中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
Ⅰ型糖尿病模型大鼠在重复给药毒性试验中的应用
目的 研究Ⅰ型糖尿病模型大鼠在精蛋白重组人胰岛素注射液重复给药毒性试验中的应用方法 使用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)对健康SD大鼠造模,55 mg/kg,计算6个月后的存活率.取模型大鼠,分高、中、低剂量(30、12、5 U/kg)组和对照组,每组20只,雌雄各半,高、中、低剂量组给予精蛋白重组人胰岛素注射液,对照组给予精蛋白重组人胰岛素注射液辅料空白液,均经大鼠皮下注射,1次/d,连续4周,进行重复给药毒性试验,给药4周后,经大鼠腹主动脉采血,检测血清胰岛素含量、C肽含量、糖化血红蛋白含量以及血液生化学和血液细胞学相关指标,并进行组织病理学观察.结果 模型大鼠血糖均高于16.7 mmol/L,建模成功率为91.7％,6个月存活率为82％,确定建模成功.重复给药毒性试验高剂量组大鼠死亡4只.与其他剂量组相比,给药结束后和恢复期结束后高剂量组大鼠血清中糖化血红蛋白降低(P＜0.05);与对照组相比,给药结束后,胰岛素、C肽含量升高(P＜0.05),恢复期结束后,高、中剂量组胰岛素、C肽含量升高(P＜0.05);与对照组相比,给药结束后,高剂量组雄鼠和雌鼠血清中白蛋白、血小板升高(P＜0.05),淋巴细胞数降低(P＜0.05),而雌鼠红细胞、白细胞减少(P＜0.05),其余血液细胞学指标未见明显差异.恢复期结束后,各剂量组血液生化学和血液细胞学指标均无差异,建模成功大鼠主要脏器均出现病理变化,重复给药毒性试验中各组大鼠各主要脏器在给药结束后和恢复期结束后也分别出现不同程度的病理变化.结论 用STZ造模的Ⅰ型糖尿病大鼠对于精蛋白重组人胰岛素产生的低血糖反应具有较好的耐受性,接近于临床患者的病理生理特征,在使用精蛋白重组人胰岛素进行重复给药毒性试验中具有实际应用价值.
-
我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性及全基因组序列分析
目的 对我国云南登革4型病毒分离株(Ban18)及其减毒株(Ban18 HK20和Ban18 HK30)的生物学特性进行分析,测定原株和减毒株的全基因组序列并进行比对,分析与毒力相关的位点.方法 将各毒株在Vero细胞传代后进行空斑形态观察、小鼠脑内致病力和免疫原性检测;减毒株经空斑纯化后,挑选单克隆,检测其小鼠脑内致病力;提取减毒株基因组RNA,RT-PCR法分段扩增其全基因组序列并测序,应用DNAStar软件包进行序列比对分析.结果 Ban18 HK20和Ban18 HK30毒株在Vero细胞上形成的空斑较其原株稍大,但边界较模糊;两个代次的减毒株对KM小鼠不致病,对2～4日龄乳鼠的脑内致病力也明显低于其原株;Ban18原株和Ban18 HK20毒株免疫的小鼠经3个剂量的国际标准株H241株脑内攻击后,均无死亡,但Ban18 HK30毒株与对照组相比,未显示出保护作用;Ban18 HK20毒株的9个克隆株中,3株对乳鼠的脑内致病力低于其他6株克隆株,Ban18 HK30毒株的5个克隆株对乳鼠的脑内致病力无明显差异;减毒株的两个代次病毒与其原株存在3个氨基酸[A→W(C-1 11)、I→T(E-155)、I→L(E-369)]和一个核苷酸[G→A(3'UTR-219)]的共同差异.结论 通过原代地鼠肾细胞传代的两个代次(HK20和HK30)病毒对小鼠的脑内致病力明显减弱,其中Ban18 HK20免疫原性较好,并从空斑克隆中筛选出3株毒力较Ban 18 HK20更低的克隆株;C-111、E-155、E-369和3'UTR-219突变与毒力减弱密切相关.
