中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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狂犬病病毒CTN-1株G蛋白的原核表达及基本功能评价
目的 原核表达狂犬病病毒(rabies virus,RV)CTN-1株G蛋白,并评价其基本功能.方法 采用RT-PCR法扩增RV CTN-1株G蛋白基因,插入原核表达载体pGEX-5X-1,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-CTN,转化入Rosetta(DE3)pLysS,IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,采用间接ELISA法检测其与阳性血清的结合性能及亲和力.结果 重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;纯化的重组蛋白RV-G相对分子质量约85 000,纯度可达85％,能与阳性血清特异性结合,且具有较好的区分性,与阳性血清的亲和力常数为1.2×1010 M-1.结论 成功原核表达、纯化获得了纯度较高、特异性较好、亲和力较强、灵敏度较高的RV CTN-1株G蛋白,为研究G蛋白的抗原表位、建立针对RV G蛋白的ELISA抗体检测方法及其中和抗体的分选检测奠定了基础.
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不同形式脊髓灰质炎病毒颗粒的免疫原性
目的 评价不同形式的脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)颗粒的免疫原性.方法 采用蔗糖密度梯度超速离心法分别将经56℃加热1.5h处理和未经加热的PV进行分离纯化,收集相应组分,进行电镜观察及SDS-PAGE分析,并测定各组分的D抗原及蛋白含量.用不同PV颗粒组分分别免疫大鼠,均经腿部肌肉注射,共接种3次,每次间隔21d,于免疫前和第1、2次免疫后21 d经眼眶采血,末次免疫后21 d经心脏穿刺采血,分离血清,微量细胞病变(CPE)抑制法检测血清中抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型PV中和抗体几何平均滴度(GMT).结果 未经加热处理的PV可分离获得EP(蔗糖浓度16％～ 19％)和FP(蔗糖浓度22％ ～ 24.5％)两种病毒颗粒,电镜观察分别为空心颗粒和实心颗粒,EP经SDS-PAGE分析可见VP0、VP1和VP3病毒蛋白条带,FP可见VP1、VP2、VP3和VP4条带;经56℃加热处理的PV可分离获得HP(蔗糖浓度15％～17％)一种病毒颗粒,电镜观察为空心颗粒,SDS-PAGE分析可见VP0、VP1、VP2、VP3病毒蛋白条带.EP、FP免疫大鼠后,均可诱导产生针对PV的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体GMT低于FP;HP不能诱导产生中和抗体.结论 未经加热的PV可分离获得EP和FP两种病毒颗粒,均具有免疫原性;经加热处理的PV仅分离获得HP一种病毒颗粒,不具有免疫原性.
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脐带间充质干细胞促进烫伤创面愈合的作用机制
目的 探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem ceils,UCMSCs)多点局部注射后,修复烫伤皮肤创面的潜在机制.方法 机械消化法分离人UCMSCs,培养至第3代后,进行形态观察、免疫表型和多向分化潜能鉴定.将第3代UCMSCs与碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)共培养14d,免疫荧光法检测成纤维细胞标志物波形蛋白的表达;对比小鼠Ⅲ度烫伤模型多点局部注射UCMSCs后创面愈合率及创面愈合时间;Dil标记UCMSCs,局部注射后检测UCMSCs在创面局部的分布情况.结果 分离培养的UCMSCs的形态、表面抗原表达及体外诱导分化能力均符合间充质干细胞特性;经bFGF诱导后可显著提高UCMSCs中成纤维细胞标志物波形蛋白的表达量;局部注射UCMSCs可显著提高烫伤小鼠的创面愈合率,UCMSCs可定植于烫伤创面下.结论 UCMSCs具有较强的成纤维样细胞分化能力,经局部注射后,可通过定植于烫伤创面而显著提高创面愈合率.
