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恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1和M.RCAg-3佐剂的配伍
目的 评价恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1和M.RCAg-3与不同佐剂优配伍方式并进行初步的免疫机制研究.方法 将多表位疫苗表达纯化后混合4种佐剂(AD、ADL、CpG及CpG&A1)经皮下注射BALB/c小鼠,免疫3次,每次间隔2周.测定血清中抗M.RcAg-1和M.RCAg-3抗体滴度、IgG分型及血清抗体对抗原单表位识别.间接免疫荧光检测血清对天然疟原虫的识别.结果 佐剂ADL和AD分别能显著增强M.RCAg-1(P<0.05)和M.RCAg-3(P<0.05)免疫反应.而佐剂CpG和CpG&A1增强抗原免疫反应的能力相对较弱.与M.RCAg-1、M.RCAg-3和CpG、CpG&A1配伍的组相比,AD和ADL佐剂组的抗体水平和间接免疫荧光反应也都显著增强(P<0.05,P<0.05),抗体对单表位识别显著,抗体IgG分型中IgG1和IgG2a水平较高.结论 佐剂ADL和AD的效果显著,可以作为与M.RCAg-1和M.RCAg-3配伍的候选临床应用佐剂.
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幽门螺旋杆菌尿素酶多表位疫苗CTB-UE的生物信息学分析及其表达
目的 通过生物信息学软件评价幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶多表位疫苗CTB-UE的抗原结构,并在E.coli中表达、纯化融合蛋白CTB-UE.方法 应用生物信息学软件DNAstar、Geno3D、MOE分析Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE的二级结构和三级结构;将人工合成的尿素酶多表位肽基因UE插入含CTB基因的重组质粒pETC中,构建重组表达质粒pETCUE,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化重组蛋白CTB-UE,并进行Western blot分析.结果 生物信息学软件分析显示,Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构;重组表达质粒pETCUE经双酶切和测序鉴定证实,融合基因CTB-UE与设计序列完全一致;表达的融合蛋白CTB-UE相对分子质量约为33 000,主要以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白的22.3％;纯化的融合蛋白CTB-UE纯度达95.6％,可与兔抗Hp多克隆抗体发生特异性结合.结论 设计的Hp尿素酶多表位疫苗CTB-UE具有合理的结构,能在E.coli中高效表达,纯化后纯度较高,且具有较强的反应原性,为进一步研究针对尿素酶A、B双亚基的Hp多表位疫苗奠定了基础.
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乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗的构建及其免疫原性
目的 构建乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗,并检测其免疫原性.方法 将PCR方法合成的乙肝乙脑麻疹多表位基因COM插入T7噬菌体基因组中,使其与噬菌体10B蛋白融合,展示在T7噬菌体表面,构建成多表位噬菌体疫苗COM/T7.分别以1010 pfu/只和1012 pfu/只两种剂量,通过腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫昆明小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平.结果 重组噬菌体COM/T7经PCR鉴定证明构建正确.乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗能诱导小鼠产生针对各表位的特异性IgG抗体.在3种免疫途径中,腹腔免疫效果好.免疫剂量与诱导的抗体水平在一定范围内呈正相关.多表位噬菌体疫苗诱导的抗-HBs和抗-JEV水平高于常规疫苗,而抗-MV水平低于常规疫苗.结论 构建的乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗具有良好的免疫原性.
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刚地弓形虫复合基因疫苗、混合疫苗及多表位疫苗研究进展
有效的疫苗免疫是预防弓形虫病的理想方法.当前弓形虫疫苗的研制虽然取得了一些进展,但是单价疫苗的免疫效果并不理想.寻找更有效的候选抗原基因和合适的载体及研究多种抗原基因的优化组合将是今后弓形虫疫苗研究的主要方向.该文就弓形虫复合基因疫苗、混合疫苗及多表位疫苗的研究进展进行综述.