-
Klotho基因高表达对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用
目的 观察Klotho基因高表达对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用.方法 采用RT-PCR法从健康Wistar大鼠肾脏中分段扩增Klotho基因,将两段基因连接后,亚克隆至腺病毒载体shuttle中,构建重组质粒shuttle/Klotho,与腺病毒骨架质粒共转染AD293细胞进行包装后,检测重组腺病毒的滴度.经Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)复制DN模型,将DN模型大鼠随机分成DN组、Ad组和Klotho组,从糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型建立成功后2周开始,Ad组每只经尾静脉注射3×108 PFU不含Klotho基因的腺病毒,Klotho组每只经尾静脉注射3×108 PFU含Klotho基因的重组腺病毒,DN组每只经尾静脉注射等体积生理盐水;并设对照组(即Con组,制备糖尿病模型时,经腹腔注射等量柠檬酸缓冲液,治疗时经尾静脉注射等体积生理盐水).各组均每2周注射1次.实验期间,每天观察各组大鼠一般情况.分别于糖尿病模型建立成功后第4、8、16周,称量大鼠体重并处死,取左侧肾组织称重,计算肾脏指数(renal index,RI);显微镜下观察肾脏的病理学改变;RT-PCR法检测大鼠肾脏组织中Klotho基因mRNA的转录水平;ELISA法检测尿微量白蛋白水平,比浊法检测血尿素氮和血肌酐水平.结果 酶切及测序鉴定证实克隆的Klotho基因正确.含Klotho基因的重组腺病毒的滴度为4.2×108 PFU/ml.DN、Ad和Klotho组大鼠从DM模型建立成功后第2周开始毛色逐渐无光泽,体重降低,活动能力减弱,食量、饮水量增加,粪便偏稀,精神状态差;从第6周开始,Klotho组大鼠的上述症状均有所改善.DM模型建立成功后第4、8、16周,与Con组相比,DN和Ad组大鼠的RI、尿微量白蛋白、血肌酐和血尿素氮水平均显著增加(P＜0.01),而Klotho组RI和尿微量白蛋白水平显著低于DN和Ad组(P＜0.05或P＜0.01),血肌酐和血尿素氮水平也下降,且第8、16周DN和Ad组大鼠血肌酐和血尿素氮水平高于第4周,而Klotho组无此现象;DN和Ad组大鼠的肾小球体积明显增大,肾小球系膜细胞增生,系膜区明显增宽,基膜增厚、基质大量堆积,部分肾小球出现硬化,肾小管上皮细胞肿胀,而Klotho组大鼠肾脏上述病变较DN和Ad组减轻;DN和Ad组大鼠肾脏组织中Klotho基因mRNA的转录水平明显减少(P＜0.05或P＜0.01),Klotho组变化不明显,但高于DN和Ad组(P＜0.01).结论 Klotho基因高表达可减轻DN大鼠的肾脏损伤,对肾脏具有保护作用.
-
伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的原核表达及其纯化
目的 原核表达并纯化伪旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Trichinella pseudospiralis serine protease inhibitor,Tpserpin)基因,并鉴定其抗原性.方法 从伪旋毛虫肌幼虫提取总RNA,RT-PCR扩增Tp-serpin基因,插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,转化大肠埃希菌(E coli)Rosetta gami(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析后,用Ni-NTA Agarose亲和层析纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot 鉴定反应原性.结果 重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,与GenBank中登录的Tp-serpin基因相似性达99％.表达的重组Tp-serpin蛋白相对分子量约43 000,表达量约占菌体总蛋白的40％,主要以可溶性形式存在;纯化后的重组Tp-serpin蛋白纯度达95％以上,可被伪旋毛虫感染60 d的猪血清特异性识别,具有较好的反应原性.结论 成功构建了重组表达质粒pET-28a-Tp-serpin,并在E.coli Rosetta gami(DE3)中表达了重组蛋白,为旋毛虫病的血清学诊断候选抗原的研制及开发提供了科学依据,也为阐明serpin在伪旋毛虫入侵时期调节宿主免疫反应的作用奠定了基础.
-
湘莲中产耐酸性α-淀粉酶菌株的分离及鉴定
目的 从湘莲中分离产耐酸性α-淀粉酶菌株,并对其进行鉴定.方法 采用淀粉富集培养基分离湘莲中产α-淀粉酶菌株,通过形态学、生理生化分析及16S rDNA序列分析进行鉴定;在不同pH(3.20、3.38、3.56、3.85、4.15和4.45)条件下培养筛选出的菌株,测定酶活力,确定产酶的适pH;在不同温度(25、30、35和40℃)条件下培养耐酸性α-淀粉酶产生菌,测定酶活力,确定产酶的适温度;用不同碳源(蔗糖、淀粉和葡萄糖)和不同氮源[牛肉膏、(NH4)2SO4、柠檬酸氢二铵、柠檬酸三铵和蛋白胨]培养耐酸性α-淀粉酶产生菌,测定酶活力,确定产酶的适碳源和氮源.结果 从湘莲样品中筛选出2株酶活力较高的菌株,酶活力分别为376.21和395.62 U/ml,分别编号为LL5和LL9,2株菌株均为解淀粉芽胞杆菌.菌株LL5产α-淀粉酶的适pH为3.56,适温度为34℃,适碳源为葡萄糖,适氮源为柠檬酸三铵,为耐酸性α-淀粉酶产生菌.结论 成功从湘莲中分离出1株产耐酸性α-淀粉酶菌株LL5.
