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节杆菌DMDC12文献资料
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重叠PCR技术在构建sodAP基因表达载体中的应用
目的 应用重叠PCR技术,构建节杆菌DMDC12的Mn-SOD基因sodAP的重组表达质粒,并在E. coli BL21(DE3)中表达.方法 设计两对引物,分别扩增启动子P121和sodAP基因序列,利用重叠PCR技术,将启动子P121与sodAP基因相连接并测序,连接产物插入原核表达质粒pET-22b(+),构建重组质粒pET-PsodAP,转化E. coli BL21(DE3)进行表达.用SDSPAGE检测表达产物,光密度定量分析法分析目的 蛋白表达量.结果 启动子P121和sodAP基因的连接产物经凝胶电泳检测,可见约800 bp的目的 条带,测序结果与预期相符;重组表达质粒pET-PsodAP经双酶切鉴定,表明构建正确;目的 蛋白在E. coil BL21(DE3)中获得了表达,表达量占菌体总蛋白的19%.结论 应用重叠PCR技术,成功构建了sodAP基因的重组表达质粒,并在E. coli BL21(DE3)中获得表达,为Mn-SOD的进一步工业化生产奠定了基础.
