中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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单纯疱疹病毒-1基因转移载体在BALB/c小鼠体内的生物分布
目的 研究单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)基因转移载体在BALB/c小鼠体内的生物分布.方法 建立实时定量PCR反应方法,并对方法进行验证.BALB/c小鼠经肌肉注射1×107 pfu HSV-1,每隔2d给药1次,共3次.分别于末次给药后24h和63 d摘取组织脏器,采用建立的实时荧光定量PCR法检测不同组织脏器中HSV-1基因拷贝数.结果 建立的荧光定量PCR法线性范围宽,特异性强、重复性好.HSV -1基因转移载体广泛分布于各个组织器官,主要分布在背根神经节、注射部位、肺和脾脏,分布量随注射时间的延长逐渐下降.结论 HSV-1经肌肉注射后,能高效地将目的基因转运到小鼠体内的各个部位;HSV-1能为基因转移提供安全,有效的载体平台.
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慢性脑血流灌注不足对老龄大鼠海马组织CA1区ABCA1的表达及脂代谢的影响
目的 探讨慢性脑血流灌注不足对老龄大鼠海马组织CA1区ABCA1的表达及血清中总胆固醇(Total cholesterod,TC)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)含量的影响.方法 采用持久性双侧颈总动脉结扎法(Permanent occlusion of bilateral common carotid arteries,2VO)致老龄大鼠脑血流灌注不足,术后不同时间采用免疫组化法检测大鼠海马组织CA1区ABCA1的表达,全自动生化分析仪检测大鼠血清中HDL和TC的水平.结果 术后1周,大鼠海马组织CA1区ABCA1表达阳性的细胞数与假手术组相比明显减少(P＜0.01);术后2周,ABCA1阳性细胞数逐渐增多;术后3周,ABCA1阳性细胞数明显增加,数量多,分布广(P＜0.01);术后4周,ABCA1阳性细胞数又开始下降(P＜0.01).术后2周,与假手术组相比,大鼠血清中HDL和TC含量显著升高(P＜0.05),随着缺血时间的延长,又逐渐降低,术后4周与术后2周相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCA1和HDL、TC在血管性痴呆模型大鼠海马和血清中呈动态表达,推测ABCA1在血管性痴呆中发挥了保护作用.
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人溶菌酶-人碱性成纤维细胞生长因子融合基因在毕赤酵母中的表达
目的 在毕赤酵母中表达人溶菌酶( Human lysozyme,hLY)-人碱性成纤维细胞生长因子(Human basic fibroblast growth factor,hbFGF)融合基因,并分析融合蛋白的hLY活性.方法 从人全血中提取总RNA,以其为模板,采用RT-PCR法扩增编码hLY成熟肽的cDNA.利用重叠PCR技术将hly基因与hbfgf基因融合,中间引入凝血酶识别位点序列;将融合基因克隆至载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-hly-thr-hbfgf.电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选高拷贝重组子GS／hly-thrhbfgf,甲醇诱导表达融合蛋白,Bradford法测定重组子发酵液上清中总蛋白含量,改良舒加法检测融合蛋白hHLY-THR-hbFGF的hLY活性.结果 获得的融合基因序列与理论序列一致;经PCR鉴定,融合基因hly-thr-hbfgf已整合入GS115基因组内;表达的融合蛋白相对分子质量约为33 000,发酵液上清中总蛋白含量为196.20 mg/L,融合蛋白的hLY活性为40 U/ml.结论 已成功地在毕赤酵母GS115中表达了具有hLY活性的hHLY-THR-hbFGF融合蛋白.
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甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白的原核表达、纯化及其免疫保护性
目的 原核表达、纯化甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,并检测其免疫原性和免疫保护性.方法 采用PCR从甲型副伤寒沙门菌( CMCC 50973)基因组DNA中扩增btuB基因,插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经分子筛和亲和层析纯化后,免疫BALB／c小鼠,ELISA法检测小鼠血清中抗BtuB IgG抗体效价,并用小绝对致死剂量活菌攻毒,计算小鼠的保护率.结果 重组原核表达质粒pET-30a-btuB经双酶切和测序证实构建正确;重组蛋白的相对分子质量约为67 000,表达量约为菌体总蛋白的25％,主要以包涵体形式表达;纯化的重组蛋白纯度大于90％,可与鼠抗His-Tag单抗特异性结合;纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠可获得高效价的抗BtuB IgG抗体,且可获得60％的保护率.结论 成功原核表达并纯化了甲型副伤寒沙门菌外膜BtuB蛋白,重组蛋白免疫原性良好,并能够为小鼠提供一定的保护作用.