-
趋势分析法评价乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂的质量
目的 应用趋势分析法评价我国乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂质量.方法 采用同一批次国家参考品进行批批检验,且检验均合格的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂A、B、C、D的数据,对不同血清型、不同浓度样品的检测结果进行趋势分析,以理论平均值±2 SD为警戒限,平均值±3 SD为行动限,将检测结果超出行动限、连续3批检验结果超出警戒限或检验结果趋势有严重漂移(连续6批结果上升或下降或连续8批结果在均值同一侧)暂定为偏离数据,观察诊断试剂的各检测指标的变化趋势.结果 在2011年3月～ 2013年5月的观察时间内,A、B、C试剂均出现8～ 10批次数据在均值同侧的情况,判定为存在偏离数据;D试剂质量稳定,未出现试验数据严重漂移的批次.结论 趋势分析可反映乙型肝炎病毒诊断试剂质量的变化,为保证试剂质量的稳定提供了方法.
-
衍生毛细管气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量
目的 采用衍生毛细管气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量,并进行验证.方法 应用2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine,DNPH)衍生流感病毒裂解疫苗中的游离甲醛,对其衍生化条件进行优化后,采用毛细管气相色谱法直接进样测定.色谱条件:色谱柱为HP-5毛细管色谱柱,初始温度为150℃,保持1 min,以20℃/min的速率升温至250℃,保持10 min;检测器为电子捕获检测器,温度为350℃,尾吹60 ml/min;进样口温度为300℃,隔垫吹扫3 ml/min,分流比50:1;载气为氮气,流量为2.5ml/min;进样量1μl.确定建立的方法的检测限和定量限,进行线性、专属性、准确度、精密度及稳定性验证,并用建立的方法检测2个企业共11批样品中游离甲醛含量.结果 确定的佳衍生化条件为:量取对照品溶液和供试品溶液各1 ml,分别置15 ml离心管中,加入DNPH盐酸溶液1 ml,涡旋l min;超声5 min;60℃衍生45 min;冰浴冷却,加入环己烷2 ml,涡旋萃取1 min;静置分层,收集上层液1 ml,注入气相色谱仪进行检测.该方法的低检测限为0.1μg/ml,定量限为0.2μg/ml,游离甲醛含量在1 ～ 30 μg/ml范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.999 8);该色谱分离条件对甲醛的衍生物甲醛2,4-二硝基苯腙有较好的专属性;3个不同浓度样品平均加样回收率为107％,相对标准偏差(relative standarddeviation,RSD)为2.11％;对照品溶液连续进样6次的峰面积平均值为40 652.8,RSD为0.004％;甲醛衍生物溶液冻存7h内的峰面积平均值为40 257.35,RSD为1.57％. 11批流感病毒裂解疫苗的游离甲醛含量均符合《中国药典》三部(2010版)规定,均不高于50 μg/ml.结论 建立了衍生毛细管气相色谱法检测流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量,该方法操作简单,精密度、稳定性、准确度好,专属性强,可用于流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量的测定.
-
细胞株逆转录酶活性SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法的建立及验证
目的 建立生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法,并进行优化及初步验证.方法 以MS2噬菌体RNA模板及相应引物,建立一步检测逆转录酶扩增产物的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,以梯度稀释的重组莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virus,MMLV)逆转录酶活性参考品绘制标准曲线,进行逆转录酶活性的定量.对反应的引物和2×RT-PCR Mix进行优化,并对建立的方法进行线性关系、灵敏度、精密度和准确度验证.结果 1组引物(上游:5’-CATAGGTCAAACCTCGTAGGAATG-3',下游:5'-TCCTGCTC-AACTTCCTGTCGAG-3’)更适合本方法;Promega公司生产的2×RT-PCR Mix具有更高的反应效率.逆转录酶活性在5.40×108 ～ 5.40×104 pU/μl范围内定量标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.999 7;该方法判断样品阴阳性的标准cut-off值为1.31×104 pU/μl;检测CHO-1细胞株样品逆转录酶活性的试验内变异系数(CV)为0.80％,试验间CV值为l6.4％;检测5株细胞样品逆转录酶活性的平均加标回收率为122.8％.结论 建立了生物制品生产用细胞株逆转录酶活性SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法,该方法能够准确地定量检测细胞株的逆转录酶活性.