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口服丙型肝炎复合多表位DNA减毒鼠伤寒沙门活菌苗的实验研究
目的 利用减毒鼠伤寒沙门菌作为载体,探讨丙型肝炎病毒(HCV)口服DNA疫苗的可行性.方法 把HCV复合多表位抗原基因PCX克隆到真核表达载体pcDNA3(CMV启动子),构建HCV真核表达载体pcDNA3/PCX,转化减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,获得HCV重组口服DNA活菌苗SL3261(pcDNA3/PCX),免疫小鼠及家兔后,检测特异性免疫应答及安全性.结果 SL3261(peDNA3/PCX)在小鼠及家兔中均可诱发低水平的特异性体液免疫及细胞免疫应答,免疫动物未见明显的毒性反应.结论 HCV口服减毒鼠伤寒沙门菌DNA疫苗可诱发特异性的免疫应答,为HCV疫苗的研究提供新的理论及实验依据.
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多表位肿瘤疫苗的研究进展
多表位疫苗是指同时携带多个与目标抗原相关的表位以及辅助性表位的疫苗.因其在细胞免疫方面的独特优势,已成为肿瘤疫苗研究领域的热点之一.随着分子生物学及免疫学等学科的飞速发展,使得多表位疫苗的临床应用也有了很大的进展.本文主要对多表位疫苗的选择、设计及临床应用等方面作一综述.
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多表位疫苗的研究进展
综述了近几年国内外在多表位疫苗方面的研究进展.
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弓形虫抗原表位研究进展
弓形虫是一种呈全球分布的专性细胞内寄生原虫,广泛寄生于人和动物的有核细胞内,能引起严重的人兽共患寄生虫病.因此,对弓形虫及弓形虫病的研究日趋得到学者们的重视.由于弓形虫生活史较复杂,抗原成分多,每种抗原在体内诱导的免疫效应不同,实验证明,单价亚单位疫苗免疫效果和单一抗原诊断试剂检测效果均不理想,研制多表位疫苗和诊断试剂必然是一个新的发展趋势.因此,正确而详细地了解蛋白质表位对疾病的诊断以及设计疫苗分子结构具有重要理论和现实意义.本文就弓形虫表位研究进展加以综述.
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中国人群HLA-Ⅰ类限制性HCV多表位疫苗理论免疫应答率的预测
[目的]预测中国人群HLA-Ⅰ类限制性HCV特异性CTL表位组合的理论免疫应答率,指导丙型肝炎多表位疫苗的研制和应用.[方法]利用"中国多表位疫苗设计的HLA-Ⅰ积累表型频率空间预测系统",计算HLA-A、B限制性HCV特异性CTL表位组合在中国人群中的累积表型频率(CPF),得出理论免疫应答率,绘制等值线图并进行评价.[结果]HLA-A或B单一超型组合针对中国人群的理论免疫应答率偏低,HLA-A和B超型组合的理论免疫应答率较好.[结论]根据不同HLA组合设计的多表位疫苗在中国人群中的免疫应答效果不同,进行疫苗理论免疫应答率空间预测研究,对研制适合中国人群的丙型肝炎多表位疫苗有重要的指导意义.
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乙型肝炎病毒多表位疫苗的研究进展及现有的常用表位
我国是乙型肝炎高流行地区.2008年卫生部公布的新全国人群乙肝等有关疾病血清流行病学调查结果显示,全国乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带率平均为7.18%,全国仍约有9 300万人为无症状乙肝病毒携带者,每年发病患者数在百万以上.除因乙肝病毒感染导致慢性活动性肝炎肝硬化等而引起死亡外,在肝癌患者中,约有80%是由乙肝病毒感染引起的.
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基于GIS的中国人群乙肝多表位疫苗的预测
目的 预测可能的HLA-Ⅰ类限制性HBV特异性CTL表位组合在中国人群的理论免疫应答率,旨在指导乙型肝炎(HBV)多表位疫苗的研制和应用.方法 利用"中国多表位疫苗设计的HLA-Ⅰ积累表型频率空间预测系统"计算HLA-A、B限制性HBV特异性CTL表位组合在中国人群中的累积表型频率(CPF),得出理论免疫应答率,并绘制CPF预测等值线图,比较结果.结果 HLA-A或B单一超型组合针对中国人群的理论免疫应答率普遍偏低.HLA-A和B超型组合针对中国人群的理论免疫应答率相对较好.结论 根据不同HLA组分组合设计的多表位疫苗(或DNA疫苗)在中国各地人群中的免疫效果不同,根据中国人HLA分布特点,进行疫苗理论免疫应答率预测研究,可以指导制备适合中国人群的HBV特异性CTL多表位疫苗,应用前景广阔,有重要的指导意义.