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重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定
目的 构建携带绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签和hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 以pcDNA3／hNK4质粒为模板,采用高保真DNA聚合酶扩增hNK4基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-hNK4,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP,经Pac Ⅰ酶切线性化后转染AD-293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,经4轮扩增后,测定病毒滴度;将重组腺病毒感染AD-293细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测感染细胞中NK4基因的转录及蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hNK4-EGFP对肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)诱导的MDA-MB-231细胞增殖的影响.结果 重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP经Pac Ⅰ酶切鉴定证明构建正确;经包装及4轮扩增后,重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的滴度可达1.5×1011 PFU／ml;经RT-PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的NK4基因能够在AD-293细胞中表达;HGF可促进MDA-MB-231细胞增殖,而Ad5-hNK4-EGFP可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞增殖.结论 成功构建了表达hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,其可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞的增殖,为进一步深入研究HGF和NK4的功能、相互作用及作用机制奠定了基础,也为乳腺癌的靶向基因治疗提供了一个新的靶点.
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脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C的原核表达及活性鉴定
目的 原核表达脓肿分枝杆菌非溶血性磷脂酶C,并检测其生物学活性.方法 以脓肿分枝杆菌标准株( ATCC19977)基因组DNA为模板,PCR扩增非溶血性磷脂酶C基因,克隆至pQE-30载体,构建重组原核表达质粒pQE-30-MAB_0555,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经Ni2+-NTA层析纯化后,采用杯碟法检测其生物学活性.结果 重组原核表达质粒pQE-30- MAB_0555经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为53 000,纯化后蛋白浓度为0.40 mg/ml,具有溶解蛋黄中卵磷脂的酶活性,无溶血活性.结论 成功地在大肠杆菌DH5α中表达了非溶血性磷脂酶C,为进一步研究其生物学功能及其在脓肿分枝杆菌致病机制中的作用提供了材料,也为研制脓肿分枝杆菌临床治疗药物及寻找新的药物作用靶点提供了思路.
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两种转基因载体对关节软骨细胞中内参基因转录水平的影响
目的 探讨质粒型和腺相关病毒两种转基因载体对家兔关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB内参基因mRNA转录水平的影响.方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EFGP)报告基因的质粒型载体pcDNA6.2-EGFP和腺相关病毒载体AAV2-EGFP分别转染至体外培养的家兔关节软骨细胞中,荧光显微镜观测转染后关节软骨细胞中EGFP的表达,实时PCR技术检测两各组关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB基因mRNA转录水平的变化.结果 转染48 h后,两组转基因关节软骨细胞中均可见明显的绿色荧光;与正常对照组相比,4个内参基因在两组转基因细胞内的转录水平均下调,其中GAPDH和TUBB基因下调较小,腺相关病毒载体对转基因的影响小.结论 腺相关病毒载体对关节软骨细胞中内参基因表达的影响低于质粒型载体,表明腺相关病毒对关节软骨细胞本身影响较小;GAPDH和TUBB基因可作为实验的内参基因校正目的基因的表达量.
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两种层析方法纯化轮状病毒效果的比较
目的 比较两种不同的凝胶层析纯化方法对人轮状病毒(Rotavirus,RV)的纯化效果及其对病毒抗原性和免疫原性的影响.方法 病毒收获液经超滤浓缩后,分别采用Q Sepharose Fast Flow(QFF)离子交换层析和Sepharose 4 Fast Flow (4FF)凝胶过滤层析纯化,采用A群轮状病毒诊断试剂盒(胶体金)检测纯化病毒的抗原性;电镜观察病毒的形态;荧光灶法测定病毒纯化前后的感染性滴度;双抗体夹心ELISA法测定抗原含量;Lowry法测定纯化前后样品的蛋白含量;SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的病毒蛋白;纯化病毒经灭活后,PAGE分析病毒的核酸带型,免疫小鼠,检测纯化病毒的免疫原性.结果 QFF洗脱峰1和4FF洗脱峰1为RV抗原阳性,电镜观察可见完整的、大小约70 nm的RV颗粒;经QFF和4FF层析纯化后,病毒的感染性滴度分别为7.10和4.50 lgCCID50/ml,终抗原同收率分别为65.3％和11.8％,病毒液总蛋白去除率分别为99.68％和99.52％;SDS-PAGE分析显示,经QFF和4FF纯化的样品未见明显杂蛋白条带,且特异性良好;纯化病毒灭活后,病毒基因组带型未发生改变,且保持了良好的抗原性和免疫原性.结论 两种凝胶层析方法均能纯化人轮状病毒,综合比较,QFF离子交换层析纯化效果优于4FF凝胶过滤层析.
