中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
海藻糖合成酶基因的克隆及原核表达
目的 克隆海藻糖合成酶(Trehalose synthase,Tres)基因,并在大肠杆菌中表达重组酶.方法 以长白山温泉The rmus thermophilus SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增Tres基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-Tres,转化E.coli BL21(DE3),分别采用IPTG和乳糖诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和薄层色谱(Thin layer chromatography,TLC)分析.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-Tres经双酶切及测序证实构建正确;IPTG和乳糖均能诱导重组蛋白的表达,且乳糖诱导的蛋白表达量较高;表达的重组酶Tres相对分子质量约为110 000,可与鼠抗6×His单克隆抗体特异性结合;粗酶液的酶活力为8 760 U/μg,是野生菌酶活的10倍;重组酶水解麦芽糖产物经TLC分析证实,其具有较强的海藻糖合成酶活性.结论 已成功在大肠杆菌中表达了重组Tres,为大规模生产海藻糖奠定了基础.
-
牛布氏菌virB8基因的克隆及原核表达
目的 克隆牛布氏菌virB8基因并在大肠杆菌中进行表达.方法 从牛布氏菌S19基因组DNA中PCR扩增virB8基因片段,插入pEASY-E1载体中,构建重组表达质粒pEASY-virB8,转化E. coli BL.21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经HisTrapTM FF纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定.结果 扩增的virB8基因大小为720 bp;重组表达质粒pEASY-virB8经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30000,表达量占菌体总蛋白的17.3％;纯化的重组蛋白纯度为85％,Lowry法测定蛋白浓度为1.52 mg/ml,可与鼠抗His单抗特异性结合.结论 成功克隆了牛布氏菌virB8基因,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为新型疫苗的研发及布氏菌鉴别诊断方法的建立提供了有效的候选抗原.
-
NDM-1基因的克隆表达及生物信息学分析
目的 克隆鲍曼不动杆菌blaNDM-1基因,对NDM-1进行生物信息学分析,表达并纯化重组NDM-1蛋白.方法 PCR扩增鲍曼不动杆菌NDM-1的blaNDM-1基因,克隆至pMAL-p2X质粒,构建重组原核表达质粒pMAL-p2X::NDM-1,对NDM-1进行生物信息学分析.将重组表达质粒转化大肠杆菌Tb1,IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白MBP-NDM-1.结果 重组表达质粒pMAL-p2X::NDM-1经双酶切和测序证实构建正确;生物信息学分析表明,NDM-1的相对分子质量为28 487.86,等电点为5.89,1～28氨基酸为NDM-1的信号肽序列,与其他亚型金属β-内酰胺酶同源性很低;表达的重组蛋白相对分子质量约73000,主要以可溶形式表达;纯化后的重组蛋白浓度为1.72mg/ml.结论 表达并纯化了可溶性重组蛋白MBP-NDM-1,为后续NDM-1活性功能及其抑制剂的研究奠定了基础.
-
miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响
目的 探讨miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响.方法 取小鼠2、4、8细胞期胚胎,用含不同浓度miR-450a腺病毒(0.01、0.1、1 ng/ml)的M16培养液培养,并设不含miR-450a腺病毒的对照组.倒置显微镜观察胚胎发育情况,并计算2、4、8细胞期的胚胎发育率.结果 miR-450a腺病毒可明显抑制受精卵细胞的正常分裂,导致小鼠胚胎发育异常,且随着miR-450a腺病毒浓度的增加,胚胎发育率明显下降(P＜0.05),在较高浓度miR-450a腺病毒培养过程中,有部分胚胎死亡、退化.结论 miR-450a腺病毒对体外培养的小鼠早期胚胎发育具有抑制作用,为胚胎发育异常的研究提供了新的思路.