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结核分枝杆菌热休克蛋白基因真核表达载体的构建及表达
目的 构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体pEGFP-N 1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达.方法 以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒pEGFP-N1的多克隆位点,经酶切及测序鉴定正确后,将质粒pEGFP-N l-HspX转染RAW264.7细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达,Real-time PCR及Westem blot法鉴定HspX基因的表达.结果 质粒pEGFP-N 1-HspX经酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒pEGFP-N 1-HspX转染24 h后,荧光显微镜下可见GFP表达,表达的重组融合蛋白Flag-HspX相对分子质量约43 000;转染组细胞中HspX基因mRNA水平明显高于空载体组(P＜0.01).结论 成功构建了pEGFP-N 1-HspX融合基因真核表达载体,并在RAW264.7细胞中获得表达.
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冷应激前后大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶基因的定量
目的 研究急性冷刺激对大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠α-烯醇化酶(α-enolase,EN01)基因表达量的影响.方法 取健康大鼠10只,随机分为2组:冷应激组和正常对照组,每组5只.正常对照组饲养环境为24℃,冷应激组大鼠环境温度为4℃,应激时间为12h.实验后分别取两组大鼠肺脏、肾脏、肌肉及十二指肠组织样品,应用实时荧光定量PCR检测应激前后大鼠四种内脏器官EN01 mRNA表达量.结果 冷应激组肺脏与十二指肠ENO1 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P＜0.05);肾脏与肌肉ENO1 mRNA表达水平显著下降(P＜0.05).结论 急性冷刺激可通过影响肺脏、肌肉、肾脏及十二指肠EN01基因表达调节代谢燃料的选择和应激反应程度.
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rhGH-Fc工程细胞的构建及筛选
目的 研制具有较长半衰期的长效重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH),构建并筛选出高表达rhGH-Fc免疫融合蛋白的细胞株.方法 将hGH基因与特异位点突变后的人抗体IgG4 Fc段用柔性linker连接,克隆至GS双表达载体上,构建重组表达质粒,经两次双酶切鉴定及测序分析后,将构建正确的质粒稳定转染CHO-kl细胞.通过逐渐提高蛋氨酸磺酰胺(methionine sulphoximine,MSX)浓度,ELISA法筛选高表达的细胞株;利用亲和层析初步纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE、HPLC、等电聚焦电泳分析;通过大鼠去垂体法测定长效rhGH的生物学活性,比较本课题研制的长效GH与其他普通GH的半衰期.结果 重组质粒phGH-Fc-1经两次双酶切及测序鉴定,证明构建正确;成功筛选出高表达rhGH-Fc融合蛋白的细胞株,表达量可达1 g/L;纯化的目的蛋白相对分子质量大小及等电点均与理论值一致,纯度可达95％以上;经大鼠去垂体体内活性测定,其比活为1.1 IU/mg,依大鼠体重增长情况判断,其生物半衰期高于普通rhGH.结论 成功构建并筛选出高表达长效rhGH的工程株,为后续长效rhGH的研制奠定了基础.
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N-末端核定位序列对猪圆环病毒衣壳蛋白病毒样颗粒在汉逊酵母中组装的影响
目的 探讨N-末端核定位序列(nuclear localization signal,NLS)对猪圆环病毒2型(porcine circovims type 2,PCV2)衣壳蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)中组装的影响.方法 分别构建表达PCV2ORF2全长及NLS截短型重组表达质粒pMOXZ-full和pMOXZ-△N40,电转至HP,构建重组酵母表达菌株full-HP和△N40-HP,获得的两种表达产物经蔗糖密度梯度超速离心及超滤后,Western blot法检测两种表达产物的单体蛋白表达和VLP组装效率,透射电子显微镜观察VLP形态,小鼠免疫试验检测VLP的免疫原性,地高辛标记DNA杂交法检测VLP的DNA结合能力.结果 与全长ORF2表达产物PCV2-VLP(full)比较,NLS截短型表达产物PCV2-VLP(△N40)的单体表达量略有提高,但VLP组装效率及DNA结合能力均降低.两种VLP颗粒形态相近,直径约20 nm;两种VLP免疫小鼠血清的抗体几何平均滴度(GMT)差异无统计学意义(P＞0.05).结论 去除NLS可提高PCV2衣壳蛋白VLP单体的表达水平,但不是VLP组装所必须的,且可使VLP的组装率略有降低.本研究为PCV2-VLP结构和疫苗的研究奠定了基础.
