中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡
目的 研究禽流感病毒NSIA蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响.方法 将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin V FITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析.结果 NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性.随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞.Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30 000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符.结论 禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡.
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表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立
目的 建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系.方法 将已构建成的植物表达载体pBI 121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验.结果 表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同.Western blot检测显示,在相对分子质量约17 000处有特异蛋白反应带.ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31 μIU/ml.小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显.结论 人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达.
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氧糖剥夺条件下PC12细胞RAGE的表达及对其损伤的影响
目的 探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞在氧糖剥夺(OGD)的条件下,晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达及其对PC12细胞损伤的影响.方法 PC12细胞随机分为3组:OGD培养组(PC12细胞在无血清无糖的DMEM培养液中厌氧培养);封闭RAGE的OGD培养组(PC12细胞在加5 μg/ml RAGE抗体的无血清无糖DMEM培养液中厌氧培养);对照组(PC12细胞在无血清无糖DMEM培养液中培养).免疫组化法检测RAGE表达.收集细胞上清液,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)含量,并对细胞死亡率进行检测.结果 在OGD条件下PC12细胞培养8、11、20 h均有RAGE表达,与对照组相比表达均明显增加,OGD培养组与封闭RAGEOGD培养组相比,LDH活性差异显著.随着厌氧时间的延长,PC12细胞死亡率明显增高,封闭RAGEOGD培养组与OGD培养组相比,PC12细胞死亡率明显降低.NO含量差异无显著意义,但与对照组相比差异显著.结论 在OGD条件下,PC12细胞RAGE表达增高.RAGE的表达对细胞的损伤起促进作用.
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早期糖尿病肾病转化生长因子-β1与尿白蛋白的相关性
目的 探讨早期糖尿病肾病(DN)转化生长因子-β1(TGF-β1)与尿白蛋白的相关性.方法 RT-PCR方法测定高糖刺激的系膜细胞内及2型糖尿病小鼠肾小球内TGF-β1 mRNA的转录水平;ELISA方法检测DN患者尿TGF-β1和尿白蛋白排泄率(UAER)的变化.结果 高糖刺激的系膜细胞内与肥胖db/db小鼠肾小球内TGF-β1 mRNA转录水平与对照组比较均明显增高.糖尿病各组患者尿TGF-β1含量均显著高于正常对照组,且UAER增加呈递增趋势,两者呈正相关.结论 TGF-β1与早期DN的发生与发展密切相关,是反映早期糖尿病肾损害的重要因子.
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人颗粒酶B的表达及抗原性初步分析
目的 在原核系统表达人颗粒酶B(GrB)酶原型及活性型基因,并分析表达产物的抗原性.方法 从人外周血淋巴细胞中抽提RNA,用RT-PCR方法扩增人颗粒酶B序列,将其克隆至pGEX-5x-1表达质粒,与GST进行融合表达,用SDSPAGE及Western blot对表达产物进行分析.结果 所克隆的GrB序列与已报道的从人体分离出的GrB完全一致.酶原型和活性型GrB与GST的融合蛋白以包涵体的形式表达,其大小与预期结果一致,并能与GrB特异性抗体发生结合反应.结论 已成功构建了GrB原核表达系统,酶原型及活性型GrB均具有抗原性.
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14-3-3 zeta蛋白C-端多肽抗体的制备与鉴定
目的 制备14-3-3 zeta蛋白C-端多肽多克隆抗体,并鉴定其特异性.方法 用生物信息学分析14-3-3 zeta蛋白的同源性、亲水性和抗原性,设计并合成zeta蛋白C-端特异性的氨基酸序列,将其与牛血清白蛋白铰链;分别转化14-3-3的7个亚型质粒于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并分离纯化His-zeta融合蛋白;分别以zeta C-端多肽及zeta融合蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体;用Western blot分析zeta蛋白C-端多肽抗体亚型特异性,并用该特异性抗体检测zeta蛋白在COS-7细胞中的分布规律.结果 在14-3-3的7个亚型蛋白存在的条件下,zeta蛋白C-端多肽抗体仅识别zeta亚型蛋白,而zeta融合蛋白抗体可以识别gamma、zeta、tau 3种亚型;14-3-3 zeta蛋白主要分布在COS-7细胞质一侧.结论 已获得了亚型特异性的14-3-3 zeta多克隆抗体,该抗体可用于14-3-3 zeta免疫细胞化学等分析.