-
TPX2基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖的影响
目的 探讨TPX2基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 构建3个靶向TPX2基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒,转染A549细胞,RT-PCR检测TPX2基因mRNA的转录水平;筛选干扰效果佳的质粒转染的细胞,RT-PCR检测增殖相关基因CDK4和CyclingD1 mRNA的转录水平,Western blot检测TPX2蛋白的表达水平,显微镜下观察细胞的生长情况,MTT法检测细胞的增殖活力.结果 TPX2 shRNA-3质粒干扰效果佳,有效沉默TPX2基因后,A549细胞中TPX2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均受到明显抑制(P＜0.01),与空白对照组比较,抑制率分别为73.8％和82.8％;CDK4和CyclingD1基因mRNA的转录水平也明显降低(P＜0.01或＜0.05),与空白对照组比较,抑制率分别为76.7％和67.3％;A549细胞的生长和增殖也明显受到抑制,转染后72 h,增殖抑制率可达61.55％(P＜0.05).结论 成功构建了靶向TPX2基因的shRNA表达质粒,其在mRNA和蛋白水平有效抑制A549细胞TPX2基因的表达后,细胞生长受到抑制,增殖能力减弱.
-
过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响
目的 探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi α-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响.方法 构建GMⅡ基因真核过表达质粒EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine 2000转染BGC-823细胞,用400 mg/LG418筛选稳定转染的细胞.采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中GMⅡ基因mRNA的转录水平以及蛋白的表达水平,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术(Annexin V/PI双染)检测过表达GMⅡ后细胞的凋亡情况.结果 转染重组质粒EX-E2372-M03后,BGC-823细胞GMⅡ基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率明显降低(P＜0.05).结论 过表达GMⅡ可能通过抑制胃癌细胞的凋亡,进而促进胃癌的发生发展.
-
不同新生牛血清对体外培养BHK-21细胞的影响
目的 比较不同新生牛血清对体外培养的BHK-21细胞的影响.方法 以不同厂家和同一厂家不同批次的共6种新生牛血清培养BHK-21细胞,观察细胞传代后在不同血清培养条件下的形态、增长倍数和细胞维持时间.结果 6号血清培养的细胞生长状态好,增长倍数高,维持细胞存活时间长;3号血清培养效果次之;2号、4号和5号血清培养的细胞至第4天仍未长满单层;1号血清培养的细胞基本未生长.结论 不同厂家和同一厂家不同批次的新生牛血清对BHK-21细胞体外培养的效果存在差异.
-
大理地区志贺菌耐药性分布及其对氟喹诺酮类药物的耐药机制
目的 了解大理地区志贺菌耐药性分布及其对氟喹诺酮类药物的耐药机制.方法 对2010～2011年从大理地区各医院收集的粪便标本进行分离培养和血清型鉴定;K-B琼脂扩散法检测分离的志贺菌对12种常见抗菌药物的耐药性;E-test法检测环丙沙星和萘啶酸对耐药菌株的小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC);经PCR和DNA测序检测耐药菌株基因突变;R质粒接合试验检测氟喹诺酮类药物耐药性与R质粒介导的相关性.结果 共分离到68株志贺菌,其中福氏志贺菌41株,宋内志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株;志贺菌对萘啶酸耐药率高,其次为复方磺胺甲噁唑、氨苄西林,对头孢曲松和头孢噻肟较敏感,对喹诺酮类显示出不同程度的耐药率;环丙沙星对志贺菌的MIC在0.008～ 32 μg/ml之间,萘啶酸对志贺菌的MIC均≥1μg/ml,有4株MIC≥256 μg/ml;6株对氟喹诺酮类药物耐药的菌株中均存在gyrA基因Ser83→Leu和par口C基因Ser80→Ile的突变,其中有2株存在gyrA基因Asp87→Asn的突变,2株存在Asp87→Gly的突变,3株存在parC基因Gln91→His的突变;R质粒介导与氟喹诺酮类药物耐药无关.结论 治疗细菌性痢疾首选头孢曲松和头孢噻肟,志贺菌gyrA和parC基因突变与对氟喹诺酮类药物耐药性密切相关,与R质粒介导无关.
-
深黄被孢霉高产诱变菌株抑制消减杂交文库的构建
目的 构建深黄被孢霉高产诱变菌株抑制消减杂交文库.方法 采用抑制消减杂交( Suppression subtractive hybridization,SSH)技术,以深黄被孢霉高产诱变菌株(高产菌株)和原始菌株为材料,构建消减cDNA文库.以高产菌株cDNA为试验组,原始菌株cDNA为对照组,进行两次消减杂交和两次抑制性PCR,将第2次PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,通过蓝白斑筛选阳性克隆,并进行PCR鉴定.结果 文库的插入片段集中在250～750bp之间,所长出的菌落中91％为白色克隆,挑取96个克隆进行PCR筛选,获得78个阳性克隆,其中单一扩增条带的克隆约占82％.结论 利用SSH技术成功构建了深黄被孢霉高产诱变菌株差异表达基因消减cDNA文库,为进一步筛选和鉴定深黄被孢霉高产诱变菌株特异表达基因奠定了基础.