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顶空气相色谱法测定A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺的残留量
目的 建立A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的顶空气相色谱测定法,并进行验证.方法 采用标准溶液加入法,以10％无水碳酸钠溶液为溶剂制备混合对照品及供试品溶液,采用顶空气相色谱法进行检测,色谱条件为:采用Agilent DB-1毛细管柱(30 m×0.53 mm×5.0μm);柱流速:4ml/min;载气:氮气,分流比:10:1;程序升温:柱温起始温度为40℃,保持5 min,以10℃/min的升温速率升至200℃,保持2 min;进样口温度:200℃;FID检测器温度:250℃;顶空瓶平衡温度:80℃,平衡时间30 min.对方法的系统适应性、线性范围、重复性、检测限和定量限、准确性进行验证.采用建立的方法检测4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液的乙腈及三乙胺残留量.结果 各待测组分理论塔板数不低于5 000,分离度不低于1.5;乙腈和三乙胺的线性方程分别为y=3730.2x+1.210 6和y=64699x+11.772,r均为0.999 9,线性范围分别为2.002～100.1 μg/ml和1.508～ 75.40 μg/ml;同一混合对照品溶液重复检测5次乙腈和三乙胺残留量的RSD值分别为1.34％和3.10％;乙腈和三乙胺检测限分别为0.020 02和0.007 54 μg/ml,定量限分别为0.066 72和0.030 16 μg/ml;样品高、中、低3个浓度的乙腈和三乙胺平均加样回收率分别为102.60％和101.92％,RSD分别为1.76％和4.12％.4批A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中均未检出乙腈及三乙胺.结论 该方法具有良好的重复性、准确性,可用于A群脑膜炎球菌结合疫苗原液中乙腈及三乙胺残留量的检测.
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检测Ⅱ型单纯疱疹病毒DNA拷贝的real-time qPCR方法的建立及其应用
目的 建立检测Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 2,HSV-2)DNA拷贝的real-time qPCR方法.方法 设计靶向HSV-2 gD片段的特异性引物和探针,以HSV-2基因组为模板,建立检测HSV-2 DNA拷贝的real-time qPCR方法,并进行重复性和灵敏度验证.结果 HSV-2 DNA拷贝在1×107～1×102 eopies/ml范围内,线性良好,r2＞99％,灵敏度为l×102 copies/ml;不同稀释度参考品检测结果的批间变异系数为1.70％～ 5.35％,批内变异系数为1.70％～4.8％.结论 与常规的以质粒为模板的real-time qPCR方法相比,以HSV-2基因组为模板建立的real-time qPCR方法的灵敏度更高,可用于生殖器疱疹临床诊断的优化.
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测定唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法的建立及验证
目的 建立测定脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物及结合物中唾液酸含量的改良间苯二酚-盐酸法,并进行验证.方法 以《中国药典》三部(2015版)测定多糖中唾液酸含量的间苯二酚-盐酸法为基础进行改良,去除有机相萃取步骤,优化方法中的检测波长(300～900 nm)及煮沸时间(10、15、20、25、30、35和40 rin);并对建立方法的线性范围、中间精密度及准确度进行验证.比较改良法与《中国药典》法对样品唾液酸含量及其层析分部产物;液酸含量测定结果的差异,同时检测乳糖对改良法测定唾液酸含量的影响.结果 方法中佳检测波长为569 nm,佳煮沸时间为30 rin.唾液酸对照品浓度在5～40 μg/ml范围内与569 nm吸收值呈良好的线性关系,R2均＞0.999;3位实验人员在3个不同时间对样品中唾液酸含量测定9次结果的CV均＜3％;外加5、10、20 μg/ml浓度的N-乙酰神经氨酸的回收率均在95％～105％之间.改良法与《中国药典》法检测的样品唾液酸含量差异无统计学意义(P＞0.05),且两种方法的层析分部图谱一致.乳糖溶液浓度超过100 μg/ml时对唾液酸测定结果的干扰较大.结论 本实验建立的改良唾液酸测定法具有良好的线性、精密度和准确度,可用于脑膜炎球菌多糖、多糖衍生物和结合物唾液酸含量的测定.