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酶法处理短棒状杆菌的效果分析
目的 探讨酶法处理短棒状杆菌(Enzyme-digested Corynebacterium parvum product,ECPP)的效果.方法 采用热灭活、超声、Pronase酶消化等方法处理短棒状杆菌(Corynebacterium parvum,CP),电镜观察其结构,并测定其蛋白、多糖及核酸含量.将BALB/c纯系小鼠、青紫蓝家兔和NIH小鼠均随机分为阴性对照组(CK,0.9％ NaCl)、短棒状杆菌制剂(C.parvum product,CPP)组(1 000μg/ml CPP)、低剂量ECPP组(ECPPⅠ组,500μg/mlECPP)和高剂量ECPP组(ECPPⅡ组,1 000 μg/mlECPP),观察BALB/c纯系小鼠脾激活情况、异常毒性及血清IL-2、IFNγ及TNF-α的水平,青紫兰家兔热原反应,NIH小鼠抑瘤效果.结果 电镜观察可见,与热灭活的CP相比,ECPP细胞壁外围厚度明显变薄,细菌内部结构无明显变化;ECPP的蛋白、多糖及核酸含量较CPP均明显下降,且差异均有统计学意义(P＜0.01);ECPPⅡ组小鼠的脾激活指数为2.96,能抑制艾氏腹水瘤,存活率为80％,热原试验合格,异常毒性试验显示其体重增长较CPP组显著,能显著提高小鼠血清中IL-2、IFNγ及TNF-α3种细胞因子的水平.结论 酶法处理短棒状杆菌制剂可降低副反应,提高机体免疫功能,具有良好的抗肿瘤作用,是一种有应用前景的新免疫调节剂.
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不同比色方法测定疫苗中游离甲醛残留量的比较
目的 比较不同方法测定疫苗中游离甲醛残留量的差异.方法 采用不同方法测定0.25～100 μg/ml标准甲醛溶液,绘制反应曲线,初步确定各种方法的线性范围,通过重复测定,计算相关系数,对标准曲线的线性范围进行验证;分析制品中铝佐剂、离心及添加物对检测结果的影响,并对方法的适用性进行验证.结果 品红亚硫酸法(《中国药典》)的线性范围为25～100 μg/ml,改良乙酰丙酮法与乙酰丙酮法(Sinovac)的线性范围为0.25 ～ 100 μg/ml,乙酰丙酮法(Crucell)、乙酰丙酮法( Pasteur)和盐酸苯肼法(MSD)的线性范围为0.25～50 μg/ml,各方法标准曲线的相关系数为0.994～1.000.品红亚硫酸法测定未离心的含铝佐剂样品的回收率在18.06％ ～76.00％之间,测定离心后的含铝佐剂样品的回收率在17.19％ ～ 75.95％之间;乙酰丙酮法测定未离心的含铝佐剂样品的回收率在88.28％ ～ 103.21％之间,测定离心后的含铝佐剂样品的同收率在95.43％ ～102.78％之间;盐酸苯肼法测定未离心的含铝佐剂样品的回收率在99.27％ ～ 117.74％之间,测定离心后的含铝佐剂样品的回收率在100.55％ ～ 119.40％之间.各方法测定含添加物样品的回收率在94.68％ ～ 101.86％之间.改良乙酰丙酮法(412 nm)测定含甲醛疫苗的回收率在100.84％ ～ 105.88％之间,变异系数在0.28％ ～3.08％之间.结论 改良乙酰丙酮法操作简便,灵敏度高,线性范围广,结果准确可靠,适用于疫苗中游离甲醛残留量的测定.
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b型流感嗜血杆菌发酵工艺的优化
目的 优化b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)的发酵工艺,以提高Hib荚膜多糖的产率.方法 通过考察初始pH值和葡萄糖浓度对培养液菌体浓度(A550值)及多糖产率的影响,优化摇瓶培养条件;通过考察溶氧百分比、恒定pH值及补加葡萄糖对Hib生长和多糖产率的影响,优化20L发酵罐的培养条件.以优化的发酵工艺连续进行3批Hib发酵,考察优化发酵工艺的稳定性.结果 优化的摇瓶培养条件为:初始pH值为7.2,初始葡萄糖浓度为6g/L.优化的发酵工艺为:溶氧百分比控制在20％,控制pH值恒定为7.2,于接种后5h开始补加200 g/L葡萄糖,速率为3ml/min.与优化前相比,Hib对数生长期由8h延长至10 b左右,菌体终浓度(A550值)由1.5提高至3.4,Hib荚膜多糖产率由63 mg/L提高至96 mg/L.以优化的发酵工艺培养的3批Hib培养物菌体终浓度(A550值)在3.3～3.7之间,多糖产率在92～98 mg／L之间,稳定性较好.结论 优化的发酵工艺可延长Hib对数生长期、促进菌体生长、提高荚膜多糖产率.
