欢迎来到360期刊网!
学术期刊
  • 学术期刊
  • 文献
  • 百科
电话
您当前的位置:

首页 > 文献资料

  • 黑尾胡蜂磷脂酶A1的分离纯化和活性研究

    作者:曾琳;王滢;刘代亿;张云;李文辉

    目的 对黑尾胡蜂磷脂酶的分离方法和活性进行研究,为黑尾胡蜂的毒性机制研究和药用发掘提供实验数据.方法 通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱对黑尾胡蜂毒液中的磷脂酶活性成分进行分离.利用质谱对目的蛋白进行肽指纹图谱分析,利用蛋白测序仪测定目的蛋白N末端氨基酸序列,从结构上对目的蛋白进行鉴定.利用磷脂酶A1检测试剂盒确认目的蛋白对底物磷脂的特异性水解位点,从活性上对目的蛋白进行鉴定.通过血浆复钙时间的测定检测目的蛋白对凝血系统的影响.结果 通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱两步分离纯化,成功从黑尾胡蜂蜂毒中纯化到了1个磷脂酶活性组分.该组分在SDS-PAGE凝胶中表观相对分子质量约为32 000,因此命名为Vtp32.肽指纹图谱分析及N端氨基酸序列比对结果显示Vtp32与Vespa属胡蜂磷脂酶A1(phospholipase A1,PLA1)具有高度的序列相似性.Vtp32可以特异性水解磷脂的sn-1位,因此Vtp32为黑尾胡蜂PLA1.Vtp32水解磷脂可产生溶血性凝脂,导致红细胞裂解.Vtp32可显著延长人血浆的复钙时间,具有抗凝活性.结论 黑尾胡蜂毒液中含有大量的PLA1,可通过葡聚糖凝胶G-75分子筛柱和肝素亲和柱两步分离方法进行纯化.黑尾胡蜂PLA1具有溶血和抗凝活性.

  • 黑胸胡蜂毒素基因蛋白磷脂酶A1的克隆和减毒抗原设计

    作者:刘亚茹;孙钰文;孙毓徽;陈萍;姚伟;柴林;杨贤义;陈宗运;肖敏

    通过胡蜂毒腺组织的全转录组测序技术,构建黑胸胡蜂毒腺组织cDNA的序列信息库.根据毒素蛋白质研究提供的一小段蛋白质序列,将本地Blast技术和分子克隆技术结合在一起,克隆得到黑胸胡蜂毒液蛋白磷脂酶A1的基因序列,命名为VT-1;并采用生物信息学方法,预测VT-1的蛋白质序列和三级结构.序列分析显示,VT-1蛋白质与已发现的磷脂酶A1蛋白同源,属于磷脂酶A1家族成员;结合VT-1和其它已经报道的磷脂酶A1序列,采用空间结构预测和序列比对方法发现,磷脂酶VT-1盖结构域中含有保守谷氨酸(E),在Ca2+存在下,可能增强VT-1的磷脂酶活性,提高毒性.根据磷脂酶VT-1盖结构域中谷氨酸(E)保守性,设计两个VT-1的减毒抗原.为靶向黑胸胡蜂VT-1的抗毒血清研究奠定基础.

  • 磷脂酶A1高产菌株的筛选及其等离子体诱变

    作者:马琦亚;薛正莲;苏燕南;王洲;赵世光

    目的 从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力.方法 用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征和分子生物学鉴定;优化该菌株的发酵时间,温度,pH值及摇床转速;从该菌株出发进行等离子体诱变,绘制致死率曲线,进行平板初筛及摇瓶复筛,并检测获得菌株的遗传稳定性.结果 经初筛和复筛,获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,经气相色谱鉴定其产酶为磷脂酶A1;该菌株在普通琼脂培养基上呈圆形,质地软,表面光滑、扁平,乳白色,晕圈明显,为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌;佳发酵条件为:发酵时间12h,初始pH8.0,温度32℃,摇床转速200 r/min,优化后酶活为9.12 U/ml,较优化前(6.74 U/ml)提高了35.3%;等离子体诱变后,经平板及摇瓶筛选,获得的菌株W22-5酶活高,为12.80 U/ml,较诱变前(9.12 U/ml)提高了89.91%,且具有良好的遗传稳定性.结论 成功获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,优化了该菌的发酵条件,且经等离子诱变进一步提高了菌株的产酶能力,为磷脂酶A1的生产和应用奠定了基础.

  • 产磷脂酶A1菌株的筛选及其发酵条件的优化

    作者:赵梦梦;薛正莲;苏燕南;赵世光;陈涛

    目的 筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件.方法 从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化.结果 筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力高,摇瓶发酵酶活力达4.52 U/ml.根据该菌株的形态特征分析和16SrDNA基因序列,初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus).该菌株的佳发酵条件为:初始pH7.0,培养温度30℃,发酵时间5d,摇床转速200r/min,发酵液中PLA1活力可达7.15 U/ml,为优化前的1.58倍.结论 已筛选出1株高产PLA1的菌株,并优化了其发酵条件,为PLA1的生产及应用奠定了基础.

360期刊网

专注医学期刊服务15年

  • 您好:请问您咨询什么等级的期刊?专注医学类期刊发表15年口碑企业,为您提供以下服务:

  • 1.医学核心期刊发表-全流程服务
    2.医学SCI期刊-全流程服务
    3.论文投稿服务-快速报价
    4.期刊推荐直至录用,不成功不收费

  • 客服正在输入...

x
立即咨询