重叠PCR技术在构建sodAP基因表达载体中的应用

目的 应用重叠PCR技术,构建节杆菌DMDC12的Mn-SOD基因sodAP的重组表达质粒,并在E. coli BL21(DE3)中表达.方法 设计两对引物,分别扩增启动子P121和sodAP基因序列,利用重叠PCR技术,将启动子P121与sodAP基因相连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pET-22b(+),构建重组质粒pET-PsodAP,转化E. coli BL21(DE3)进行表达.用SDSPAGE检测表达产物,光密度定量分析法分析目的 蛋白表达量.结果 启动子P121和sodAP基因的连接产物经凝胶电泳检测,可见约800 bp的目的 条带,测序结果与预期相符;重组表达质粒pET-PsodAP经双酶切鉴定,表明构建正确;目的 蛋白在E. coil BL21(DE3)中获得了表达,表达量占菌体总蛋白的19%.结论 应用重叠PCR技术,成功构建了sodAP基因的重组表达质粒,并在E. coli BL21(DE3)中获得表达,为Mn-SOD的进一步工业化生产奠定了基础.

激活素A对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的促进作用

目的 探讨激活素A对巨噬细胞吞噬活性的促进作用及其机制.方法 分别通过中性红试验、鸡红细胞法和流式细胞术,检测激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞的吞饮活性、吞噬活性以及对MHC Ⅰ、Ⅱ类分子和CD68表达的影响.结果 激活素A可明显促进RAW264.7细胞的吞饮及吞噬活性,对MHC Ⅰ、Ⅱ类分子表达没有影响,但可明显上调巨噬细胞表面分子CD68的表达.结论 激活素A可促进巨噬细胞系RAW264.7细胞吞噬活性,这与其促进巨噬细胞成熟有关.

口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达

目的 构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达.方法 RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定.将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平.结果 经双酶切及PCR鉴定,目的 基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致.荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录.结论 已成功构建了FMDV 2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK一21细胞中获得了表达.

KDRn3蛋白在人脐静脉血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用

目的 观察KDRn3蛋白在人脐静脉血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用.方法 将质粒pEGFP-N1/KDRn3扩增并鉴定后,以脂质体介导转染人脐静脉血管内皮细胞,培养一定时间后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.ELISA检测细胞培养上清中KDRn3的含量,MTT法检测KDRn3蛋白对人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响.结果 转染后48 h,在荧光显微镜下可见pEGFP-N1/KDRn3转染组人脐静脉血管内皮细胞发出绿色荧光.72 h发出绿色荧光的细胞增多,强度增强;转染后24、48和72 h,细胞培养上清中KDRn3含量与转染前比较均提高,且差异有显著意义;转染后48和72 h,pEGFP-N1/KDRn3转染组与对照组比较,细胞增殖有明显的抑制,且差异有显著意义.结论 KDRn3蛋白可在人脐静脉血管内皮细胞中表达,并能抑制其增殖.

用于制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株的构建

目的 利用λ噬菌体Red重组酶系统,构建用于制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株.方法 采用PCR方法,将完整的噬菌体基因Ⅲ和氯霉索抗性基因拼接,使其两端带有与四环素基因同源的36 nt序列;利用λ噬菌体Red重组酶系统,将其整合到大肠杆菌XL1-Blue的附加体上,以替换掉四环素基因,经氯霉素抗性筛选及PCR鉴定,获得包装菌株XLe-pⅢ;将基因Ⅲ缺失的噬菌体基因组导入包装菌株,制备缺陷型辅助噬菌体,集落形成试验检测缺陷噬菌体的感染能力.结果 所构建的包装菌株XLe-pⅢ经氯霉素抗性筛选及PCR鉴定,证明氯霉素抗性基因已与噬菌体基凶Ⅲ一同整合到附加体上,重组菌不能在含有氨苄西林的LB培养基中生长,仍保留四环素抗性;该包装菌株能用于制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体,制备的缺陷型辅助噬菌体的滴度为3.0×108.结论 利用λ噬菌体Red重组酶系统,已成功构建崩于制备基因Ⅲ缺失的辅助噬菌体的包装菌株,以其制备的缺陷型辅助噬菌体有望用于常规筛选或SIP体系.