-
p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应
目的 探讨p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应.方法 将p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p 16和pcDNA3-HA质粒分别转染U-2OS细胞,并设未转染阴性对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,PI单染法分析细胞周期的分布,DNA ladder法结合PI单染法检测细胞的凋亡情况.结果 p16基因可显著抑制U-2OS细胞的增殖(P＜0.05),且在一定范围内呈剂量效应关系;p16基因可使U-2OS细胞G1期比例显著升高(P＜0.05),S期比例显著降低(P＜0.05);p16基因可使U-2OS细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳后呈典型的DNA ladder.结论 p16基因可显著抑制U-2OS细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,并促进细胞凋亡.
-
引起吉林省2011年手足口病流行的肠道病毒71型VP1区基因的特征
目的 分析引起吉林省2011年手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)流行的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71 )VP1区基因的特征.方法 对2011年分离自吉林省8个市(州)HFMD病例的35株EV71分离株的VP1编码区基因进行RT-PCR扩增及序列测定,应用Bioedit和MEGA 4.0软件对VP1基因进行同源性和基因亲缘关系分析.结果 吉林省201 1年的35株EV71分离株均属于C4a基因亚型;其VP1区基因的核苷酸序列同源性在95.9％～100％之间,分属于3个进化枝,形成3个传播链,与2008年安徽阜阳株亲缘关系近,VP1区基因核苷酸序列同源性达97.6％～99.3％,与2007年的北京株和2003年的浙江株亲缘关系相对较远;2011年吉林省各市中,既存在3个EV71传播链共流行的市,同时监测到2个EV71传播链共流行的市,还发现3个只有单一EV71传播链的市,每个传播链均在5个市流行传播.结论 2011年在吉林省内,3个C4a基因亚型EV71的传播链同时循环传播引起HFMD的流行,未发现优势传播链.
-
低氧对分化型甲状腺癌KAT和WRO细胞上皮间质转化的影响
目的 探讨低氧对分化型甲状腺癌KAT、WRO细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenehymal transition,EMT)的影响.方法 以氯化钴(CoCl2)模拟细胞低氧微环境,采用MTT法检测细胞的增殖活力,筛选CoCl2的适作用浓度;倒置显微镜观察低氧下细胞的形态特征;Western blot检测低氧0、3、6、12h后KAT和WRO细胞中HIF-1a蛋白的表达及低氧6h后KAT和WRO细胞上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和间质细胞波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 CoCl2适作用浓度为150 μmol/L,低氧使KAT和WRO细胞逐渐获得了间质细胞的形态特征.低氧6h后,KAT和WRO细胞中HIF-1a蛋白的表达达峰值,与低氧0h组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).低氧组KAT细胞中E-cadherin蛋白的表达水平明显低于正常组(P＜0.01),Vimentin蛋白的表达水平与正常组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);低氧组WRO细胞中E-cadherin蛋白的表达水平明显低于正常组(P＜0.oi),Vimentin蛋白的表达水平明显高于正常组(P＜0.01).结论 HIF-1a可能通过下调E-cadherin、上调Vimentin而促进分化型甲状腺癌细胞KAT和WRO发生上皮间质转化,使其获得侵袭、转移潜能.
-
WorkBeads系列介质与C4介质层析纯化汉逊酵母表达的HBsAg效果的比较
目的 比较WorkBeads 40/10000 Bus low系列3146VL、3147L、3148H、3149VH4型不同丁基密度的疏水层析柱与BIA CIM Monoliths C4纯化汉逊酵母表达的HBsAg的效果.方法 将HBsAg溶于不同的上样缓冲液中,分别上样于4型WorkBeads预装层析柱和C4丁基层析柱,用不同的洗脱缓冲液洗脱,分别收集上样流穿峰和洗脱峰,测定HBsAg含量,并计算HBsAg的流穿率和洗脱率,筛选佳上样缓冲液和洗脱缓冲液.结果 3147L型柱适于HBsAg纯化工艺,含4％硫酸铵的20 mmo1/LPB是理想的上样缓冲液,20 mmol/L PB和含30％异丙醇的20 mmol/L PB均不是理想的洗脱缓冲液.CIMMonoliths C4佳上样缓冲液是含3％硫酸铵的50 mmol/LMOPS和含4％硫酸铵的20 mmol/L PB;含0.1％ Triton-100的50 mmol/L MOPS是佳的洗脱缓冲液.结论 可多次重复使用的WorkBeads系列介质和可耐受高流速的快速纯化介质CIMMonoliths C4均可用于汉逊酵母表达的HBsAg的纯化.