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B族链球菌表面免疫原性蛋白的免疫原性及其抗体保护功能
目的 制备B族链球菌(GBS)表面免疫原性蛋白(Sip),研究其免疫原性及抗体保护功能,为GBS蛋白疫苗研究奠定基础.方法 采用基因重组技术构建表达载体,并表达GP-Sip融合蛋白.用pET-Sip融合蛋白免疫小鼠,并免疫家兔制备多克隆抗体.Western blot检测GP-Sip蛋白特异性,ELISA检测家兔及小鼠血清中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的功能.结果 表达载体经酶切和测序证明构建正确,GP-Sip蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,纯化后纯度可达90%以上.Western blot显示GP-Sip蛋白可与pET-Sip蛋白的免疫血清发生免疫反应.ELISA显示Sip可诱发小鼠产生高水平的IgG抗体.Sip抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用.结论 已成功构建GP-Sip表达载体,并高效表达了Sip.该蛋白具有良好的免疫原性,其抗体具有良好保护功能,可作为GBS蛋白疫苗成分或荚膜多糖疫苗载体成分.
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刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中表达及在tPA纯化中的应用
目的 构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化.方法 设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达.表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA.结果 rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58 mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104 IU/mg.偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105 IU/mg.结论 已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化.
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猪胸膜肺炎放线杆菌血清1和5型交叉免疫保护研究
目的 探讨猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间交叉免疫保护的关系.方法 以1型和5型APP参考菌株为实验对象,分别测定半数致死量(LD50),制备灭活细菌抗原和活菌抗原,免疫昆明小鼠,检测ELISA抗体水平及交叉免疫反应,并分别以10 LD50 1型和5型APP菌进行攻击,观察小鼠保护力.结果 1型和5型APP菌对小鼠的半数致死量分别为8.0×105.3和5.1×103.83 CFU/LD50,死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均可产生高滴度抗体,且1型与5型间存在较强的交叉免疫反应.死菌抗原和活菌抗原免疫小鼠均能对本型APP菌攻击产生保护,保护率在80%以上.1型活菌免疫小鼠对5型菌攻击保护率为70%,5型活菌免疫小鼠对1型菌攻击保护率为90%,1型、5型死菌免疫小鼠对5型、1型菌交叉攻击均无保护作用.结论 1型、5型APP活菌和死菌免疫小鼠均可对本型菌攻击产生保护,两型间存在较强的交叉免疫反应,但只有活菌免疫可以产生较好的交叉免疫保护,死菌免疫不能产生交叉免疫保护.
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流感冷适应减毒活疫苗的研究进展
目前所使用的流感疫苗主要是三联灭活疫苗,其安全性和有效性虽好,但生产过程复杂,生产周期长.相对于传统的灭活疫苗,冷适应减毒活疫苗有很多优点,尤其是用哺乳动物细胞培养的病毒制备冷适应减毒活疫苗已成为流感疫苗的主要发展方向.本文主要介绍流感冷适应减毒活疫苗的研究历史以及今后的发展方向.
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轮状病毒疫苗的研究现状
人轮状病毒是婴幼儿腹泻的常见病原之一,是造成发展中国家儿童死亡的重要原因.疫苗接种是唯一可行的预防控制轮状病毒较高发病率和死亡率的方法,轮状病毒疫苗的研发具有非常重要的现实意义.本文主要对口服轮状病毒减毒活疫苗的研究现状作一综述.
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变异性克雅氏病与输血传播研究进展
疯牛病是牛海绵状脑病(BSE)的简称,对人类造成的大影响不仅仅是经济上的巨大损失,更重要的是此病可突破种属屏障传播给人类,引起变异性克雅氏病(vCJD).自从英国国家克雅病监测组织于1996年首次报告该病以来,医学界关于vCJD是否通过输血传播的问题一直在争论.本文就vCJD病毒的生物学特性及其通过输血传播的可能性和预防措施作一概述.
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化学发光免疫分析法检测人血清孕酮
目的 研究用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清孕酮(PROG).方法 采用竞争抑制法,用高亲和力的多克隆抗体包被,碱性磷酸酶标记孕酮,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物来检测PROG,.并考察试剂的灵敏度、精密性、准确性、特异性和测定范围.将试剂盒置4 ℃存放14个月,检测质控血清的PROG含量,考察试剂的稳定性.并与进口试剂进行比较.结果 CLIA法检测PROG灵敏度达0.1 ng/ml;特异度99.5%;测定范围在0.1～200 ng/ml之间;用PROG浓度分别为高、中、低的质控血清测定精密性,批内和批间变异系数均小于10%,回收率在91.7%～108.4%之间;与雌二醇、雌三醇和雌酮的交叉反应率低于0.1%,与睾酮和可的松无交叉反应;试剂在4℃存放14个月,质控血清的测定值均在规定范围内;与进口全自动化学发光试剂Beckman AccessTM相比有较好的相关性.二者测定结果的符合率为99.2%.结论 化学发光法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有很好的准确性和精密性,是现有放射免疫法的理想替代方法.