-
4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法的初步验证
目的 对4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法进行初步验证.方法 以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的4型、6B型及9V型IgG抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性(R2)、检测限及定量限;连续测定该4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算回收率,验证该方法的准确性;在同一次试验内连续测定3份本室制备的质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算变异系数(GV),验证方法的试验内精密性;在不同次试验间连续测定15份质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算CV值,验证方法的试验间精密性;利用3份本室制备的质控血清进行抑制试验,验证方法的特异性.结果 该方法检测4、6B、9V型IgG抗体的范围分别为0.034～8.325、0.093 ～ 22.625和0.066 ～ 16.400 ng/ml,R2均大于0.99,检测限分别为0.41、0.64和0.77 ng/ml,定量限分别为1.60、2.66和2.80 ng/ml;该方法检测4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体,除96/728和96/770质控血清的4型抗体测定值远远超出理论值外,其他检测结果准确性均良好;该方法的试验内变异系数均小于15％,试验间变异系数绝大多数小于20％;多糖抗原与血清抗体的反应具有特异性,其中,检测4型抗体的特异性高,检测6B型抗体的特异性略差.结论 该方法的检测范围、线性、检测限和定量限均达到可接受标准,准确性、精密性和特异性良好,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测.
-
核磁共振波谱法测定b型流感嗜血杆菌荚膜多糖中的核糖含量
目的 建立核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance,NMR)法测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖中核糖含量的方法.方法 利用NMR技术中的氢核磁共振波谱(1H-NMR)的定量功能,对不同浓度的D-核糖进行定量分析,验证该方法的精密度及准确度,并与传统化学方法进行比较.结果 NMR法定量结果相对标准偏差(RSD)均小于1.0％,相对误差除低浓度20 mmol/L为7.4％外,其余浓度均在1％～3％之间,不同浓度的样品回收率在97.2％ ～ 107％之间;化学法定量结果RSD在0.6％ ～7.9％之间,相对误差在3％～6.5％之间,不同浓度样品回收率在93.5％ ～ 105.3％之间;两种方法检测的3批Hib荚膜多糖中核糖含量无明显差别,均在《中国药典》三部(2010版)规定的320 ～ 410 mg/g之间.结论 1H-NMR定量方法取样少,可直接定量,该方法精密度高、准确度高、重现性好,且不破坏多糖结构,可应用于细菌荚膜多糖质量控制的核糖定量.
-
FQ-PCR联合Sanger测序法检测结直肠癌患者表皮生长因子受体、KRAS及BRAF基因突变
目的 建立实时荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)联合Sanger测序法快速检测结直肠癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、KRAS和BRAF基因突变的方法.方法 根据结直肠癌中EGFR、KRAS和BRAF基因常见突变类型设计引物及其TaqMan探针序列,以提取的86份结直肠癌患者肿瘤组织DNA为模板,进行FQ-PCR扩增,PCR产物经SAP酶和EXO Ⅰ酶作用后,收集酶切产物,进行测序PCR扩增,扩增产物经乙醇/醋酸钠法纯化后进行测序,测序结果采用Bioedit软件进行分析;检测EGFR、KRAS及BRAF基因突变,并与FQ-PCR法检测KRAS12/13密码子突变进行比较.结果 成功建立了EQ-PCR联合Sanger测序法检测结直肠癌患者样本中EGFR、KRAS和BRAF基因突变的方法,各基因PCR扩增曲线均为标准的“S”型荧光扩增曲线,测序峰图清晰、稳定.86份结直肠癌样本中,EGFR基因突变概率2.3％(2/86),均为第21号外显子点突变,突变类型为L858R和L861Q; KRAS基因突变概率33.7％(29/86),其中第12位密码子突变占79.3％(23/29),突变类型为G12D和G12V,第13位密码子突变占10.3％(3/29),突变类型为G13D,第12和13位密码子同时突变l例(3.4％),第61位密码子未检测到突变,第146位密码子仅检测到2例突变,占6.9％(2/29),突变类型均为A146V;BRAF基因未检测到突变.FQ-PCR法检测KRAS12/13密码子突变概率高于FQ-PCR联合Sanger测序法,但差异无统计学意义(P＞0.05),两种检测方法的总体符合率为97.7％(84/86).结论 实时FQ-PCR联合Sanger测序法可快速检测结直肠癌患者中EGFR、KRAS和BRAF基因突变,检测方法稳定、可靠.