-
兔肋软骨膜间充质干细胞的分离与鉴定
目的 从兔肋软骨膜中分离间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并进行鉴定.方法 取3～4周龄新西兰大白兔,采用机械消化法和酶消化法结合的两步消化法获取肋软骨膜细胞,体外培养观察其生长形态;免疫组化法鉴定其表型特征;并检测其诱导成骨、成脂的分化潜能.结果 从肋软骨膜中分离的原代细胞聚集成团,以圆形和多角形为主,从第2代开始细胞形态均一,以梭形为主,呈漩涡状排列,并开始表达CD29和CD90,不表达CD34和Ⅱ型胶原,现已传至15代,生长良好;第3代细胞经诱导可分化为成骨细胞或脂肪细胞.结论 从兔肋软骨膜中可获得干细胞,其具有与MSCs相似的特性.
-
新生期小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的建立
目的 探讨建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的方法.方法 将新生期BALB/c小鼠随机分为肺炎链球菌感染1次组(于新生期第7天分别经鼻腔滴注肺炎链球菌D39株107、108、109、1010 CFU菌液各10μ1)、感染2次组(于新生期第6、7天连续2d经鼻腔滴注肺炎链球菌D39株107、108、109、1010 CFU菌液各10μ1)和对照1、2组(于第7天和第6、7天分别经鼻腔滴注PBS液10μ1),每组20只.后1次鼻腔滴注后24h随机抽取10只小鼠处死,取肺组织匀浆,进行细菌培养及鉴定,HE染色观察肺组织病理改变.剩余10只观察感染后5d的体重变化及存活情况.结果 感染2次109 CFU肺炎链球菌组小鼠出现安静少动,皮肤苍白,体重增长下降;感染率与存活率均＞85％;病理显示肺部出现炎症改变,肺泡间隔增厚,血管周围和支气管周围有一定程度的炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主.结论 新生期第6、7天感染109 CFU肺炎链球菌可能是成功建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的较好方法.
-
百日咳攻击菌液氮保存毒力稳定性的动态监测
目的 动态监测百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的毒力稳定性.方法 百日咳菌种复苏、培养3代后收集菌苔,比浊稀释后冻存.2008～ 2011年,每年采用改良脑腔攻击试验进行菌毒力的动态监测,分析其毒力稳定性.结果 2008 ～ 2011年,制备的百日咳攻击菌于液氮中保存,4年中毒力无明显变化(P＞0.05),稳定性良好.结论 百日咳攻击菌液氮保存毒力稳定,可用于百日咳疫苗效力试验攻击菌的保存.
-
水痘减毒活疫苗豚鼠异常毒性检查方法的探讨
目的 探讨水痘减毒活疫苗(以下简称水痘疫苗)的豚鼠异常毒性检查法.方法 按照《中国药典》三部(2010版)规定,对本公司生产的41批水痘疫苗进行豚鼠异常毒性检查;分别对本公司生产的水痘疫苗在不同实验室、4个不同厂家的水痘疫苗、本公司生产的不同批号水痘疫苗及不同体重的豚鼠注射本公司生产的水痘疫苗后进行异常毒性检查.注射前每只豚鼠称重,应为250～350 g.每只豚鼠腹腔注射供试品5.0nl,观察7d.结果 观察期内,豚鼠全部健存,且无异常反应,到期时每只豚鼠体重均增加.其中,同一实验室的豚鼠在注射同一批水痘疫苗后出现体重增加差异;不同实验室的豚鼠体重增加有差异,每天称重影响豚鼠体重的增加;在注射疫苗后的第1、2天,多数豚鼠体重出现略微下降,随后开始逐渐增加.结论 本公司生产的水痘疫苗安全性良好,建议采用清洁级以上的豚鼠进行异常毒性检查,同时规定实验动物的性别和注射前的观察期限,并设立阳性、阴性对照,对生物制品的安全性作出更为合理的评价.