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长链人胰岛素样生长因子-1的分离纯化
目的 建立长链人胰岛素样生长因子-1(Long chain Arg3 human insulin-like growth factor-1,LR3IGF-1)的分离纯化方法.方法 将LR31GF-1毕赤酵母工程菌接种至30 L发酵罐进行高密度发酵,发酵液经离心、超滤浓缩后,采用SPSepharose FF阳离子交换层析、Phenyl SepharoseFF疏水层析、S-100凝胶过滤层析和DEAE Sepharose FF层析对发酵上清液中的表达产物进行分离纯化,测定蛋白浓度,计算蛋白收率,并分析纯化样品的浓度.采用MTT法检测各步纯化样品促NIH-3T3细胞增殖的活性.结果 纯化LR3IGF-1的蛋白总收率为28％,RP-HPLC纯度可达95％以上.随着纯化过程中样品纯度的增加,LR3IGF-1的活性也相应增强,各纯化步骤基本不影响LR3IGF-1的生物活性.结论 初步建立了LR3IGF-1的分离纯化工艺,其简便有效,为LR3IGF-1的规模化生产奠定了基础.
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表达乙型肝炎表面抗原重组汉逊酵母细胞破碎方法的比较
目的 比较球磨法、低温超高压破碎法和Yeast Buster酵母细胞裂解液法破碎表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的重组汉逊酵母(Hamenula polymorpha,HP)细胞的效果.方法 分别采用球磨法、低温超高压破碎法和细胞裂解液法破碎表达HBsAg的重组HP细胞和重组酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiea,SC)细胞,测定其细胞破碎率、细胞破碎后蛋白和HBsAg释出量,比较3种方法破碎细胞的效果.结果 球磨法使球磨罐和磨球中少量杂质渗入样品,其中氧化锆罐-氧化锫珠组合破碎重组HP细胞形成的杂质较少,破碎率约为60％,氧化锆罐-玻璃珠组合破碎重组HP细胞后蛋白浓度高达2.71 mg/ml,HBsAg释出量高为180.04 μg/ml;低温超高压破碎法破碎重组HP细胞破碎率高为71.18％,细胞破碎后蛋白浓度高可达6.72mg／ml,HBsAg释出量高为350.63μg／mnl;细胞裂解液法破碎细胞平均破碎率为60.30％,破碎不同次数的蛋白浓度及HBsAg释出量差异较大.结论 低温超高压破碎法更适合破碎表达HBsAg的重组HP细胞.
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重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化
目的 优化重组鲨鱼血管生成抑制因子(Shark angiogenesis inhibition factor,SAIF)功能活性区(aSAIF)蛋白的纯化工艺.方法 利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的融合蛋白His6-SUMO-aSAIF进行纯化.纯化后的融合蛋白经SUMO蛋白酶切除小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)标鉴,再经镍柱二次亲和层析获得非融合aSAIF蛋白,采用WST-8法对其进行血管生成抑制活性检测.结果 优化的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2mol/L的NaCl进行洗脱;亲和层析的洗脱液为20 mmol／L磷酸盐,500 mmol／L NaCl,250 mmol／L咪唑,pH 7.4;SUMO蛋白酶与融合蛋白的佳酶切比例为1∶480,酶切时间为1h.终获得的aSAIF蛋白纯度可达95％,具有较好的抑制血管内皮细胞增殖的活性,且呈剂量依赖性.结论 已成功建立了aSAIF的纯化工艺,为后续大规模生产及抑制血管生成机制的研究奠定了基础.
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脑心肌炎病毒蚀斑纯化及滴度测定方法的建立
目的 建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)蚀斑纯化及滴度测定方法.方法 将EMCV系列稀释后接种至单层Veto细胞,覆盖甲基纤维素,出斑后挑取蚀斑进行扩增,收获病毒液.选取5个EMCV原液样品感染Veto细胞进行蚀斑滴度测定,经结晶紫染色计数蚀斑,计算病毒滴度.重复测定5次,验证蚀斑法的精密性,并与微量细胞病变法进行比较.结果 EMCV感染Veto细胞后,约48 h出现边缘整齐直径为0.5～ 1.5mm的蚀斑,经结晶紫染色后,可见清晰透明空斑,边缘清晰.5个EMCV原液样品经蚀斑法测得的病毒滴度在3.16×106～1×107 PFU/ml之间,变异系数为0.88％～2.07％;经微量细胞病变法测得的病毒滴度均大于3.16×107 PFU／ml,变异系数为1.63％～2.90％,表明蚀斑法精密性更好;两种方法经直线回归分析,具有线性相关性(r=0.810,P=0.097).结论 建立了简便直观的EMCV蚀斑纯化方法及精密性良好的蚀斑滴度测定方法,为EMCV的生物学特性及疫苗研究奠定了基础.