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无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒工艺的建立
目的 建立无血清培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株的工艺.方法 分别采用VP-SFM和含5％牛血清DMEM于方瓶中培养Vero细胞制备狂犬病病毒CTN-1V株,比较无血清培养基培养不同代次Vero细胞间及无血清与含血清培养基培养Vero细胞间制备的狂犬病病毒滴度及效力.将2 g/L微载体cytodex-1加至250 ml spinner flask中,加入Vero细胞,37℃培养3d,按MOI=0.02接种狂犬病病毒CTN-1V株,检测病毒收获液的病毒滴度及效力,每天显微镜下观察细胞生长情况,计算细胞比生长速率.结果 无血清培养基培养不同代次Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度和效力差异无统计学意义(P＞0.05);无血清和含血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒的滴度差异无统计学意义(P＞0.05),但无血清培养基培养Vero细胞制备狂犬病病毒效力明显高于含血清的培养基(P＜0.05).搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞制备狂犬病病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,收获病毒液的平均病毒滴度为6.50 lgFFU/ml,平均病毒效力为6.77 IU/ml.结论 初步建立了微载体系统无血清培养Vero细胞制备狂犬病病毒的工艺,为无血清规模化制备狂犬病疫苗奠定了基础.
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响应面分析法优化蛹虫草液体发酵培养基
目的 运用响应面分析法对蛹虫草液体发酵培养基进行优化,以提高蛹虫草发酵液中抗肿瘤活性物质的含量.方法 以对肝癌细胞抑制率为指标,首先进行单因素试验优选出培养基中佳氮源及其浓度以及葡萄糖和磷酸二氢钾(KH2PO4)佳浓度;再采用响应面分析法确定关键因素之间的配比.结果 蛹虫草佳液体发酵培养基为:葡萄糖浓度20.22 g/L,蛋白胨浓度17.57 g/L,KH2PO4浓度0.92 g/L,硫酸镁浓度0.5 g/L,在该条件下,肝癌细胞抑制率为70.121％,与模型预测值(70.938％)相接近.结论 运用响应面分析法对蛹虫草液体发酵培养基进行了优化,从根本上提高了各活性物质的产量,对后续蛹虫草抗癌活性的研究具有重要意义.
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响应面法优化检测己二酸二肼衍化后破伤风类毒素纯度的排阻型高效液相法
目的 响应面法优化检测己二酸二肼(adipate hydrazine,ADH)衍化后破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)纯度的排阻型高效液相(SEC-HPLC)法.方法 SEC-HPLC层析柱Superdex 200 increase 3.2/300流动相为:20 mmol/LNa2CO3/NaHCO3,150 mmol/L NaCl,pH9.0,柱温25℃,单针检测时间60 min.采用响应面法及中心复合表面设计模型(Central Composite Face-centred,CCF)对层析柱的流速、进样量、样品浓度进行优化,通过分离度、峰对称性、峰理论塔板数、单针进样时间等评价指标,确定优色谱参数,并在优色谱参数下连续进样100针,验证其分离效果.结果 色谱柱的优色谱条件为:流速50μl/min,进样量5μl,样品浓度1.Omg/ml,连续进样100针各响应量均满足优化目标.结论 成功采用响应面法优化了检测ADH衍化后TT纯度的SEC-HPLC法,且优化后的方法具有良好的稳定性.