重组人抗乙型肝炎病毒表面抗体的筛选及序列分析

目的 克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析.方法 从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Western blot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blasm比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析.结果 重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Western blot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别.结论 应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体.

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因的克隆及其高效表达

目的 克隆幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)基因,构建原核表达载体,并进行高效表达.方法 以幽门螺杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增UreB基因,双酶切后,与质粒pET-22b(+)连接,构建表达载体pET-22b(+)/UreB,分别转化E. coli BL21(DE3)、Origami(DE3)和Rossetta(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果 经酶切及测序,证明幽门螺杆菌UreB基因的原核表达载体构建正确.3种重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,均可见相对分子质量为64000的目的 蛋白条带,Rossetta(DE3)重组菌目的 蛋白表达量高,约占菌体蛋白的35%.Western blot结果表明,表达的目的 蛋白具有良好的反应原性.结论 已成功克隆了幽门螺杆菌UreB基因,并在大肠杆菌Rosssetta(DE3)中获得了高效表达.

HIV-1 Vif蛋白的体内表达及其生物学功能

目的 分别构建带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,在体内表达融合蛋白,并检测其生物学功能.方法 PCR扩增带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因,克隆至真核表达载体VRl012上.将抗病毒因子APOBEC3G(A3G)分别与空载体VR1012、HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,检测Vif-mbp和Vif-6His的表达,并进行A3G体内降解试验.将A3G和/或可产生病毒的质粒HXB2Neo △ Aif分别与HIV-1野生型Vif/VR1012、Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012共同转染293T细胞,通过A3G包装进病毒和Magi细胞感染试验,进一步检测HIV-1 Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白的生物学功能.结果 重组表达质粒Vif-mbp/VR1012和Vif-6His/VR1012经双酶切鉴定证明构建正确.转染293T细胞48 h后,Vif-mbp和Vif-6His融合蛋白均有表达,但表达的Vff-mbp有不同程度的降解.Vif-6His可降解A3G,使其表达量下降至10%左右,而Vif-mbp几乎不能降解A3G.Vif-6His可阻止A3G包装进病毒颗粒中,而Vif-mbp无此功能.Vif-mbp可使HXB2Neo △ Vif病毒感染能力恢复至15%,而Vif-6His可使其恢复至86%.结论 已成功构建了带有6His和mbp tag的HIV-1 Vif基因真核表达载体,表达的Vif-mbp融合蛋白影响了Vif的生物学功能,但Vif-6His融合蛋白不影响Vif的生物学功能.

Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用

目的 原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测.方法 从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化.以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的Cyclin A-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物Histone H1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验.结果 BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%.在体外磷酸化试验中,未出现与目的 蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带.结论 BMF蛋白在无细胞体系中不能被Cyclin A-Cdk2磷酸化.

hTERT核心启动子调控HSV-TK自杀基因系统诱导肿瘤细胞的凋亡

目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统诱导肿瘤细胞凋亡的效果.方法 采用PCR方法扩增胸苷激酶(TK)基因,并构建由hTERT核心启动子调控的胸苷激酶重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK,转染包装细胞PT67,G418筛选阳性细胞克隆,检测病毒滴度,PCR法检测转染细胞中的TK基因.将获得的重组逆转录病毒感染人肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC-7721、宫颈癌细胞株HeLa和正常人成纤维细胞系WI-38,C418筛选阳性克隆,MTT法检测重组逆转录病毒对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡.结果 重组逆转录病毒载体pLNC-hTERTp-TK经双酶切,可见1402 bp的目的 基因片段,表明质粒构建正确.从转染的PT67细胞中扩增出1131 bp的基因片段,与TK基因大小一致.在成功转染重组逆转录病毒的PT67细胞中,病毒滴度高者可达7.8×105 CFU/ml.重组逆转录病毒感染的3种肿瘤细胞的增殖均受到抑制,且生长抑制率随着GCV浓度的增加而升高,经较低浓度GCV(10μg/ml)处理的3种肿瘤细胞,凋亡率分别可达37.06%、34.88%和33.59%.结论 由hTERT启动子调控的逆转录病毒介导的HSV-TK/GCV自杀基因系统可诱导肿瘤细胞凋亡,且具有较强的特异性和高效性.

