在KMB17细胞上快速增强适应.

应用磺基水杨酸法测定蛋白含量

目的建立既能排除硫柳汞的干扰,又可微量测蛋白质含量的方法.方法采用磺基水杨酸沉淀比浊法测定生物制品中的蛋白质含量.结果以人血白蛋白为标准,其标准曲线的回归方程为y=252.69x-1.0013,相关系数r=0.9998.对两种制品用该法进行方法学检验,重复性试验SD分别为0.7406和0.4096,CV分别为4.63%和2.11%.回收率分别为95.03%和105.73%.结论该法快速简捷,结果准确,具有可行性.

狂犬病病毒基因疫苗和精制疫苗诱导小鼠产生的免疫应答

目的比较重组疫苗与精制疫苗诱导小鼠的免疫应答,为研制新型狂犬病疫苗奠定基础.方法应用含狂犬病病毒(RV)糖蛋白基因的重组质粒pcDNA3-RGP(重组疫苗)和精制灭活狂犬病病毒(精制疫苗)分别免疫小鼠后检测细胞免疫和体液免疫水平.结果重组疫苗3次免疫与精制疫苗1次免疫的体液免疫水平相当,重组疫苗2次免疫与精制疫苗1次免疫的细胞免疫水平相当,重组疫苗与精制疫苗免疫小鼠的保护率分别为30%和84.6%.结论重组疫苗诱导小鼠产生的免疫应答水平低于精制疫苗.

重组人血小板生成素参考品的研制

目的制备重组人血小板生成素参考品,为rhTPO的体外生物学活性测定提供相对标准.方法采用TPO依赖细胞株进行rhTPO体外生物学活性测定.结果效价测定9次.SD=0.1579,CV=14.1%,平均效价为11000U/支,其他项目均达到国家标准品要求.参考品置-25℃保存6个月后稳定性良好.结论作为参考品可用于rhTPO体外生物学活性控制.

低浓度单克隆抗体的分离纯化

目的从杂交瘤细胞的培养上清中纯化低浓度单克隆抗体.方法采用离子交换层析与凝胶过滤相结合进行分离纯化.结果纯化的IgG抗体纯度＞90%,总回收率为34%.结论除了杂蛋白的等电点与目的蛋白相近的情况外,这种方法可应用于低浓度蛋白的分离纯化.

血栓调节蛋白核心片段的基因克隆、表达及鉴定

目的获得血栓调节蛋白及其核心片段,以便研制临床诊断治疗制品.方法应用PCR获得血栓调节蛋白EGF4～6的基因片段,构建克隆载体EGF4～6/PT和表达载体EGF4～6/PBV220,表达血栓调节蛋白EGF4～6.结果原核细胞表达量约占菌体可溶性蛋白的12%,经KPTT试剂盒检测具有生物学活性.结论为进一步研究临床诊断治疗制剂创造了条件.

Vero、CHO和杂交瘤细胞在生物反应器中的生长和代谢

目的研究Vero、CHO和杂交瘤细胞在生物反应器中的生长和代谢.方法应用搅拌式生物反应器,培养了Vero、CHO和鼠杂交瘤7H3细胞,对营养物质及代谢产物进行定量分析,测定各个培养中发酵相关参数.结果培养过程中葡萄糖和谷氨酰胺的摄取与培养液中两者的浓度正相关.控制营养物质的加入可提高细胞产量.结论Vero、CHO和7H3细胞在生物反应器培养中有相同的生长和代谢模式.

绿色荧光蛋白和白介素-2在卡介菌中的共表达

目的构建能复合表达绿色荧光蛋白和白介素-2重组卡介菌(rBCG-GFP-IL-2).方法采用基因工程技术构建pDmGFP-IL-2重组穿梭质粒,用电穿孔法将重组质粒pDmGFP-IL-2转化大肠杆菌和卡介菌中,采用限制酶切,荧光显微镜下观察及PCB方法鉴定pDMGFP-IL-2和rBCG-GFP-IL-2.结果琼脂糖凝胶电泳结果显示pDmGFP-IL-2质粒的限制酶切条带,PCR法检测重组BCG菌株可见明显IL-2片段扩增条带约0.3kb,rBCG-GFP-IL-2液体培养菌液在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光,小鼠皮下接种rBCGGFP-IL-21周后,取组织冰冻切片在荧光显微镜下可见绿色荧光.结论成功构建了重组质粒pDMGFP-IL-2和共表达绿色荧光蛋白和白介素-2重组BCG(rBCG-GFP-IL-2).

流行性乙型脑炎病毒减毒株at222的生物学特性

目的分析乙型脑炎病毒减毒株at222生物学特性,并与亲代野生强毒株AT31进行比较.方法a2t222株和AT31株在伊蚊细胞C6/36上繁殖,培养上清用作病毒液,在Vero细胞上以病毒蚀斑法测定病毒滴度,以小鼠脑内感染法测定其神经毒力.结果at222株在蚊细胞上生长缓慢,但仍可达到与其亲代强毒株相似的滴度,即108PFL/ml.在Vero细胞上形成蚀斑比其亲代野生强毒株AT31明显小,脑内感染小鼠不致死,而AT31株却表现出了极强的神经毒力.结论对乙型脑炎病毒减毒株at222的生物学特性进行了全面分析,为研究和开发乙型脑炎疫苗提供理论依据.