-
产磷脂酶A1菌株的筛选及其发酵条件的优化
目的 筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件.方法 从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化.结果 筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力高,摇瓶发酵酶活力达4.52 U/ml.根据该菌株的形态特征分析和16SrDNA基因序列,初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus).该菌株的佳发酵条件为:初始pH7.0,培养温度30℃,发酵时间5d,摇床转速200r/min,发酵液中PLA1活力可达7.15 U/ml,为优化前的1.58倍.结论 已筛选出1株高产PLA1的菌株,并优化了其发酵条件,为PLA1的生产及应用奠定了基础.
-
Exosomes的生物学特性及其在肿瘤免疫治疗中应用的研究进展
Exosomes是一种由活细胞分泌到细胞外的膜性小囊泡,来源于多囊体,大小为50-100nm.Exosomes表面有大量与其结构和功能密切相关的蛋白质和脂质成分,多种细胞均可分泌Exosomes.Exosomes具有多种重要功能,尤其对肿瘤的免疫治疗具有重要作用.树突细胞和肿瘤细胞来源的Exosomes在肿瘤免疫治疗方面具有良好的治疗效果,已成为近年来肿瘤学研究的一个热点.本文对Exosomes的生物起源、生物学特性、生理功能及其在肿瘤诊断和免疫中的作用机制作一综述.
-
常用基因转移载体的生物分布特点
基因转移载体主要分为病毒和非病毒载体,研究其生物分布特点对于寻找毒性靶器官,评价生殖系转移危险具有重要参考价值.本文对不同种类基因转移载体的生物分布特点作—综述,为基因转移载体的选择、毒性评价等提供参考.
-
淋病奈瑟菌表面蛋白A基因真核表达质粒诱导的小鼠特异性体液免疫应答
目的 观察淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因真核表达质粒不同免疫途径诱导的小鼠特异性体液免疫应答效果.方法 将NspA基因真核表达质粒pcNspA通过肌肉、滴鼻和阴道3种途径免疫BALB/c小鼠,分别于0、2、3、4周各免疫1次,末次免疫后2周,收集各组小鼠血清、支气管肺泡洗液和阴道洗液,采用间接ELISA方法检测特异性抗体效价;并检测抗体介导的补体溶菌活性.结果 滴鼻免疫和肌肉免疫pcNspA质粒均可诱导小鼠体内产生较高水平的特异性IgG和IgA抗体,而且滴鼻免疫组在支气管肺泡洗液和阴道洗液中均可检测到特异性sIgA抗体,而阴道免疫组仅在阴道局部检测到较低水平的特异性sIgA抗体;滴鼻免疫组小鼠血清具有溶菌活性.结论 淋病奈瑟菌NspA基因真核表达质粒可诱导小鼠体内产生特异性抗体,并具有抗菌活性;滴鼻免疫可能是其更有效的免疫途径.
-
应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中表达狂犬病病毒糖蛋白
目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在蚕蛹中高效表达狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)糖(G)蛋白.方法 从狂犬病病毒CVS-11株总RNA中扩增G基因片段,插入供体质粒pFastBac I-G中,构建重组供体质粒pFastBac I-G,转化大肠杆菌DH 10Bac,构建重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G,将其转染BmN细胞,获得含G基因的重组杆状病毒.将重组病毒感染蚕蛹,收集血淋巴,进行Western blot分析.结果 重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-G经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒糖蛋白在重组杆状病毒感染的BmN细胞中和蚕蛹中获得正确表达,在蚕蛹中表达的重组蛋白可与His标记的单克隆抗体和狂犬病病毒阳性血清特异性结合.结论 成功构建了重组狂犬病病毒糖蛋白杆状病毒,并在蚕蛹中获得了表达,表达产物具有良好的抗原性.