天蚕素A-蛙皮素杂合肽突变体的构建、表达及其抗菌活性

目的 构建天蚕素A(1～8)-蛙皮素(1～12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测.方法 采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG.将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化E. coli BL21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化.分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测.结果 重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占茵体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性.结论 已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA.

快速检测农药残留用大豆酯酶的稳定性

目的 观察用于快速检测农药残留的大豆酯酶的稳定性,确定其适保存条件.方法 分别测定不同温度、不同酸碱度和不同保护剂对大豆酯酶酶活力的影响.结果 在4℃保存30 d,酶活力损失较少;在-20℃保存30 d,完全失活;温度在50℃以下,pH在6.0～9.0保存10 min,酶活力无明显变化;保护效果好的保护剂依次为牛血清白蛋白(BSA)、蔗糖和甘油.结论 已确定大豆酯酶适保存条件.

诱导特异性T细胞免疫反应的HIV疫苗的研究进展

随着HIV特异性T淋巴细胞在控制体内HIV复制方面的作用被认可,HIV疫苗研究的重点越来越多地集中在诱导特异性T细胞免疫反应的HIV疫苗上,这类疫苗可能通过诱导或增强体内针对HIV的特异性T细胞免疫反应,有效控制HIV在体内的复制.本文对近年来诱导特异性T细胞免疫反应的HIV疫苗在健康和感染机体中应用的研究进展作一综述.

丙型肝炎疫苗的研制

丙型肝炎病毒(HCV)基因序列存在高度变异性,主要表现为HCV相似株(Quasispecies)的存在和免疫逃避(Immune escape)现象,给丙型肝炎疫苗的研制带来极大的困难.本文仅就目前丙型肝炎中和抗体疫苗、基于细胞免疫的CTL疫苗和基因疫苗的机理及研究进展作一综述.

生物技术药物残留宿主蛋白检测方法的研究进展

随着生物技术药物的发展,生物制品安全问题也越来越引起人们的重视.生物技术药物的残留宿主蛋白即是其中的问题之一.本文就国内外残留宿主蛋白的检测方法、相关规定及存在的问题作一综述.

重组人白细胞介素-31表达条件的优化

目的 优化重组人白细胞介素-31(rhIL-31)的表达条件.方法 以不同浓度IPTG、不同诱导时间、不同诱导温度对含有pET32a/rhIL-31的工程菌E. coli BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS-PAGE对表达产物进行分析.结果 诱导时间为5 h,IPTG浓度为1.5 mmol/L,诱导温度为37℃时,rhIL-31的表达量高.结论 已初步优化了重组蛋白rhIL-31的表达条件.

HIV-1中和抗体检测方法的建立

目的 以荧光素酶作为报告基因,表达假病毒,建立快速、有效的HIV-1中和抗体检测方法.方法 将HIV-1中国流行株B/C重组亚型和C亚型Envelope基因的真核表达质粒分别与带有荧光素酶报告基因的pNL4-3.Luc.R-E质粒共转染293T细胞,培养48 h后收获含有假病毒的上清液,感染表达CD4受体和一个辅助受体CCR5的HOS细胞,培养72 h后,裂解细胞,检测荧光素酶每含量.结果 HIV-1的B/C重组亚型和C亚型Envelope基因真核表达质粒分别与pNL4-3.Lac.R-E质粒共转染的293T细胞,均有HIV-1结构蛋白Gagpol和Env的表达,相对分子质量分别为55000和160000,用产生的假病毒感染HOS-CD4-CCR5/CXCR4细胞后,产生的荧光素酶含量明显高于对照组.结论 已建立了瞬时转染检测HIV-1中和抗体的方法,为今后抗体样本及病毒样本的检测提供了参考.