重组人干扰素α1b滴鼻治疗呼吸道病毒感染的疗效

目的观察重组人干扰素α1b滴鼻治疗呼吸道病毒感染的疗效.方法将60例呼吸道病毒感染的患儿随机分为2组,治疗组在常规治疗基础上,加用重组人干扰素(滴宁)滴鼻治疗;对照组在常规治疗基础上加用病毒唑(加入葡萄糖液中静点),两组均观察3天.结果发热、咳嗽、流涕、睡眠不安、肺部体征等症状消失时间,观察组均优于对照组.结论重组人干扰素α1b治疗呼吸道病毒感染疗效显著.

重组人粒细胞集落刺激因子活性测定标准品的研制

目的建立效价检测用的重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)国家标准品.方法标准品按WHO有关要求进行制备、分装、冻干、检测,用G-CSF国际标准品为标准进行协作标定.结果冻干重组人GCSF标准品经检测,外观、无菌实验合格,水分为0.90%,加速热稳定实验表明其生物学活性在-20、4和25℃条件下20个月保持稳定.该标准品经4家实验室协作标定共32次测定,加权平均效价为5.15×106IU/支;几何平均效价为4.91×106IU/支.实验均数的95%可信区间为4.64×106～5.20×106IU/支,单次实验的95%参考值范围为3.45×106～6.106×106IU/支,平均可信限率为5.46%.结论该批重组人G-CSF国家标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准品使用,效价定为5.0×106IU/支,编号为98/01.

应用RP-HPLC法测定疫苗中2-苯氧乙醇的含量

目的建立一种检测2-苯氧乙醇含量的方法.方法采用反相高效液相层析(RP-HPLC)方法.结果检测结果准确、稳定,线性关系好,重复性高.结论可用于疫苗中2-苯氧乙醇含量检测.

干扰素口含片剂的研制

作者采用乳糖和淀粉等作为赋形剂,与重组人干扰素(长春生物制品研究所生产,300万IU/m1)按适当比例混合制成口含片剂,每片约含干扰素500IU,经稳定性试验、细菌学检查、急性毒性试验、病毒抑制实验、NK细胞活性实验和小鼠口腔粘膜SlgA实验,验证干扰素在剂型改变、途径和剂量改变之后活性及稳定性是否改变.

应用无血清培养中试的三批WuT3单抗的质量分析

为了对应用无血清培养中试的3批WuT3单抗进行全面的质量分析.我们参照国家药品监督管理局颁布的<人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程>进行检定.结果所有指标均符合规程要求,其中单抗蛋白含量为5.45～5.53 mg/支,纯度＞95%,IgG单体纯度＞95%,残余骨髓瘤细胞DNA含量＜100pg/剂量,用免疫荧光法检测单抗对正常人外周血淋巴细胞(PBI)的反应活性为64～68(正常值范围为66.6±9.8).无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体检测、热原质试验均合格.在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定.结果表明,体外法无血清培养生产的WuT3单抗符合临床观察的质量要求.

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)不同间隔时间加强免疫的效果

为进一步探讨甲型肝炎减毒活疫苗的优化免疫方案,我们进行了不同间隔时间加强免疫的效果观察,现将结果报告如下.甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)为浙江普康生物技术股份有限公司生产.滴度为106.5TCID50/ml,每剂1ml,皮下注射. 观察对象为浙江省台州市椒江区,随机挑选4个小学的学生,年龄在7～13岁之间,以前从未接种过甲肝疫苗,且抗-HIV-IgG为阴性(ELJSA法).总人数259名,分别于第1针接种后6个月,12个月,3年和6年接种第2针,观察抗-HAV-IgG阳转率及几何平均滴度(GMT),并于接种后1个月采血分离血清.

保证输血与血液制品安全性的综合措施

自从第二次世界大战以来,由于战争规模的扩大加速了血站与血库的发展,且全血逐渐被分离和纯化的各种血液成分所取代,其中主要的进步是将引起严重输血反应的大部分白细胞成分从全血中去除掉,这不但可以明显减少由输血引起的不良免疫反应,而且还可减少由这种有形成分携带的许多致病因子.但去除这些有形成分以后,供体血液中仍然含有许多对受体可造成危害的成分,包括同种异型抗原、同种异型抗体以及各种潜在的感染性因子.此外,在血液收集和加工处理的过程中,血液或血液制品同各种人工材料接触,这种接触除了可造成交叉污染之外,还可产生某些化学物质,并在储存的过程中促使一些血液细胞产生新的生物学活性因子,这些因子对受体都可能造成非预期的不良损害.针对上述各种复杂因素,为保证输血与血液制品的安全性,必须采取一系列的综合措施.本文将只针对血液与血液制品中的主要感染性因子及其制定防范措施所面对的一些实际问题进行讨论.

浅谈下一代制造系统

我国生物医药行业的市场潜力诱人,发展前景十分广阔.国家新药研发协调小组会议上提出的<生物医药工程产业行动纲要>中指出:大力培养生物医药工程产业,使之保持15%-21%的增长率,到2005年总产值达到400～500亿元,到2015年总产值达到1100～1300亿元.我国的制药业总体竞争能力较低,医药业总体经济实力不强.虽然近几年我国生物医药产业发展较快,截止1997年,我国药品生产企业已达6319家.但是重复研究发展现象大量存在,导致研究、生产力量分散(据不完全统计,仅诺氟沙星这一项产品,全国生产企业就有828家,其中有一个省高达75家).此外,软件建设与硬件建设不配套导致资源的效益得不到充分的发挥,利用率很低,仅为40%左右.

新型精制三价流行性感冒灭活疫苗在长春生物制品研究所投产新闻发布会在京举行