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用于疫苗研究的感染动物模型的建立及其应用
动物模型在疫苗研究中具有重要作用,利用动物模型可对疫苗的安全性、免疫原性以及保护效力进行评价.本文对用于疫苗研究的感染动物模型的建立方法,包括动物的选择、感染剂量和感染途径、感染结果的描述以及建立感染动物模型的制约因素等作一综述.
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阪崎肠杆菌检测技术的研究进展
阪崎肠杆菌( Enterobactor sakazakii,ES)是近年来新发现的一种食源性条件致病菌,主要引起婴幼儿疾病.目前对该菌检测技术的研究除传统的生化检测方法之外,主要集中在分子生物学检测技术上.本文对ES检测技术的研究进展作一综述.
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人乳头瘤病毒31型诱发宫颈癌形成的研究进展
宫颈癌是导致妇女死亡的第2大癌症.人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染是导致宫颈癌发生的主要原因.HPV是一种具有严格种属特异性、无包膜、双链闭环小型DNA病毒,根据其致病力的强弱,可分为高危型和低危型.在我国,除HPV16、18为常见类型外,HPV31型也是一种发病率较高的类型.本文对HPV31流行病学概况、感染细胞及增值过程、主要蛋白作用机制及其他致癌因素等方面作一综述.
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PPE68基因重组卡介苗的构建及其免疫原性
目的 构建携带结核分枝杆菌PPE68基因的重组卡介苗(BCG),并检测其诱导小鼠的免疫应答情况.方法 将带有分枝杆菌复制子OriM的穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM电转化入BCG中,PCR鉴定重组BCG.用鉴定正确的PPE68/OriM重组BCG免疫BALB／c小鼠,每2周免疫1次,共3次,末次免疫后2周采血,分离血清,检测血清中IgG2a、IFNγ和IL-12水平;取脾、肺,分离脾淋巴细胞,检测经特异性蛋白刺激后淋巴细胞的增殖水平;进行脾CD4+和CD8+T淋巴细胞计数,计算CD4+/CD8+比值;检测脾、肺荷菌量并观察组织病理变化.结果 PPE68／OriM重组BCG经PCR鉴定构建正确;其免疫小鼠后,可诱导小鼠血清中IgG2a、IFNγ和IL--12水平显著增加(P＜0.05),脾淋巴细胞增殖显著(P＜0.05),CD4+和CD8+T细胞百分比增加,CD4+／CD8+T细胞比值降低,脾、肺均无菌落生长且未见明显病理改变.结论 成功构建了PPE68基因重组BCG,其免疫BALB/c小鼠能明显提高小鼠的Th1型免疫效应,有利于机体抗结核菌感染.
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4Aβ1-15的原核表达及纯化
目的 在大肠杆菌中表达4Aβ1-15,并进行纯化.方法 以重组质粒pcDNA3.1-s4Aβ1-15为模板,PCR扩增1-2Aβ1-15基因,并克隆至pQE30a原核表达载体中,构建重组表达质粒pQE30a-2Aβ1-15,再以其为模板,扩增2-2Aβ1-15基因,克隆人pQE30a-2Aβ1-5质粒中,构建重组原核表达质粒pQE30a-4Aβ1-15,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白.结果 重组表达质粒pQE30a-4Aβ1-15经双酶切和测序证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为18 000,主要以可溶形式表达,表达量约占上清液总蛋白的40％,可与鼠抗人Aβ40单抗特异性结合;纯化后基本除去了杂蛋白.结论 成功构建了重组原核表达质粒pQE30a-4Aβ1-15,表达并纯化了His6-4Aβ1-15融合蛋白,为阿尔茨海默病基因工程疫苗的研究奠定了基础.
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狂犬病病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代适应性
目的 探讨狂犬病病毒( Rabies virus,RV )aG株在原代鸡胚成纤维细胞上的传代适应性.方法 将RV北京株固定毒10aG株豚鼠脑毒种在鸡胚成纤维细胞上连续传代培养,显微镜观察细胞的形态变化,ELISA检测各代次收获液中的病毒量,取11、21、31代病毒收获液,小鼠脑内毒力测定法检测病毒滴度.利用正交试验筛选适病毒培养条件,以筛选的佳比例接种病毒,绘制病毒生长曲线,并进行特异性及免疫原性检测.结果 狂犬病病毒aG株感染鸡胚成纤维细胞未观察到明显的细胞病变效应,随着传代次数的增加,病毒含量呈上升趋势,11、21、31代病毒收获液的滴度分别为4.0、7.7和7.17 LogLD50/ml;多次传代后,适培养条件为细胞浓度150×104个／ml、接种比例1∶500、血清浓度2％、收获时间为5 d;病毒连续收获3次后,细胞开始脱落,经检测其病毒滴度可达7.0 logLD50／ml以上,中和指数可达8 500,第21代病毒制备成的试制疫苗效价为2.0 IU/ml.结论 RV北京株固定毒10 aG株豚鼠脑毒种可适应于鸡胚细胞培养,为鸡胚细胞狂犬病疫苗的研究奠定了基础.