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中国丙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞表位预测及其多表位疫苗设计
寻求抗HCV疫苗和有效抗病毒药物的探索一直是研究的热点[1].我们应用生物信息学方法,选择HCV核心(C)区、NS3、NS4、NS5等各区的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位,进行优势组合,结合中国人人类白细胞抗原(HLA)的频率,设计、合成重组HCV多表位疫苗的基困序列,以达到对CTL表位初步筛选,提高实验成功率的目的,同时为构建多个CTL表位疫苗提供理论依据,为今后HCV疫苗的研究开发积累一定的实践经验.
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中国多表位疫苗设计的HLA-Ⅰ积累表型频率空间预测系统
目的建立HLA-Ⅰ积累表型频率(CPF)的空间预测系统,旨在指导中国疫苗学家设计受HLA限制的多表位疫苗(包括DNA疫苗),并评价或预测根据不同HLA-Ⅰ组合形式设计的多表位疫苗(或DNA疫苗)在中国不同地区的免疫效果.方法通过构建中国境内人群HLA-Ⅰ基因空间数据库,利用"克立格"技术建立CPF空间预测系统.结果根据疫苗设计目的,设计者可利用该系统预测和估计特定地理位置上人群的CPF,包括根据单个HLA座位(HLA-A或HLA-B)上的等位基因而设计的多表位疫苗和根据两个HLA基因座位(HLA-A和HLA-B)上的等位基因而设计的多表位疫苗在特定地理位置上人群的CPF值,从而估计或预测拟研制的或已研制的多表位疫苗在中国不同地理位置上人群中的免疫效果.结论该预测系统可用于:①鉴别任何中国群体的期望CPF百分比,为设计疫苗组分提供依据;②在特定地理位置的人群中,预测限制性表位已知的多表位疫苗的理论免疫应答率;③在特定地理位置的人群中,识别因缺乏HLA-Ⅰ限制性等位基因而不能对表位疫苗产生免疫应答的个体.
关键词： 空间预测系统 HLA-Ⅰ积累表型频率 多表位疫苗 DNA疫苗 -
重组幽门螺杆菌多表位疫苗工程菌株的构建及其微生物学特性研究
目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureβ)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性.方法 通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位,通过柔性Linker相连,并在其N端加入分子内佐剂序列ctB,按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,即为BIB序列.人工合成之后,插入原核表达质粒pET28a(+)中,构建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB[pET28a(+)/BIB]重组质粒.经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后,将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中.BIB工程菌经乳糖诱导表达后,SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况,并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定,Western blot对其进行抗原性鉴定.结果 原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×103处有一条明显条带,其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100％一致,Western blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应.结论 成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌,该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好.
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病毒抗原表位研究方法进展及其多表位疫苗的应用
目的 综述病毒抗原表位研究方法及多表位疫苗的应用.方法 查阅并整理大量病毒抗原表位和病毒多表位疫苗的相关文献,总结抗原表位研究方法和多表位疫苗的应用.结果 病毒抗原表位的研究方法基本成熟,根据不同抗原表位可选用不同的鉴定及研究方法,本文总结了病毒抗原表位预测法、抗原肽合成法、噬菌体展示法、化学裂解法及酶裂解法和核磁共振分析法(NMR)及表面等离子共振技术(SPR)法等多个病毒抗原表位鉴定法;多表位疫苗目前已成为疫苗研究的热点,拥有诸多研究前例,为病毒多表位疫苗创造了无限的发展前景.结论 由于体内免疫应答反应的复杂性和许多研究方法的局限性,仅用一种鉴定方法不能够完全体现出全部的免疫应答反应,因此需要结合使用多种方法才能得到更全面的抗原表位数据;随着现代生物学的不断发展和完善,创建更加先进准确和快速的抗原研究方法仍有待于进一步的研究.