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N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例方法的建立
目的 建立应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法.方法 利用氨基酸测序仪的摩尔归一化数据,经信号和噪音分离、信号的筛选等数据处理过程,将主肽链N-末端序列数据与其他次要序列数据分开,进而估计主肽链所占比例.将本方法计算结果与质谱结果进行比较,另用混合样品数据进行验证分析.结果 本方法所计算结果基本符合实际情况,可较准确地估计主肽链比例.结论 初步建立了应用N-末端氨基酸测序数据估计N-末端不均一的单链重组蛋白制品主肽链比例的方法,为相关蛋白的分析和研究提供了辅助.
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Msi2在白血病中的作用及其临床价值
近几年发现Msi2在白血病中发挥重要调控作用,对其分子机制的深入研究将有利于进一步阐述白血病的发病机制,为白血病临床治疗及预后评估提供更多的理论依据.本文主要介绍了Msi2参与调控白血病的可能分子机制以及Msi2的临床价值等.
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已上市人乳头瘤病毒疫苗的概况及其在国内的临床研究进展
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是诱发该病的主要病原.HPV疫苗是全球首个预防癌症的疫苗,已在多个国家广泛应用.目前成功上市的宫颈癌疫苗有默沙东公司研发的4价和9价Gardasil及葛兰素史克公司(GSK)研发的Cervarix;在我国,HPV疫苗于2016年7月上市.本文就上述疫苗的基本情况、安全性、保护效果及免疫原性作一综述,并对HPV疫苗在国内的临床研究现状进行简介.
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不同厂家无硫柳汞流感病毒裂解疫苗在动物体内免疫原性的比较
目的 比较长春生物制品研究所有限责任公司(简称长春公司)生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗与国内外同类产品在动物体内的免疫原性.方法 分别用长春公司、国外A公司及国内B公司生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗,经后腿胫前肌肌肉注射免疫小鼠,以注射PBS的小鼠作为对照.于免疫前及免疫后14、21、28、35、42 d,经小鼠眼静脉采血,分离血清,采用血凝抑制试验(hemagglutination inhibition,HI)检测小鼠血清中的抗体滴度,并计算HI抗体几何平均滴度(GMT)、HI抗体阳转率、HI抗体GMT增长倍数和HI抗体保护率.结果 各疫苗组小鼠血清中HI抗体GMT均明显高于相应时间点的PBS组(P＜0.01),各疫苗组组间差异无统计学意义(P＞0.05);免疫后28、35、42 d,各疫苗组的HI抗体阳转率为77％～ 100％,组间差异无统计学意义(P＞0.05);各疫苗组HI抗体GMT较免疫前增长倍数均＞2.5倍,组间差异无统计学意义(P＞0.05);各疫苗组的HI抗体保护率为62％～100％,组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 长春公司生产的无硫柳汞流感病毒裂解疫苗与国外A公司疫苗免疫原性水平相当,略高于国内B公司.
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CA16疫苗候选株特异性免疫血清保护性的初步评价
目的 评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力.方法 将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价免疫血清.采用微量细胞病变法检测中和抗体效价;用中和抗体效价终浓度为32 U的特异性免疫血清对18株不同CA16临床分离毒株及15株EV71毒株进行交叉中和指数检测;选取中和抗体效价为16、32、64、128、256 U的特异性免疫血清对可致乳鼠产生明显麻痹作用的CA16 FY-18株进行体内中和保护水平检测.结果 获得的兔抗CA16 K168/8血清对14株CA16毒株的中和效价为1∶1 024～1∶6144,GMT值为1∶3 153;可于体外完全中和18株不同CA16毒株,中和指数为100～5 623.4,平均值为794.1,而对15株EV71临床分离株中和指数仅为0.32～5.62,平均值为2.2;体内中和保护水平随抗体效价升高而增加,呈量-效关系,当中和抗体效价达128 U时,可完全保护乳鼠不发生临床麻痹反应.结论 CA16 K168/8疫苗候选株特异性免疫血清体内、外试验结果表明其具有良好的免疫保护性.