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rhIL-12与HBsAg联合给药对食蟹猴rhIL-12药代动力学的影响
目的 探讨重组人白细胞介素-12(Recombinant human interleukin-12,rhIL-12)与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)联合给药对食蟹猴rhIL-12药代动力学的影响.方法 以抗rhIL-12单克隆抗体为包被抗体,生物素标记的抗人IL-12单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心BAS-ELISA法,测定食蟹猴血清中rhIL-12含量,并对其进行验证.将食蟹猴分为HBsAg (90 μg/kg,肌肉注射)与rhIL-12(0.5 μg/kg,皮下注射)联用低剂量组和HBsAg(90 μg/kg,肌肉注射)与rhIL-12(40 μg/kg,皮下注射)联用高剂量组,分别于给药后不同时间采血,分离血清,用建立的BAS-ELISA法测定血清中rhIL-12浓度,采用统计矩方法计算药代动力学参数.结果 建立的双抗体夹心BAS-ELISA法的低定量限为31.25 pg/ml,特异性较强,精密性和准确性良好,检测不同条件处理的样品均保持稳定;联合给药后,食蟹猴血清中rhIL-12的浓度随其剂量的增加而增加,于9h左右达峰值,高、低剂量组半衰期分别为(21.24±2.03)和(16.05±4.76)h.结论 rhIL-12与HBsAg联合给药对食蟹猴rhIL-12的药代动力学无影响,本研究为IL-12的临床应用奠定了基础.
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蛋白酶体抑制剂MG132对肝癌细胞生长的影响及其机制
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15生长的影响及其机制.方法 用不同浓度的MG132(0、250、500、1 000 nmol／L)处理HepG2和HepG2.2.15细胞,采用MTT法、流式细胞术和Westem blot法检测其对两种细胞增殖、细胞周期和细胞中相关蛋白GSK-3β、pGSK-3β、β-catenin表达的影响.结果 经MG132处理后,两种细胞的增殖均受到明显抑制,致使细胞周期阻滞在G1期,细胞中pGSK-3β和β-catenin蛋白的表达量上升,且均呈剂量依赖性,其对HepG2.2.15细胞的影响更为显著.结论 MG132可通过使肝癌细胞中GSK-3β失活和细胞周期阻滞抑制细胞增殖,为MG132成为一种新型HCC治疗药物提供了实验依据.
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阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制作用
目的 研究阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制作用.方法 采用双层平板法、琼脂扩散法及液体培养活菌计数法等考察10株阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌的体外抑制效果;分析白色念珠菌的耐酸性;通过琼脂扩散法分析不同pH值的乳酸杆菌发酵上清液对白色念珠菌的抑菌效果;并分析10株乳酸杆菌产酸能力的差异.结果 10株阴道源乳酸杆菌中,ZDY78、ZDY128、ZDY159a、ZDY162a 4株对白色念珠菌的抑制能力较强;白色念珠菌的耐酸能力较强,当发酵上清液的pH≤3.0时,才能观察到明显的抑菌圈;乳酸杆菌的发酵上清液具有抑制白色念珠菌生长的能力,且抑菌效果与培养液中发酵上清所占比例呈正相关;抑菌能力较强的4株乳酸杆菌其产酸能力强于其余6株乳酸杆菌.结论 4株阴道源乳酸杆菌对白色念珠菌具有明显的抑制作用,且与其产酸能力呈正相关.
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姜黄素对慢性脑缺血老龄鼠认知功能障碍和血清HDL水平的影响
目的 观察姜黄素对慢性脑缺血老龄鼠认知功能障碍和血清高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)水平的影响.方法 采用双侧颈总动脉永久性结扎( Permanent occlusion of bilateral common carotid arteries,2VO)建立老龄鼠慢性脑缺血模型,并将模型鼠随机分为单纯缺血组以及姜黄素高剂量组(100 mg／kg)和低剂量组(50 mg／kg),另设假手术组和正常对照组,单纯缺血组、假手术组和正常对照组注射等量DMSO.各组均于术后24h开始经腹腔注射,每日1次,连续30 d.采用Morris水迷宫行为学实验测试老龄鼠的空间学习及记忆功能,全自动生化分析仪检测血清HDL水平.结果 给药30 d后,经连续5d的训练,姜黄素高、低剂量组的逃避潜伏期均明显短于单纯缺血组(P＜0.01),在原平台所在象限停留时间占总游泳时间的比例明显高于单纯缺血组(P＜0.01或P＜0.05),血清中HDL水平明显高于单纯缺血组(P＜0.01).结论 姜黄素可以改善慢性脑缺血老龄鼠的认知功能障碍,并提高血清HDL水平.本实验为早期诊断血管性痴呆提供了新的生物学指标,也为姜黄素治疗血管性痴呆提供了新的药物靶点.