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汉逊酵母高密度发酵表达乙型肝炎表面抗原的甲醇流加控制策略
目的 考察不同甲醇流加策略对汉逊酵母(Hansenula polymorpha)高密度发酵表达重组乙型肝炎表面抗原的影响.方法 在细胞生长阶段采用DO/pH在线测量的控制方法,使酵母细胞密度达到一个较高水平,诱导期比较DO-Stat/pH-Stat法和离线检测甲醇两种控制流加甲醇的方法,同时也比较用甘油和甲醇双碳源间断流加法与单纯流加甲醇法对目的 蛋白表达的影响.结果 诱导期用DO-Stat和pH-Stat法不能有效地提高乙肝表面抗原表达量,而离线检测甲醇的控制方法,在诱导阶段可将甲醇浓度控制在0～5 g/L的范围,乙肝表面抗原表达量比DO-Stat/pH-Stat法提高了20%.甲醇氧化酶(MOX)酶活性的变化与乙肝表面抗原表达量变化存在对应关系,交替加入甘油和甲醇双碳源刺激,可以使乙肝表面抗原表达量达到395 mg/L.结论 已筛选出优化工艺配置,并建立了切实可行的规模化生产工艺.
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血管生物反应器相关参数的测量与分析
目的 通过对组织工程生物反应器中相关参数的测量,了解培养液的物理化学特性,为控制组织工程产品培养提供理论依据.方法 从反应器中吸取第1、2和3天的培养液,采用旋转黏度计进行黏度及相关参数测量,并分别用葡萄糖分析试剂盒、尿素氮测定试剂盒和乳酸脱氢酶分析试剂盒测定葡萄糖、乳酸和氨的含量.结果 当转速达到稳定时,应力、扭矩、剪切速率和角速度的值基本稳定,不同天数的黏度测量值基本保持在0.8～1.0之间;从葡萄糖、乳酸和氨的代谢可知,葡萄糖在逐渐消耗,乳酸和氨的含量在逐渐增加.结论 不同天数的培养液黏度与牛顿流体的特性非常相似,黏度的变化将引起剪应力的改变.根据葡萄糖的代谢情况,生物反应器中培养的细胞材料复合物的佳换液时间为2 d.
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滴定痘苗病毒的噬斑血吸附法的优化
目的 对滴定痘苗病毒的噬斑血吸附法进行优化,克服该方法稳定性差、结果数据偏差大的问题.方法 通过预试验确定痘苗病毒的佳稀释倍数、病毒吸附温度及鸡血球加入方法等参数.采用优化的噬斑血吸附法,对天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗进行滴定,计算变异系数(CV),确定试验内、试验间和不同实验人员间的精密度.利用Qstat软件分析本次与以往滴定结果之间的关系.结果 病毒的佳稀释度为10-6,佳吸附温度为25～30 ℃,加入鸡血球的佳方法为病毒吸附72 h后,弃去部分培养液,再加入鸡血球.4种样品测定结果的试验内、试验间和不同实验人员间的变异系数均小于5%,病毒滴度分别为(7.12±0.18)Lg PFU/ml、(7.79±0.21)Lg PFU/ml、(7.88±0.17)Lg PFU/ml和(7.64±0.14)Lg PFU/ml,均高于以往滴定结果.本次与以往滴定结果之间存在线性相关性.结论 优化了滴定痘苗病毒滴度的噬斑血吸附法,确定了天坛株痘苗病毒的原始种子批、主种子批、工作种子批和参考苗的滴度,为天花疫苗多项检定试验提供了可靠依据.
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冰冻红细胞解冻条件的改进
目的 改进冰冻红细胞解冻条件,提高红细胞回收率.方法 对原解冻红细胞去甘油工艺进行改进,并在冰冻红细胞解冻过程中观察解冻温度对回收率的影响.结果 改进后的去甘油工艺的红细胞回收率为(82.81±1.99)%,较改进前(80.90±0.57)%明显提高,且差异有显著意义.解冻后复温的红细胞回收率为(82.94±0.51)%,较不复温的红细胞回收率(78.82±0.96)%明显提高,且差异有显著意义.结论 改进后的去甘油工艺和解冻红细胞复温均可提高红细胞的回收率.
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adr亚型HBsAg冻干实验参考品的制备与检测
目的 制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品.方法 重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原终含量为10 μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实验参考品.再由不同实验室用不同试剂和不同方法,以联合标定的蛋白含量为定量标准,分别验证冻干参考品中adr亚型HBsAg含量及37 ℃放置不同时间的稳定性.并以adw亚型HBsAg标准作为定量标准,检测adr亚型参考品中HBsAg含量.结果 所制备的adr亚型冻干参考品分装准确均匀;以联合标定蛋白含量为标准,不同实验室分别以珠式EIA法和RIA法所测的adr亚型冻干参考品HBsAg含量与目标含量相近,各支参考品间差异小;adr亚型冻干实验参考品37 ℃放置2～10周后质量稳定.以adw亚型HBsAg参考品为定量标准,所测定adr亚型冻干参考品HBsAg含量,比实际含量约高出0.6倍.结论 冻于adr亚型HBsAg实验参考品可用于重组酵母表达adr亚型HBsAg的定量检测.不同亚型HBsAg检测需用各自亚型的参考品作为定量标准.