-
冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中各群多糖含量检测方法的建立及验证
目的 建立冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中多糖含量的测定方法.方法 将10支ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗用注射用水复溶后,分为10份,70μl/份,依次加入20 mg/ml蛋白酶K溶液0、l、2、3、4、5、6、7、8、9μl,降解结合物中载体蛋白,采用火箭免疫电泳法进行多糖含量的测定,确定蛋白酶K适加量.对建立的方法进行线性范围、定量限度确定以及准确度、精密性及专属性验证.结果 20 mg/ml蛋白酶K的适加量为5μl;该方法的线性范围为2.5～40 μg/ml,定量限度为2.5μg/ml;3个不同浓度的供试品重复测定3次,A、C、Y、W135群多糖含量的平均回收率分别为99.1％、96.5％、96.5％和97.4％;不同试验人员在不同时间对同一供试品重复测定9次,A、C、Y、W135群多糖含量的CV值分别为3.40％、4.11％、3.35％和4.88％;各群多糖抗原均与其对应的抗血清产生免疫沉淀,而与其他群抗血清不产生免疫沉淀,具有较强的特异性.结论 建立了冻干ACYW135群脑膜炎球菌多糖结合疫苗中多糖含量的检测方法,该方法在确定的限度范围内具有较好的准确度、精密性及专属性.
-
包被伤寒Vi多糖抗原检测鼠血清中伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法的建立
目的 建立检测伤寒沙门菌(Salmonella typhi)抗体的间接ELISA方法,并进行验证.方法 对常规间接ELISA方法进行优化,确定抗原适包被质量浓度及被检血清佳稀释度、适包被温度及时间、包被抗原与血清的适温度和时间、血清与酶标二抗及封闭的适温度和时间、酶标二抗适工作质量浓度,并验证该方法的灵敏度、精密性、特异性及耐用性;用伤寒Vi多糖结合物原液和伤寒Vi多糖衍生物经小鼠大腿内侧皮下免疫,分别于免疫后第14、21、28、35天,经眼眶采全血,分离血清,应用建立的间接ELISA方法检测抗体水平,计算抗体几何平均滴度(GMT).结果 确定了间接ELISA方法适工作条件:伤寒Vi荚膜多糖抗原适包被质量浓度为5μg/ml,血清佳稀释倍数为1:40;适包被温度及时间为4℃12 h;包被抗原与血清适反应温度和时间为37℃2 h;血清与酶标二抗适反应温度和时间为37℃1 h;封闭液适封闭温度和时间为室温1 h;HRP标记的羊抗鼠IgG佳反应浓度为1∶8 000.该方法灵敏度为1∶1 600;孔间和板间CV平均值分别为2.8％和5.8％;与其他血清无交叉反应;pH值、包被时间、包被温度及酶结合时间调整前后,同一样品检测的A450值差异无统计学意义(P＞0.05).伤寒Vi多糖与蛋白载体偶联后,免疫原性明显增强,且白喉类毒素(diphtheria toxin DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxinA,rEPA)两种不同载体偶联得到的结合物免疫原性无明显差异.结论 成功建立了一种检测伤寒沙门菌抗体的间接ELISA方法,该方法具有较强的特异性、灵敏度及精密性.
-
疫苗研发的历史、挑战和新技术
目的 疫苗的开发虽已取得了诸多成果,但仍有很多疾病不能预防,新技术有望成为开发针对这些疾病疫苗的有效手段.基于系统生物学和结构生物学抗原设计的新方法有利于我们对疫苗保护机制的理解,并将促进疫苗的开发.与此同时,我们应充分利用这些新方法加速疫苗的开发.本文对疫苗研发的历史、所面临的挑战和新技术作一概述.
-
炭疽的特异性治疗药物的研究进展
炭疽杆菌及其芽孢感染人和动物,引发炭疽病,表现为皮肤溃疡、焦痂、肠炎、肺炎及全身中毒症状,其是一类重要的烈性人畜共患病病原体.抗生素是治疗炭疽的常规药物,对于清除体内的炭疽杆菌效果较好,但却无法清除细菌分泌的炭疽毒素,因此,必须在感染早期使用,且对病死率较高的肺炭疽、肠炭疽疗效不佳.近年来,针对炭疽毒素的特异性治疗药物发展较快,包括抗体、类受体、小分子抑制剂和毒素突变体等,其中一株单克隆抗体已经在美国获得批准与抗生素联合使用治疗吸入性炭疽,还有其他几类药物均处在不同的研究阶段.本文从作用靶点、保护效果及应用前景等方面,对炭疽的特异性治疗药物的新研究进展作一综述.