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阳离子脂质体DOTAP作为乙肝疫苗佐剂的免疫增强效果
目的 探讨阳离子脂质体DOTAP(2,3-二油氧基丙基三甲基氯化铵)作为乙肝疫苗佐剂的免疫增强效果.方法 薄膜蒸发复水法制备DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗,检测其粒径、Zata电位、包封率;将BALB/c小鼠随机分为5组:DOTAP阳离子脂质体乙肝疫苗组(DOTAP佐剂组)、不加佐剂的乙肝疫苗组(HBS组)、乙肝疫苗加铝佐剂组(铝佐剂组)、乙肝疫苗加CPG-ODN佐剂组(CPG-ODN佐剂组)以及PBS对照组,免疫剂量分别为0.2、2μg/(只·0.1 ml),每个剂量10只小鼠,分别于0、28 d经肌肉免疫,0、14、28、42 d采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗HBs特异性IgG抗体、亚型抗体(IgG1、IgG2a)滴度.结果 制备的阳离子脂质体乙肝疫苗平均粒径200～ 300 nm,粒径分布均匀,带正电荷,包封率在70％以上.DOTAP佐剂组血清IgG抗体水平明显高于HBS组,其中2μg剂量组差异有统计学意义(P＜0.05);与铝佐剂组相比,两个剂量组差异均无统计学意义(P＞0.05);0.2 μg剂量组显著低于CPG-ODN佐剂组(P＜0.05).DOTAP佐剂组可同时诱导高水平的IgG1、IgG2a型抗体,两个剂量组产生的IgG1型抗体水平均与铝佐剂组相当(P＞0.05),但IgG2a型抗体滴度均明显高于铝佐剂组(P＜0.05);两个剂量DOTAP佐剂组产生的IgG1、IgG2a型抗体水平与CpG-ODN佐剂组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 DOTAP阳离子脂质体作为重组乙肝疫苗的佐剂具有良好的免疫增强效果,其对体液免疫的增强作用不劣于铝佐剂和CPG-ODN佐剂,DOTAP佐剂可同时诱导Th2细胞和Th1细胞介导的免疫应答.
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抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体CHO工程细胞株的构建、筛选及表达
目的 构建抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)人源化单克隆抗体CHO工程细胞株,并进行筛选及表达.方法 将抗HER2抗体重链基因Fd及轻链基因VL分别克隆至同一质粒pRH上,将构建正确的重组表达质粒命名为pHER2.通过脂质体法将pHER2转染至二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型CHO细胞(CHO-DG44)中,筛选稳定表达的工程细胞株,进行ELISA及SDS-PAGE检测.同时对抗HER2抗体高表达细胞株进行batch模拟试验.结果 从近10000株克隆中筛选获得3株备选细胞株,命名为H6、H7和H9.细胞株培养上清表达的抗体仅能与重组HER2发生特异性结合;SDS-PAGE检测结果表明,于相对分子质量50 000和25 000处可见重链和轻链的目的蛋白条带.H6、H7和H9细胞株在简单的batch悬浮培养条件下周期约为1周,抗体水平随培养时间的延长而逐渐升高,H9细胞株表达水平高,为0.52 mg/ml.结论 本研究筛选获得的工程细胞株H9具有较高的抗HER2单克隆抗体水平,为靶向治疗HER2过表达的乳腺癌和胃癌等恶性肿瘤奠定了基础.