-
免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗的稳定性
目的 探讨免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗的稳定性.方法 将复合物型增效乙型肝炎疫苗分别于37℃保存6周(加速稳定性试验),2～8℃保存30个月(长期稳定性试验),进行各项质量指标检测,并比较其小鼠效力(ED50值)与常规重组乙型肝炎疫苗(酵母)的差异.结果 经37℃保存6周,2～8℃保存30个月后,免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗各项质量指标均符合其暂定规程质量标准;小鼠效力(ED50值)不同时间点检测结果均低于常规乙肝疫苗,且升高趋势慢于常规乙肝疫苗,除37℃保存2周和4周外,其余差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗稳定性良好;其小鼠效力(ED50值)优于常规乙肝疫苗,且比常规乙肝疫苗具有更好的稳定性.本研究为确定免疫复合物型增效乙型肝炎疫苗的有效期提供了实验依据.
-
猪瘟病毒E2蛋白基因重组人5型腺病毒的构建及鉴定
目的 构建猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV )E2蛋白基因重组人5型腺病毒,并进行鉴定.方法 通过巢式PCR从猪瘟活疫苗中扩增CSFV E2全基因序列,克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA的多克隆位点处,构建重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2,将其线性化后与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,进行重组腺病毒的包装.细胞完全病变后,采用RT-PCR法检测E2基因mRNA的转录;细胞病变法检测病毒滴度;连续传代后检测病毒的稳定性;Western blot法检测E2蛋白的表达;以105.82 TCID50重组腺病毒经腹腔免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清猪瘟抗体效价.结果 重组穿梭质粒paeAd5 CMVK-NpA-E2经双酶切及测序证明构建正确;重组腺病毒rAd5v-MxE2转染的293AD细胞可检测到E2基因的转录和蛋白的表达;重组腺病毒的滴度为105.82 TCID50/ml;第5、30代重组腺病毒均可扩增出目的基因条带,病毒滴度无明显变化;重组腺病毒免疫小鼠后,可产生CSFV抗体.结论 成功构建了CSFV E2基因重组人5型腺病毒,其免疫原性良好,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础.
-
刚地弓形虫过氧化物氧化还原酶基因重组真核表达质粒的构建及表达
目的 构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)过氧化物氧化还原酶(Peroxiredoxin,Prx)基因重组真核表达质粒,并在HEK293T细胞中进行表达.方法 以重组质粒pET-30a(+)/TgPrx为模板,PCR扩增TgPrx基因片段,插入真核表达载体p3×Flag-CMW-14,构建重组表达质粒p3×Flag-CMW-14/TgPrx,转染HEK293T细胞,RT-PCR和Western blot检测TgPrx基因的转录和蛋白的表达.结果 PCR扩增出591bp的TgPrx基因片段;重组真核表达质粒p3×Flag-CMW-14/TgPrx经PCR、双酶切及测序证明构建正确;转染重组表达质粒的HEK293T细胞可检测到TgPrx基因的转录和蛋白的表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒p3×Flag-CMW-14/TgPrx,并在HEK293T细胞中正确表达,为进一步研制核酸疫苗奠定了基础.
-
ERC(N5)多肽识别整合素αvβ3的特异性及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
目的 分析含RGD序列的多肽ERC(N5)与整合素αvβ3结合的能力,并探讨其对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响.方法 利用流式细胞术检测HepG2细胞表面整合素αvβ3的含量以及ERC(N5)与FITC-αvβ3抗体LM609竞争结合HepG2细胞的情况;用ERC(N5)处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,光学显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率.结果 HepG2细胞表面αvβ3的含为47.0％;浓度为8、16、32和64 μmol/L的ERC(N5)均能抑制LM609与HepG2细胞的结合及细胞的增殖活力,且呈剂量依赖性(P＜0.05);与对照组相比,经16 μmol/L ERC(N5)处理的细胞可见形态发生明显改变,细胞凋亡率明显升高.结论 ERC(N5)可特异结合整合素αvβ3,并通过抑制αvβ3的作用来抑制肝癌HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡.