-
牛乳腺炎无乳链球菌表面免疫相关蛋白及磷酸甘油酸激酶对奶牛的免疫保护作用
目的 分析牛乳腺炎无乳链球菌表面免疫相关蛋白(surface immunogenic protein,SIP)及磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)对奶牛的免疫保护作用.方法 制备SIP、PGK、SIP+PGK 3种亚单位抗原乳化免疫制剂,并设无乳链球菌全菌体裂解疫苗免疫组.均经科尔沁奶牛乳房基部乳上淋巴结附近皮下免疫,于初免后第0、14、42、56、70、84天,经颈静脉采血,分离血清,采用间接ELISA法检测各组血清抗体滴度;初免后第43天,利用无乳链球菌临床分离株进行乳头感染试验,同时设未免疫对照组.结果 SIP抗原、PGK抗原及全菌体裂解疫苗组初免后第56天抗体滴度均达到峰值,分别为1∶6 600、1∶6 400和1:4 100;而SIP+PGK抗原组在初免疫后第70天达到峰值,为1∶9 600;SIP+ PGK混合抗原的免疫保护率达83.3％,与SIP抗原、PGK抗原及全菌体裂解疫苗组(免疫保护率分别为33.3％、41.6％和58.3％)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 牛乳腺炎无乳链球菌SIP+PGK混合抗原的免疫保护率优于两种抗原的单独免疫效果,可免疫奶牛预防无乳链球菌性乳腺炎.
-
乙型脑炎灭活疫苗生产用毒种P3-Smb53株全基因序列分析
目的 对我国乙型脑炎灭活疫苗生产用毒种P3株鼠脑53代(P3-Smb53)进行全基因序列测定及分析.方法 提取P3-Smb53株病毒全基因组RNA,逆转录合成为cDNA,以其为模板分段进行PCR扩增,并测序;序列拼接后,利用NCB1的Blast程序和DNASTAR软件包中的MegAlign软件与GenBank中登录的5个基因型别的177株乙脑病毒全基因序列、551株乙脑病毒E蛋白序列进行比对.结果 P3-Smb53株病毒基因组全长10 976个核苷酸,与177株乙脑病毒株的全基因序列核苷酸同源性为79.6％～99.7％,氨基酸同源性为91.3％～99.7％;与GenBank中登录的551株乙脑病毒E蛋白氨基酸同源性为91.0％～99.8％,在E蛋白12个关键抗原性位点中,所有毒株均非常保守;与GenBank中登录的P3株全基因序列核苷酸同源性为99.4％,氨基酸同源性为99.5％.结论 乙型脑炎灭活疫苗生产用毒种P3-Smb53株虽然与不同基因型毒株间的氨基酸差异较大,但在关键抗原位点上高度一致,理论上能够抵抗目前国内外所有乙脑分离株的感染.
-
牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗的制备与检定
目的 制备牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,并进行检定.方法 从黑龙江某牛场发病牛病变的肺组织中分离溶血性曼氏杆菌,经各项鉴定合格后,制备种子液.确定甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的佳浓度,将佳浓度甲醛灭活24 h的牛溶血性曼氏杆菌菌液分别与弗氏佐剂和灭菌Al(OH)3佐剂混合乳化,制备弗氏佐剂灭活疫苗和铝佐剂灭活疫苗,对两种佐剂灭活疫苗进行无菌检验、物理性状检查、安全性观察和效力检验.结果 甲醛灭活牛溶血性曼氏杆菌的佳终浓度为0.3％.制备的两种佐剂疫苗在5％绵羊血琼脂平板上培养24 h,均无细菌生长;物理性状良好;疫苗注射昆明小鼠后,弗氏佐剂灭活疫苗组小鼠除在注射部位部分产生结节外,无其他副作用,而铝佐剂灭活疫苗组小鼠注射部位产生了脓肿和结块;弗氏佐剂灭活疫苗对经牛溶血性曼氏杆菌强毒菌液攻击的小鼠的保护效果较明显,保护率为90％;铝佐剂灭活疫苗产生的保护作用较弱,保护率为80％.结论 成功制备了弗氏佐剂和铝佐剂的牛溶血性曼氏杆菌灭活疫苗,其中弗氏佐剂灭活疫苗效果较好,可用于临床溶血性曼氏杆菌引起的呼吸道传染病的预防.