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低剂量循环应用环磷酰胺联合树突状细胞疫苗对小鼠黑色素瘤的治疗效果
目的 观察低剂量循环应用环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)联合树突状细胞(Dendritic cells,DCs)疫苗对小鼠黑色素瘤的治疗效果,并探讨其机制.方法 体外培养小鼠骨髓来源的DCs,制备DCs疫苗.通过皮下接种黑色素瘤B16细胞复制黑色素瘤荷瘤鼠模型,将荷瘤小鼠随机分为5组:循环CTX+ DCs疫苗组、单次CTX+ DCs疫苗组、单纯DCs疫苗组、单纯循环CTX组和单纯荷瘤组,治疗方式为腹腔注射CTX( 100 mg/kg)后4d,经瘤周皮下注射TL-DCs疫苗.每隔7d治疗1次,共3次.观察肿瘤生长情况、小鼠存活状况、自身免疫病及化疗毒副反应的发生情况;于末次治疗后第5天处死小鼠,采用ELISA法检测各组小鼠血清中IFNγ水平.免疫组化法检测小鼠淋巴结内CD8阳性细胞的数量.结果 循环CTX+ DCs疫苗组抑瘤效果明显(P＜0.01),该组小鼠平均存活期明显高于其他各组(P＜0.01),血清中IFNγ水平明显高于其他各组(P＜0.01),淋巴结内CD8阳性细胞数量和平均光密度值均高于其他各组(P＜0.01);应用CTX的各治疗组中均未见免疫性白斑等自身免疫病及明显化疗毒副反应.结论 循环应用低剂量CTX可规律调控调节性T细胞Tregs,能显著提高DCs疫苗的疗效.
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河南省息县和新安县健康人群乙型脑炎中和抗体阳性率及发病率
目的 分析河南省信阳息县和洛阳新安县健康人群流行性乙型脑炎(乙脑)病毒中和抗体水平及发病率.方法 选择息县和新安县为监测点,所监测健康人群按年龄随机分组,采用微量中和试验检测乙脑流行季节前(5月)后(11月)血清中和抗体水平,分析流行季节前后两县健康人群乙脑中和抗体阳性率和发病率及与年龄的相关性.结果 息县健康人群中乙脑血清中和抗体平均阳性率在乙脑流行季节前达69.96％,中和抗体阳性率随年龄的增长而逐渐升高,20岁以上年龄组中和抗体阳性率达100％;新安县中和抗体阳性率随年龄变化起伏较大,出现"双峰现象".两县5岁以下儿童中均有乙型脑炎病例出现,而新安县发病率亦出现"双峰现象",存在成人乙脑病例,80岁以上人群发病率达26.93％.结论 河南省信阳息县和洛阳新安县健康人群中乙脑血清中和抗体的阳性率与发病率密切相关;各年龄组人群之间的中和抗体阳性率及两县相同年龄组人群的中和抗体阳性率均有差别.
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甲型H1N1流感流行期间长春市孕妇流感发病情况与甲流疫苗接种意愿调查
目的 调查甲型H1N1流感(简称甲流)流行期间长春市孕妇流感发病情况与甲流疫苗接种意愿.方法 以2009年8月～2010年3月在长春市60个社区卫生服务中心进行围产期保健并建卡的7 080名孕妇为目标人群,根据孕期构成比,分别随机抽取32名孕早期、73名孕中期和75名孕晚期孕妇为调查对象,采用问卷调查法,于2010年3月15～18日通过电话调查该人群急性上呼吸道感染罹患情况、甲流疫苗免费接种政策知晓情况、接种意愿及不愿接种的原因.结果 共获取了179名孕妇的基本信息,其中有12.85％的孕妇愿意接种甲流疫苗,教育程度及高危情况对孕妇接种甲流疫苗的意愿有显著影响(P＜0.001);孕妇对甲流疫苗免费接种信息的知晓途径主要来源于社区防保医生告知(41.73％);不愿意接种甲流疫苗的孕妇主要是担心疫苗的安全性;39.75％不愿意接种甲流疫苗的孕妇表示甲型H1N1流感再次出现高峰期时愿意接种.结论 本次调查结果具有代表性,为今后采取有针对性的干预措施和干预渠道提供了依据,也为下一步重点人群疫苗接种的需求和预算提供了参考.