-
静注人免疫球蛋白(pH4)中肠道病毒71型中和抗体效价的筛查
目的 对目前市售静注人免疫球蛋白(Human intravenous immunoglobulin,简称IVIG)(pH 4)以及静注肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)免疫球蛋白试验品中的EV71中和抗体效价进行筛查,为手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)的被动免疫治疗提供参考.方法 采用微量细胞病变法,在2个实验室,采用2个毒株检测国内IVIG产品以及经原料血浆筛查后制备的静注EV71免疫球蛋白试验品的EV71抗体效价.结果 实验室A采用毒株-01检测国内17个企业55批IVIG的EV71中和抗体效价范围为104～256,其中效价≥239的占23.64％(13/55),效价≥256的占12.73％(7/55),检测3批静注EV71免疫球蛋白试验品GMT为1 203.NIFDC实验室采用毒株-01检测国内8个企业12批IVIG的GMTs为335;检测3批静注EV71免疫球蛋白试验品的GMT为1 402,显著高于12批IVIG(P＜0.05);采用毒株-02检测国内12个企业16批IVIG的EV71 GMT为332,与毒株-01检测结果差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 来自全国各企业的IVIG中EV71中和抗体效价均为阳性,效价分布于104～630之间.经血浆筛查后投浆制备的静注EV71免疫球蛋白具有显著高于普通IVIG的EV71中和效价.
-
载多烯紫杉醇靶向脂质微泡的制备及其体外寻靶能力
目的 制备一种携带肝癌DR5单克隆抗体(DR5mAb)的载多烯紫杉醇靶向脂质超声微泡(Docetaxei-loaded lipid microbubbles,DLLM),并检测其体外寻靶能力.方法 采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的DLLM,并制备生物素化的肝癌DR5mAb,通过生物素-亲和素连接方法,将DR5mAb连接于载多烯紫杉醇的DLLM表面,制备DR5- DLLM.检测DR5-DLLM的粒径、浓度、Zeta电位、包封率、载药量、稳定性及其体外寻靶能力.结果 DR5-DLLM的平均粒径为1 232 nm,Zeta电位为-9.86 mV,平均浓度为3.1×109个/ml,微泡的包封率为73.5％,平均载药量为25.3％.60Co射线灭菌前后以及4℃、-20℃保存14 d,微泡的形态、包封率、载药量未见明显改变.靶向微泡组的HepG2细胞周围可见DR5-DLLM微泡紧密结合,而非靶向微泡DLLM组未见特异性微泡结合.结论 成功制备了携带肝癌DR5mAb的载多烯紫杉醇靶向脂质超声微泡,该微泡能够与HepG2细胞牢固结合,有望成为一种新型、高效、可用于超声分子显像的肝癌靶向药物载体.
-
ATP结合盒转运子A1和血红素加氧酶-1在人脑胶质母细胞瘤中的表达及其临床意义
目的 探讨ATP结合盒转运子A1 (ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)和血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)在人脑胶质母细胞瘤中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化法检测ABCA1和HO-1蛋白在44份人脑胶质母细胞瘤及14份瘤旁正常脑组织标本中的表达情况,分析ABCA1和HO-1的表达与患者临床病理特征之间的相关性.结果 ABCA1和HO-1蛋白在胶质母细胞瘤中表达的阳性率(77.3％和75％)与瘤旁正常组织(均为7.1％)相比,差异均有统计学意义(P均＜0.001),且ABCA1与HO-1的表达呈正相关(rs＝0.313,P＜0.05);患者性别、年龄、手术切除范围、肿瘤大小、有无复发、术后放化疗情况与ABCA1、HO-1蛋白的表达无相关性(P＞0.05).结论 ABCA1和HO-1蛋白在胶质母细胞瘤中高表达可能对胶质母细胞瘤的发生、发展具有一定的作用.
-
前胸腺素α在人卵巢癌中的表达、分布及其与肿瘤分级的相关性
目的 检测人卵巢癌组织中前胸腺素α(Prothymosin α,PTMA)的表达、分布,并分析其与肿瘤分级的相关性.方法 利用卵巢癌组织微阵列,从2块巢癌组织标本和1块癌旁正常组织标本中共获取172份卵巢癌组织和8份癌旁正常组织,对每份肿瘤组织进行病理分级和确定组织类型.采用Western blot法检测卵巢癌和癌旁正常组织中PTMA蛋白的表达水平;免疫组化法检测卵巢癌组织中PTMA蛋白表达的分布.结果 172份卵巢癌组织标本中,病理分级I级22份,Ⅱ级67份,Ⅲ级83份,除4份为子宫内膜腺癌外(均为Ⅱ级),其余均为乳头状腺癌.癌旁正常组织中PTMA的表达量明显低于卵巢癌组织,且差异有统计学意义(P＜0.01).8份癌旁正常组织标本中,5份(62.5％)细胞核染色阳性,多出现在卵巢上皮细胞中,3份染色阴性;172份卵巢癌组织标本中,164份(95.3％)为阳性表达,其中细胞核表达44份,细胞质表达40份,混合表达80份;肿瘤分级与PTMA的分布明显相关(P＜0.01),卵巢癌Ⅲ级多为混合型分布;卵巢癌I级PTMA蛋白的表达水平明显高于卵巢癌Ⅱ、Ⅲ级,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 与癌旁正常组织相比,卵巢癌组织中PTMA蛋白的表达增强,在不同分级的肿瘤组织中,PTMA蛋白的表达分布有变化,为进一步研究其在卵巢癌组织中异常表达的临床意义奠定了基础.