-
重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立
目的 建立注射用重组葡激酶(staphylokinase,SAK)-水蛭素(hirudin,HV)融合蛋白(SFH)的质控方法和质量标准.方法 采用纤维蛋白平板溶圈(fibrin agarose plate assay,FAPA)法测定SFH的溶栓比活性,纤维蛋白凝块溶解法测定SFH的抗凝比活性;还原型SDS-PAGE测定SFH的相对分子质量;非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定SFH的纯度;胰酶裂解后采用RP-HPLC法分析SFH的肽图;其他各项指标的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行.结果 用建立的方法对SFH原液和成品进行检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求.结论 建立的质控方法和质量标准能够保证产品安全、有效、质量可控,可用于注射用SFH产品的常规检定.
关键词： 重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(SFH) 质量控制 -
人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制
目的 研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制.方法 取对数生长期的CNE2细胞,用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100 μmol/L)处理不同时间(24、48、72 h),并设对照组(正常培养),采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;用适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72 h,采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、CyclinD1、P53的表达水平.结果 Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,60 μmol/L Rh2作用72 h为适作用浓度和时间.经60 μmol/L的Rh2作用48、72 h后,凋亡细胞数目增多,凋亡细胞体积变小,细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂,边集程度增大等现象.与对照组比较,经60 μmol/L的Rh2作用24、48、72 h,CNE2细胞的凋亡率逐渐增加(P＜0.01);G0/G1期细胞比例逐渐升高(P＜0.01),S期(P＜0.01)和G2/M期细胞比例逐渐下降;细胞的膜电位逐渐降低(P＜0.05);促凋亡蛋白Bax、激活型CasPase-3和P53蛋白表达上调(P＜0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P＜0.05).结论 人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/Gi期,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能是通过Caspase/CyclinD1信号通路实现的.
-
A群C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫效果
目的 观察A群C群脑膜炎球菌结合疫苗对6 ～ 23月龄、24 ～ 35月龄婴幼儿的免疫原性和免疫持久性.方法 选择广西壮族自治区崇左市400名婴幼儿,其中6 ～ 23月龄和24 ～ 35月龄两个年龄段各200名,分别接种A群C群脑膜炎球菌结合疫苗2剂和1剂.分别于免疫前、全程免疫后1个月、1年采血,血清体外杀菌试验(serum bactericidal assay,SBA)检测血清抗体水平,评价其免疫原性和免疫持久性.结果 免后1个月和1年,两个年龄组婴幼儿A群、C群抗体阳性率和GMT均较免疫前显著提高(P均＜0.001);免后1年,两个年龄组婴幼儿A群、C群抗体GMT低于免后1个月,但仍高于免前;免后1个月和1年,24 ～ 35月龄组婴幼儿A群、C群抗体GMT和增长倍数均但,仍高于免前高于6 ～ 23月龄组;两个年龄组龄婴幼儿易感者和非易感者A群、C群抗体阳性率和GMT均显著提高.结论 A群C群脑膜炎球菌结合疫苗对6～35月龄婴幼儿具有良好的免疫原性和免疫持久性.
-
西安市2004～2013年乙型肝炎流行病学特征分析
目的 分析西安市2004～ 2013年乙型肝炎(乙肝)的流行特征,评价乙肝流行状况,为今后乙肝防治工作提供参考依据.方法 应用SPSS 19.0和Excel 2003软件,对2004～2013年西安市乙肝疫情资料和乙肝疫苗补种数据进行捕述性流行病学分析.结果 2004～2013年西安市共上报乙肝病例71 332例,年均发病率为90.39/10万,2004年发病率高为272.25/10万,2011年发病率低为41.70/10万,以散发为主.2004～2008年以来,发病率呈逐年迅速下降趋势,平均每年下降幅度为47.43％;2009～2013年呈逐年缓慢下降趋势,平均每年下降幅度为5.72％.发病无明显地域聚集性,男性发病例数多于女性,且以农民发病多,为23 539例(33％),学生及工人和干部群体总职业发病人数百分比呈逐年下降趋势,而农民出现上升.发病主要集中在≥20岁年龄组,为62 564例(87.71％),各年龄组发病率基本呈逐年下降趋势,其中以10～ 19岁年龄组明显,下降幅度达93.73％.结论 乙肝疫苗接种率的提高,对降低20岁以下人群乙肝发病率起到了重要作用.