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TCF7L2基因rs290487多态性与辽宁地区2型糖尿病发病的相关性
目的 探讨TCF7L2基因m290487多态性与辽宁地区2型糖尿病发病的相关性.方法 选取2008年12月～2010年7月在中国医科大学附属第四医院内分泌科临床确诊为2型糖尿病的患者255例,提取患者全血基因组DNA,PCR扩增TCF7L2基因单核苷酸rs290487,PCR产物经ACCⅡ酶切后,琼脂糖凝胶电泳分析rs290487的多态性及等位基因rs290487的突变与2型糖尿病发病的相关性.结果 TCF7L2基因rs290487 TT、TC、CC 3个基因型在2型糖尿病组与对照组的分布频率分别为48.24％、46.67％、5.10％和50.74％、40.39％、8.87％,组间差异均无统计学意义(P＞0.05);TCF7L2基因rs290487多态位点在两组间的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;Binary Logisti回归校正了性别、年龄、体重指数、血压、血脂等因素后,TCF7L2基因rs290487多态性与2型糖尿病的发生无相关性(P＞0.05).结论 辽宁地区人群中TCF7L2基因rs290487多态性与2型糖尿病的发生无相关性.
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ACK1在肺鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨ACK1在肺鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法 分别采用RT-PCR、免疫组化法检测45名患者肺鳞状细胞癌及癌旁正常黏膜组织标本中ACK1基因mRNA的转录水平和ACK1蛋白的表达水平,并分析ACK1高表达与临床病理特征之间的相关性.结果 60％的肺鳞状细胞癌组织中ACK1基因mRNA转录水平升高;64.4％的肺鳞状细胞癌细胞浆中ACK1蛋白高表达;ACK1高表达与肺鳞状细胞癌的淋巴结转移、肿瘤分期相关(P＜0.05);ACK1高表达与肺鳞状细胞癌的不良预后相关,但不是一个独立的影响预后的因素.结论 ACK1可作为一种新型分子标记物,预测原发性肺鳞状细胞癌患者的肿瘤侵袭和淋巴结转移,判断患者预后转归,为肿瘤的个体化治疗提供了实验依据.
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佛山市南海区首例B群流行性脑脊髓膜炎病例的流行病学调查分析
目的 对佛山市南海区首例B群流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)病例的流行病学特点进行调查分析,为进一步完善流脑防控策略与措施提供科学依据.方法 查阅病例病案,访视病例家属及其他相关知情人,并进行病例的流行病学个案调查.结果 患儿邱某某,男性,1岁2个月,于2011年7月11日开始发病,因发热、皮疹就诊并住院治疗,经抗感染、对症支持治疗后好转出院;发病前无与同类患者接触史;家庭居住条件和卫生环境一般;实验室检测证实,该病例为B群脑膜炎奈瑟菌感染;药敏试验显示,病原菌株对替卡西林、哌拉西林、美罗培南、亚胺培南、氨曲南、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星等均敏感,对复方新诺明、庆大霉素不敏感,对丁胺卡那霉素耐药;经采取综合预防控制措施,未出现二代病例.结论 该病例确诊为佛山市南海区首例B群流脑病例,预防控制B群流脑的关键是采取以加强病原学检测、敏感药物使用为重点的综合防控措施.
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肠道病毒71型中和抗体检测用标准病毒候选株的筛选及制备
目的 筛选并制备肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体检测用标准病毒候选株,规范EV71中和抗体检测方法.方法 通过对亲本株与非亲本株交叉中和试验,进行相应的几何平均滴度(GMT)比较,从10株EV71毒株中筛选出具有理想亲本中和能力、又具有较广泛交叉中和作用的毒株.筛选出的毒株按《中国药典》三部(2010版)相关要求,冷冻干燥后制备1批符合我国疾病流行特征的标准病毒候选株,联合3家实验室对候选株的病毒滴度进行协作标定,并初步应用于人血清样品的检测.结果 筛选出交叉中和能力强、分离、传代背景清晰的EV71V03株(523-07T)作为候选病毒株;制备的候选病毒株分装精确度、水分含量、无菌检查、支原体检查、其他外源因子检查等项目均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求;经联合标定,候选毒株的平均病毒滴度为4.83 lgTCID50/ml(95％ CI:4.53～5.12 lgTCID50/ml),变异系数为3.16％;应用候选毒株和中和抗体定值标准品检测EV71自然感染人血清样品,可将实验室间检测差异由4.4倍降至1.6倍.结论 初步筛选出的候选株EV71／523-07T株具有理想的亲本株中和作用,又具有较广泛的交叉中和特性,有望成为EV71中和抗体检测的标准毒株候选株.
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轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用
目的 原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测.方法 提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E coli BL21(DE3),表达rVP6.表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot 鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体.结果 重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7％:纯化的rVP6纯度达90％以上,蛋白浓度为8.304 μg／μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体.结论 成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组／亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组／亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