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鸡胚细胞制备17D黄热疫苗
目的 应用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗.方法 细胞与病毒同时接种,选择病毒增殖的适宜条件,收获病毒液,加入稳定剂,制备成冻干鸡胚细胞黄热疫苗,并进行鉴别试验、病毒滴定和疫苗保护力试验.结果 病毒增殖的适MOI为0.000 46 PFU/cell;适培养温度为37 ℃;第2天洗换,第4天收获更合适;适病毒感染细胞数为6.80×105 ～7.00×105个/ml.病毒感染鸡胚细胞后,滴度可达6.15～6.97 LgPFU/ml.疫苗主要指标均达到《中国生物制品规程》(2000版)和WHO对疫苗的要求.免疫小鼠45 d后,用卵黄囊疫苗4×103 PFU脑内攻击,小鼠全部存活.结论 在适宜的条件下,用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗,能达到WHO疫苗人用标准.鸡胚细胞有取代鸡胚卵黄囊制备黄热疫苗的可能.
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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗对大鼠的免疫效果
目的 比较不同浓度Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin IPV)3针免疫大鼠的中和抗体效价,为确定Sabin IPV的佳免疫方案提供参考.方法 用不同浓度的Sabin IPV对52只Wistar大鼠进行3针免疫,每针间隔1个月,每次免疫后30 d采血并分离血清,采用微量中和试验测定血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型的中和抗体效价.结果 大鼠经3针Sabin IPV免疫后,其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度均显著上升,2针免疫后抗体阳转率已经达到100%,且原倍疫苗与稀释疫苗免疫大鼠后,产生的中和抗体水平差异有显著意义.结论 Sabin IPV在大鼠中有良好的免疫效果,经3针免疫可产生高水平的中和抗体.
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不含硫柳汞重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫原性及稳定性
目的 观察不含硫柳汞重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫原性及其稳定性.方法 配制12批不含硫柳汞的重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),观察其免疫原性及在4、22和37 ℃保存不同时间的稳定性.结果 该疫苗各项检测指标均符合《中国药典》三部(2005版)要求,实验组与对照组的效价测定结果差异无显著意义.10 μg/ml疫苗22 ℃放置6个月和4℃放置12个月效力均未下降;20 μg/ml疫苗在37℃放置4周后,效力略有下降.结论 为婴幼儿提供了一种更加安全有效的重组乙型肝炎疫苗.
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金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶组分分析
目的 对金黄色葡萄球菌滤液制剂中凝固酶进行纯化,并对其性质及作用进行分析.方法 用分子筛层析等方法纯化凝固酶,用HPLC、光谱等方法对其进行纯度和性质分析.用双向免疫扩散试验和T淋巴细胞增殖试验检测其生物学特性.结果 经纯化的凝固酶纯度达97%以上,相对分子质量约为350 000,含17种氨基酸,主要紫外吸收峰出现在260 nm左右,α-螺旋含量占27.3%,组分中含糖约18.1%,T淋巴细胞增殖试验和双向免疫扩散法证明纯化的凝固酶具有生物学活性.结论 金黄色葡萄球菌滤液中凝固酶为一类糖与蛋白复合物,具有抗原活性,可能在金黄色葡萄球菌滤液的功效中发挥作用.
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福氏2a痢疾结合疫苗临床安全性和免疫原性观察
目的 观察福氏2a痢疾结合疫苗临床安全性和免疫原性.方法 按随机、双盲的原则,以福氏2a痢疾结合疫苗为观察组,磷酸缓冲盐水为安慰剂对照组,进行临床安全性及免疫原性观察,比较观察组和对照组免疫后临床反应率、抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)水平.结果 福氏2a痢疾结合疫苗接种后无严重的全身反应和局部反应,与对照组比较,差异无显著意义.观察组经2针全程免疫后2周和12周,抗体阳转率分别为86.27%和79.74%;GMT分别为1:3 783.55和1:2 983.32;抗体几何平均滴度较免疫前平均增长倍数分别为12.47倍和9.83倍.全程免疫后观察组与对照组之间抗体阳转率、几何平均滴度、抗体滴度平均增长倍数比较,差异均有显著意义.结论 福氏2a痢疾结合疫苗具有较好的安全性和免疫原性.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