实时定量PCR检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变及其与临床指标的相关性

目的 采用实时定量PCR检测接受与未接受拉米夫定治疗的乙肝患者血清中乙肝病毒(HBV)突变情况,并将检测结果与临床指标进行相关性分析.方法 采用touch-down PCR反应程序,并结合SYBR Green I染料进行实时定量PCR,检测115份乙肝患者血清标本(其中50名患者未服用过拉米夫定,65名患者服用过拉米夫定).随机选择115份标本中的30份用同样的方法提取血清DNA,进行PCR扩增及测序,并与实时定量PCR检测结果进行比较.将乙肝病毒YMDD突变实时定量PCR检测结果与临床各指标之间进行相关性分析.结果 115份血清标本中,75份含有野生型HBV(其中49份来自未接受过拉米夫定治疗的患者),40份含有YMDD突变的HBV(其中1份来自未接受过拉米夫定治疗的患者);180位点的突变检测中,98份标本含有野生型HBV,17份标本含有突变型HBV.随机选取的30份标本测序结果与实时定量PCR检测结果完全一致.乙肝病毒拉米夫定耐药突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间无相关性,而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性,用药时间越长,发生突变的几率越大.乙肝患者服用拉米夫定后,180和204位点突变具有相关性.结论 实时定量PCR可以高效、准确地检测拉米夫定治疗后乙肝病毒的耐药突变.

利用响应面法优化双歧杆菌冻干保护剂的配比

目的 优化双歧杆菌冻干保护剂的配比.方法 应用单因素试验、析因试验、速上升试验和响应面分析法,对双歧杆菌冻干保护剂的配比进行优化.以优化的佳配比进行3次重复冻干试验,计算菌体存活率.结果 冻干保护剂的佳配方为海藻糖浓度18%、甘油浓度6%、维生素C浓度0.1%、明胶浓度0.1%,以优化的佳配比进行的3次重复冻干试验,菌体平均存活率可达86.7%.结论 优化的冻干保护剂适用于双歧杆菌菌体保存.

母牛分枝杆菌制剂对流感特异性Ig产生的影响

目的 观察母牛分枝杆菌制剂(商品名微卡)单独或与流感疫苗联合接种后,对小鼠血清中流感病毒特异性Ig产生的影响.方法 将不同剂量微卡(11.25、22.5和45.0 p4g/只)与流感疫苗(11.25 μg/只)联合接种BALB/c小鼠,或接种微卡22.5 μg/只后,感染流感病毒(2 LD50),检测小鼠血清中流感病毒特异性IgM、IgG、IgG1、IgG2a和IgA产生的时间和水平.结果 微卡与流感疫苗联合首次接种后4 d,小鼠血清中流感病毒特异性IgG与IgG2a水平较流感疫苗组均明显升高,接种后13 d差异无显著意义,对IgM和IsG1的产生无明显影响.45.0 μg和22.5 μg剂量与11.25 μg剂量微卡+流感疫苗组IgG、IgG1、IgG2a和IgM水平比较,差异均无显著意义.接种微卡的小鼠,在感染流感病毒后10 d,血清中流感病毒特异性IgA水平显著升高.结论 微卡单独或与流感疫苗联合接种,对流感病毒特异性IgG、IgG2a和IgA的产生均有促进作用.

无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗的研制

目的 研制无细胞百白破b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib).方法 按不同抗原配比配制3组联合疫苗,分别检测疫苗的效价及安全性,从中选择佳配比配制3批联合疫苗,并用相应批原液,按相同配比配制3批DTaP和3批Hib疫苗作为对照,检测联合疫苗中抗原的相容性.结果 3组配比的联合疫苗效价及安全性均达到<中国药典>三部(2005版)要求,联合疫苗中以每毫升含AcP 18 μg PN、D 25Lf、T 7Lf和Hib多糖抗原20 μg为佳配比.动物实验证明联合疫苗各抗原间不存在免疫干扰.结论 已成功研制4种抗原配比合理的DTaP/Hib联合疫苗.

CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性

目的 研究人用狂犬病病毒CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性,为评估该疫苗的适用性提供依据.方法 用CTN株疫苗免疫昆明小鼠,用3株具有代表性的街毒株CQ92、HN06、J和标准攻击毒株CVS经脑内和肌肉攻击,以未免疫小鼠进行脑内和肌肉攻击为对照,观察CTN株疫苗的保护效果.结果 原倍和5倍稀释的疫苗免疫的小鼠经3株街毒肌肉攻击后,均得到100%的保护,与对照组比较,差异均有极显著意义;经3株街毒脑内攻击后,原倍疫苗免疫的小鼠均得到100%的保护,5倍稀释的疫苗免疫的小鼠对3株街毒CQ92、HN06、J的保护率分别为85%、75%和77.8%,与对照组比较,差异均有极显著意义.结论 CTN株疫苗总体上能有效预防我国目前狂犬病的流行.

乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗,并检测其免疫原性.方法 将PCR方法合成的乙肝乙脑麻疹多表位基因COM插入T7噬菌体基因组中,使其与噬菌体10B蛋白融合,展示在T7噬菌体表面,构建成多表位噬菌体疫苗COM/T7.分别以1010 pfu/只和1012 pfu/只两种剂量,通过腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫昆明小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平.结果 重组噬菌体COM/T7经PCR鉴定证明构建正确.乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗能诱导小鼠产生针对各表位的特异性IgG抗体.在3种免疫途径中,腹腔免疫效果好.免疫剂量与诱导的抗体水平在一定范围内呈正相关.多表位噬菌体疫苗诱导的抗-HBs和抗-JEV水平高于常规疫苗,而抗-MV水平低于常规疫苗.结论 构建的乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗具有良好的免疫原性.

卡介苗溶菌黏膜免疫调理剂对实验性免疫功能低下小鼠的免疫调节作用

目的 观察卡介苗溶菌黏膜免疫调理剂(BCG-b)对实验性免疫功能低下小鼠的免疫调节作用.方法 将BALB/c小鼠分为BCG-b高、中、低剂量组,每只分别隔日灌服BCG-b 20、5和1 U/0.2ml;阳性对照组每只隔日灌服阿胶液0.2ml,阴性对照组每只隔日灌服生理盐水0.2 ml;正常对照组不给任何药物.除正常对照组外,其余各组均服药10次,并于首次服药后第14日皮下注射环磷酰胺,100 mg/kg,建立免疫功能低下小鼠模型.以碳粒廓清法、血清溶血素测定法及3H-TdR掺入法分别检测各组小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能、特异性体液免疫功能以及T淋巴细胞转化功能.结果 与阴性对照组相比,BCG-b 3个不同剂量组小鼠单核-巨噬细胞的吞噬功能和特异性抗体血清溶血素含量明显提高,小鼠T淋巴细胞转化功能呈双向性调节作用,即高、中剂量表现为抑制作用,低剂量表现为促进作用.结论 BCG-b对实验性免疫功能低下小鼠具有明显的免疫调节作用.

植物乳杆菌凝集素的纯化及其体外抗HIV活性

目的 纯化植物乳杆菌(L. plantarum PCL)凝集素,并检测其体外抗HIV活性.方法 采用Sephadex G-25凝胶脱盐层析和HITrap Q Sepharose XL 离子交换层析纯化L.plantarum PCL凝集素;测定纯化产物的兔红细胞凝集素活性、纯度及荧光光谱;采用MTT法检测其对C8166淋巴细胞的毒性作用,以光镜检查其对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用,并计算TI值.结果 纯化的L.plantarum PCL凝集索经尿素-SDS-PAGE,可见相对分子质量约85 000的单一条带;荧光光谱可见在380 nm附近有-个发射强度较大的凝集素特征荧光发射峰;L. plantarum PCL凝集素对C8166细胞的IC50为2.239 μg/ml,对HIV-1 ⅢB诱导C8166细胞合胞体形成的EC50为0.079 μg/ml,TI值为28.34.结论 已成功纯化了L.plantarum PCL凝集素,并具有抗HIV活性.