-
低氧诱导因子-1α、锌指转录抑制因子Twist和钙黏蛋白E在人乳腺癌组织中的表达及其意义
目的 探讨低氧诱导因子-1α( Hgpoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、锌指转录抑制因子Twist和钙黏蛋白E(E-cadherin)在人乳腺癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组化SP法检测术前未接受过放疗、化疗及激素治疗的69名患者乳腺癌组织标本中HIF-1α、Twist和E-eadherin的表达,并分析三者表达的相关性.结果 在69份乳腺癌组织标本中,HIF-1α、Twist 和E-cadherin的阳性表达率分别为71.01％(49/69)、57.97％(40/69)和50.72％(35/69);HIF-1α、Twist和E-cadherin的阳性表达率与TNM分期和腋淋巴结转移有关(P＜0.05或P＜0.01),与患者年龄、肿瘤大小和病理类型无关(P＞0.05).HIF-1α与Twist的表达呈显著正相关(r＝0.286,P＜0.05),Twist与E-cadherin的表达呈显著负相关(r＝－0.371,P＜ 0.01).结论 HIF-1α、Twist和E-cadherin在乳腺癌中的表达情况可作为监测乳腺癌发展的指标.
-
抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体的原核表达及其活性
目的 原核表达抗慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞人源化单链抗体(Humanized single-chain variable fragment,hscFv),并检测其抗原结合活性.方法 从重组质粒pUC57-hscFv中扩增hscFv基因,插入含6×His标签的原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-hscFv,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组融合蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,SDS-PAGE分析其纯度;Western blot分析其反应原性;间接免疫荧光试验检测其抗原结合活性.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为46 000,表达量约占菌体总蛋白的37％,主要以可溶性形式存在;纯化的重组融合蛋白纯度为94％,可与鼠抗6×His单抗及K562细胞表面抗原特异性结合.结论 成功原核表达并纯化了抗CML细胞hscFv,为其进一步应用于CML的临床分子诊断和生物靶向治疗奠定了基础.
-
丙氨酸氨基转移酶干化学检测方法的建立及试纸条的制备
目的 建立一种以丙酮酸氧化酶法为反应原理的丙氨酸氨基转移酶( Alanine aminotransferase,ALT)干化学检测方法,并制备试纸条.方法 试纸条由扩散层、底物层和显色层组成,包被有反应试剂,用反射式光度计测定ALT活性.对制备的试纸条进行各项验证.结果 试纸条测定罗氏低、高值质控品的批内变异系数分别为7.4％和4.9％;线性范围为10～1000U/L;试纸条测定肝素锂抗凝全血及其血浆的结果差异无统计学意义(P＞0.05);标本中胆红素≤257 mol/L,抗坏血酸≤50 mg/L,丙酮酸≤0.5 mmol/L时,ALT测定结果不受影响;建立的干化学法与国际临床化学联合会(IFCC)推荐的方法相关性良好(r＝0.988 9);试纸条的95％置信区间参考范围为0～40U/L.结论 建立的于化学法反应迅速,结果准确,操作简便,适用于ALT的即时检验.
-
吉林市入托入学儿童预防接种证查验工作效果分析
自2005年国家卫生部和教育部联合下发了《关于做好入托、入学儿童预防接种证查验工作的通知》以来,我市卫生行政部门和教育部门高度重视该项工作,每年均组织校医就"查验"技术和内容进行培训,并将"查验"工作纳入重点考核的管理目标.通过基层校医的不懈努力,我市的入托入学儿童预防接种证查验工作逐渐完善,但通过调查分析发现,我市的入托入学儿童预防接种证查验工作尚存在只查不补的现象.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