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甲胎蛋白单抗修饰的载核心蛋白聚糖基因聚乳酸-羟基乙酸靶向纳米粒在H22荷瘤小鼠体内诱导的自噬作用
目的 探讨甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)单抗修饰的载核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因聚乳酸-羟基乙酸[poly (lactic-co-glycolic acid),PLGA]靶向纳米粒对小鼠肝癌移植瘤生长的影响及与自噬的关系.方法 建立小鼠肝癌移植瘤模型,将AFP单抗修饰的纳米粒AFPmAb-PLGA-rhDCN注入肿瘤中央及基底部,并以非特异IgG-PLGA-rhDCN纳米粒、PLGA-空质粒及PBS缓冲液作为对照组.测量肿瘤体积及瘤重,免疫组化及Western blot法检测肿瘤组织中自噬相关基因Beclin1蛋白含量的变化.结果 与3个对照组相比,AFPmAb-PLGA-rhDCN纳米粒组小鼠肿瘤生长缓慢,肿瘤体积和瘤重均明显减小(P＜0.05),肿瘤组织中Beclin1蛋白的表达均明显降低(P＜0.05).结论 AFP单抗修饰的载DCN基因纳米粒可抑制小鼠肝癌移植瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞自噬作用有关.
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2014～2015年乌鲁木齐市流感病原学监测分析
目的 对2014年10月～ 2015年3月乌鲁木齐市流感病原学进行监测分析,以明确乌鲁木齐市2014～ 2015年流感病原学特征,为流感疫情防控提供科学依据.方法 对流感样病例的咽拭子样本进行流感病毒核酸检测,并利用MDCK进行病毒分离,采用血凝试验(HA)进行流感病毒型别的鉴定.结果 2014年10月～2015年3月共检测流感病例咽拭子样本1 334份,核酸检测阳性的有258份,阳性率为19.34％,其中甲型H1N1型1份,H3N2型216份,乙型BY41份.流感高峰在11和12月份,年龄以5～14岁为高发人群.共分离到流感病毒52株,整体分离率为3.76％,其中H3N2型51株,乙型BY1株.结论 加强对流感的实时监测及对流感高度易感人群的防护,对我市流感的防控工作具有重要意义.
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2010～2014年新余市疑似预防接种异常反应监测工作质量评价
目的 评价2010～2014年新余市疑似预防接种异常反应(Adverse Events Following Immunization,AEFI)监测工作质量,分析其发生特征.方法 通过AEFI监测信息系统收集2010～2014年新余市报告的AEFI个案数据,用AEFI的监测指标进行工作质量评价,采用描述性流行病学方法对其发生特征进行分析.结果 2010～ 2014年新余市报告接种21种疫苗共2 162 948剂,AEFI监测病例195例(男女性别比为1.71∶1),其中一般反应125例,异常反应68例,偶合症2例,无疫苗质量事故、接种事故,无心因性反应发生;报告发生率9.02/10万剂.自2013年后,AEFI明显增加,具有明显的季节性,以7、9月份高.AEFI监测病例48 h内报告率逐年提高至100％,48 h内调查率、3d内调查表报告率历年均达100％.结论 新余市疫苗安全性和疫苗接种服务质量较高,AEFI监测系统及时性、敏感性高.AEFI监测网络更加完善,监测工作已进入正轨.
关键词： 疑似预防接种异常反应 监测 -
用于血型鉴定的国产微柱凝胶卡抗体试剂的选择
目的 筛选特异性强、效价高、亲和力高的用于血型鉴定的国产微柱凝胶卡抗A、抗B及抗D抗体试剂.方法 按《中国生物制品规程》2000版中《抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)制造及检定规程》的要求,对4家公司的抗A、抗B及抗D抗体试剂进行特异性、效价、亲和力检测.结果 3批抗A、抗B单克隆抗体试剂及3批抗D抗体试剂的特异性、效价和亲和力检测结果均符合《中国生物制品规程》2000版中《抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体)制造及检定规程》的要求,选择成本相对较低的上海血液生物医药有限责任公司生产的抗A、抗B试剂和英国Millpore公司亲和力更好、效价更高的抗D抗体试剂,用于制备国产微柱凝胶卡.结论 3批抗A、抗B、抗D单克隆抗体试剂均合格,已选择更优的试剂用于制备国产微柱凝胶卡.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
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