b型流感嗜血杆菌-破伤风类毒素结合疫苗与国产DTPw疫苗婴儿同时接种后的反应观察

目的 观察婴儿同时接种b型流感嗜血杆菌-破伤风类毒素(Hib-TT)结合疫苗与国产DTPw疫苗后的反应.方法 按照开放、随机的原则,将472名11～17周龄的健康男女婴儿分为2组,即DTPw组(234名)和DTPw+Hib组(238名).DTPw组接种0.5ml DTPw 疫苗,DTPw+Hib 组同时在不同部位接种0.5ndHib 结合疫苗,2组分别于3.4、5月龄各接种1针.在免疫接种后4d内,观察2组接种对象所有症状(征集与非征集的)的发生情况,对接种当日和随后30d报告的非征集性不良反应进行记录,并进行统计学分析.结果 在接种疫苗后4 d内,DTPw+Hib组与DTPw组所有症状的发生率相似,分别为49.1%和46.0%;在31 d内,2组中出现非征集症状的比例分别为9.9%和9.8%,其中上呼吸道感染和咽喉炎是常见的非征集性症状;未报告严重不良反应.结论 婴儿同时接种DTPw疫苗和Hib结合疫苗具有良好的安全性和耐受性.

接种水痘减毒活疫苗出现外生殖器水肿1例

患儿,男,2007年5月30日生,于2008年6月15日上午11时左右.经过排查禁忌证后,由医生严格按疫苗接种使用说明书操作,经左上臂三角肌皮下注射水痘减毒活疫苗(国内某厂家生产,批号200801009,有效期至2011年2月).

抗戊型肝炎病毒IgG抗体定量线性标准品的标定及初步应用

目的 建立抗戊型肝炎病毒(Anti-HEV)IgG抗体的定量线性标准品,并进行初步应用.方法 利用抗-HEV IgG和抗-HEV IgM ELISA检测试剂筛选出1份抗-HEV IgG阳性血清L9,经基因1型和4型的HEV ORF2 C-端抗原及239抗原进行Western blot确认后,用WHO定量标准品,由3个实验室协作标定,利用量反应平行线法计算其抗-HEV IgG的含量.考察已标定的L9血清的稳定性,并用所标定的1.5倍系列稀释的血清对国内外6家抗-HEV IgG试剂的灵敏度进行检测.选择一灵敏度较高的试剂,在其线性范围内取L9的5个稀释度作为抗-HEV IgG抗体定量线性标准,对高、中、低浓度的3份临床血清重复检测5次,考察其重复性;对实验感染猴的系列血清中抗-HEV IgG含量进行定量检测,考核该定量线性标准品的应用效果;并对每次定量试验中的线性方程进行分析,确定相关系数r值和斜率k值的范围.结果 经国内外试剂检测筛选出的阳性血清L9与基因1型和4型的HEV ORF2 C-端抗原及239抗原均有阳性反应.经协作标定,L9血清抗-HEV IgG含量为16.9 U/ml.L9血清在-20℃下保存6、12、18个月,2～8℃保存24、48、96 h后,定量结果均在95%置信区间内,且抗-HEV IgG含量均未明显下降.6家抗-HEV IgG检测试剂灵敏度差异较大,范围为0.03～5.00 U/ml.确定L9血清从0.42 U/ml开始的5个1.5倍系列稀释度,作为某一试剂抗-HEV IgG抗体定量线性标准品.利用该线性定量标准检测高、中、低浓度的3份临床血清,定量结果重复性较好;对实验感染猴系列血清进行定量检测,结果可有效地反映抗体水平变化趋势;94%的定量检测试验,r≥0.98,1.15≥k≥0.95.结论 已建立了抗-HEV IgG抗体定量线性标准品,可用于疫苗免疫原性评价和流行病学调查.

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