-
2013年河南省麻疹流行病学特征及消除麻疹措施的分析
目的 分析河南省2013年麻疹流行病学特征,总结全省消除麻疹工作进展状况.方法 根据来源于传染病监测信息报告管理系统和麻疹监测信息报告管理系统的麻疹发病数据以及来自各级疾控中心通过“中国免疫规划监测信息报告管理系统”上报的含麻疹成分疫苗常规接种率数据,对2013年河南麻疹的流行病学特征及采取的消除麻疹措施进行描述性流行病学分析.结果 2013年河南共报告麻疹确诊病例830例,报告发病率0.88/10万,超过2011 ～ 2012年同期;平顶山市、开封市和南阳市发病率高,均在1.5/10万以上;年龄发病率以0岁组高(43.28/10万);男女性病例性别比为1.88∶1;含麻疹成分疫苗接种剂次0剂次638例,占76.87％.2013年含麻疹成分疫苗接种率达99％以上,查漏补种率在98％以上.排除病例报告发病率2.64/10万,48 h完整调查率99.79％,血标本采集率99.75％,病原学标本采集率95.81％,实验室结果7d内及时报告率98.66％,均达到监测方案的要求.结论 降低麻疹发病、维持低发病率的关键在于提高疫苗接种率,保证高质量的监测水平.
-
丙型肝炎病毒核酸检测试剂国家参考品的制备
目的 制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核酸检测试剂国家参考品.方法 收集我国不同地区的献血员血浆,用核酸筛查试剂筛查HCV RNA情况,并通过PCR法对人细小病毒B19进行定性测定,筛选阳性参考品、阴性参考品和低检出限参考品.对HCV RNA阳性样本进行基因分型;3家实验室以WHO HCV RNA国际标准品为对照品,对参考品进行协同标定;并检测参考品的稳定性和适用性.结果 筛选出10份HCV阳性,而HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阳性参考品,其中有6份为1b型,1份为2a型,1份为3a型,1份为3b型,1份为6a型;10份HCV、HBV、HIV、B19均为阴性的样本作为阴性参考品;1份冻干的HCV RNA阳性,HBV、HIV、B19为阴性的样本作为低检出限参考品,基因型为1b型.3个实验室经协作标定,阴性参考品的结果均为阴性,阳性参考品的HCV RNA浓度在104～ 105 IU/ml之间,低检出限参考品的HCV RNA浓度为6.18×106 IU/ml.-20℃放置4周、4℃放置12d、室温放置7d以及反复冻融5次对参考品的HCV RNA含量无明显影响.参考品适用于目前国内市场上主要国产血液筛查和定量试剂的检测.结论 制备了HCV核酸检测试剂国家参考品,可用于HCV核酸诊断试剂的质量评价和控制.
-
甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品的研制
目的 研制甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品.方法 收集甲型流感病毒阳性样本、乙型流感病毒阳性样本和非流感病毒样本,采用流感病毒抗原检测试剂盒方法对样本进行验证.通过协同标定参考品,确定低检出限范围,3家单位进行适用性检测.反复冻融观察其稳定性.结果 所用的16株病毒经3家单位联合检测,特异性良好,均为甲型流感病毒,检测结果符合率为100％;反复冻融5次后,稳定性良好.结论 建立了第1套甲型流感病毒抗原检测试剂盒质控参考品及相应的质量标准.
-
人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品的制备
目的 制备人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品.方法 培养人脲原体两大生物群14个标准血清型菌株,培养液灭活后经颜色改变单位(color change unit,CCU)法与PCR相结合的方法进行定值,组成能覆盖脲原体所有表型及基因型的14份阳性参考品P1-P14(浓度为106 CCU/ml)及14份检测限参考品L1-L14(浓度为104CCU/ml);选择6份能排除脲原体核酸检测试剂盒非特异性或交叉反应的样品组成阴性参考品N1-N6;选择生物群1的微小脲原体(ureaplasma parvum,UP)1和UP14作为重复性参考品R1、R2(浓度分别为105和104 CCU/ml).用5家公司生产的脲原体核酸检测试剂盒对参考品进行验证,确定准确性、特异性、检测限、重复性、稀释线性的性能指标;并考察参考品在不同条件下(2～8℃放置7d,37 ℃放置3、7、12 d,-20℃及常温反复冻融5次)的稳定性.结果 支原体各培养液经CCU法测定,浓度均在106～107CCU/ml之间,以CCU法测定浓度为靶值,绝对偏差均在±0.5个数量级以内.4家公司生产的不同试剂盒检测参考品,在准确性、特异性、检测限及重复性上均符合要求;在稀释线性上,低稀释浓度为102 CCU/ml的样品只有2家可以检出,其他几家的稀释线性相关系数以103～ 106 4个浓度计算,r值均＞0.990 0;1家(RNA检测)检测R2的重复性,CV为5.5％.经不同条件处理的参考品的稳定性有轻微变化,但均处于设定的可接受范围内.结论 制备了人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品,该参考品可满足人脲原体核酸分型、定性及定量检测要求,经多家实验室进行验证,可用于国内大多数试剂盒的性能评价及临床实验室质量评价.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
