中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化
目的 克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性.方法 采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段.将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达.表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR及重叠延伸获得了约700 bp的目的 基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27 000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应.结论 成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础.
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PCNA与AgNOR检测在诊断子宫内膜病变中的应用
目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)与核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)在子宫内膜样腺癌早期诊断与预后中的作用.方法 采用免疫组化SP法及银染法,检测132份不同子宫内膜组织中PCNA的增殖指数与AgNOR颗粒数,并分析其与各临床病理指标的相关性以及二者之间的联系.结果 PCNA增殖指数与AgNOR颗粒数在正常子宫内膜(16%,2.51±1.97)、子宫内膜增殖症(40%,2.92±2.02)、子宫内膜非典型增生(63.16%,3.04±2.05)、子宫内膜样腺癌组织(74.60%,7.43±2.18)中依次呈升高趋势;且在子宫内膜样腺癌组织中,PCNA增殖指数显著高于子宫内膜增殖症及正常子宫内膜组织,AgNOR颗粒数显著高于良性病变组及正常子宫内膜,形态由单一型向弥散型转变.在子宫内膜样腺癌组织中,随着临床分期的进展、细胞分化程度的降低和淋巴结的转移,PCNA增殖指数与AgNOR颗粒数逐渐增高,差异有显著意义.在不同子宫内膜组织中,PCNA增殖指数与AgNOR颗粒数呈正相关.结论 PCNA增殖指数和AgNOR颗粒数与子宫内膜样腺癌的发生、发展密切相关.联合检测PCNA与AgNOR的定量值对早期诊断子宫内膜样腺癌、判断疾病预后有一定的临床价值.
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结核分枝杆菌复活促进因子E的原核表达及纯化
目的 构建结核分枝杆菌复活促进因子E(RpfE)的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化.方法 采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因,双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转化大肠杆菌Top10.阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达RpfE蛋白,并对表达蛋白进行鉴定和纯化.结果 双酶切鉴定所切下的片段大小与预期相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,在相对分子质量41 000处均可见特异性蛋白条带.经Ni2+-NTA金属螯合层析后,重组蛋白纯度可达90%以上.结论 已成功地克隆并构建了RpfE基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfEv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础.
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DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达
目的 利用塞姆利基森林病毒(SFV)复制子构建新型真核表达载体,并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定.方法 将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下,连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中,构建新型真核表达载体pCS,再将含HIV-1 MEGp24基因插入至pCS载体中,构建重组核酸疫苗pCS-MEGp24.用脂质体法将重组质粒转染入BHK-21细胞,进行表达产物的检测.结果 间接免疫荧光检测显示,重组质粒转染的BHK-21细胞能有效表达HIV-1 MEGp24,并与HIV阳性血清反应.结论 所构建的核酸疫苗可在BHK-21细胞系内进行表达,且MEGp24基因的表达蛋白具有特异性,为构建新型HIV-1中国流行株核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据.
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C3d分子多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用
目的 研究C3d分子对多表位DNA疫苗体液免疫应答的增强作用.方法 通过PCR方法合成多表位HME基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pcDNA3.1-3C3d,构建多表位DNA疫苗pcDNA3.1-HME和pcDNA3.1-HME-3C3d,经肌肉注射免疫小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平.结果 经免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,且pcDNA3.1-HME-3C3d免疫组小鼠的抗体水平明显高于pcDNA3.1-HME免疫组.结论 C3d可增强多表位DNA疫苗的体液免疫应答水平.
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SPF金黄仓鼠原代肾细胞的安全性
目的 验证SPF金黄仓鼠原代肾细胞的安全性.方法 采用ELISA法检测10种鼠源病毒血清抗体.通过细胞直接观察、细胞培养试验和血吸附病毒试验检测外源因子.并用直接XC蚀斑法、S+L检验法、电镜观察和双模板法以及联合培养与F-PERT法检测逆转录病毒及逆转录酶活性.结果 10种鼠源病毒抗体为阴性,未检出外源因子、逆转录病毒和逆转录酶.结论 SPF金黄仓鼠原代肾细胞作为乙型脑炎减毒活疫苗的生物原材料安全可靠.
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草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性
目的 大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3(Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3,r-LZP3)融合蛋白,并检测其免疫反应性.方法 经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达融合蛋白,表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后,用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性.结果 得到纯度达93%的r-LZP3蛋白.Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带.ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1:45 000以上.抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25%,平均每胎产仔数减少4～5只.结论 已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白,为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原.
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逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达
目的 包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体,并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响.方法 采用脂质体法,分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒,感染HepG2215细胞,ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用.结果 pMSCV-U6-PreS2-Rz和pM-SCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗原抑制率明显高于其他HDV核酶和对照组,分别达80%和85%,且高于脂质体转染介导的同种核酶对乙型肝炎病毒表面抗原表达的抑制率.结论 靶向性重组逆转录病毒能够携带HDV核酶进入HepG2215细胞,并且对乙型肝炎病毒的表达有较高的抑制作用,为抗病毒治疗的研究奠定了基础.
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人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性
目的 获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶.方法 通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达.表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化,获得的3C蛋白酶在4℃条件下,酶切融合蛋白IL-11,进行活性测定.结果 3C蛋白酶在大肠杆菌中获得了稳定、高效表达,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在.经过纯化、复性,纯度达90%以上,获得的3C蛋白酶能够有效切割含3C酶切位点的融合蛋白.结论 已成功开发了一种新型的基因工程工具酶.
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人HSP70与MAGE-4表位基因原核表达载体的构建及表达
目的 构建热休克蛋白70(HSP70)与黑色素瘤抗原4(MAGE-4)抗原表位基因的原核表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 在热应激条件下,用PCR法从结肠腺癌细胞获取HSP70基因.在线用蛋白质二级结构预测软件分析MAGE-4抗原表位,PCR获取MAGE-4抗原特征表位基因.将二者分别克隆入pGEM-T easy载体,酶切鉴定后,将HSP70基因亚克隆入pET28a原核表达载体,再将MAGE-4基因克隆入HSP70基因的下游,构建重组质粒pET28a-HSP70-MAGE-4.转化大肠杆菌,IPTG诱导表达并鉴定.结果 所构建的HSP70与MAGE-4抗原表位基因表达载体pET28a-HSP70-MAGE-4,经PCR及DNA测序结果表明构建正确.SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带.结论 已成功构建了人HSP70与MAGE-4抗原表位基因的原核表达载体,为疫苗研究提供了依据.
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梅毒螺旋体特异抗原TP0684的克隆和表达
目的 克隆并表达梅毒螺旋体外膜蛋白TP0684,为研制早期诊断试剂盒提供依据.方法 PCR法扩增TP0684编码基因.T-A克隆后构建表达质粒pET-22b(+)-TP0684,经酶切鉴定后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Western blot鉴定.结果 PCR法扩增出了1 212 bp的目的 片段,原核表达质粒pET-22b(+)-TP0684酶切鉴定正确,测序结果与GenBank上公布的该基因的CDS序列完全一致.转化E.coli BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率为25%,SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量约43 000,Western blot证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.结论 所表达的TP0684重组蛋白具有良好的免疫反应性,为进一步研究梅毒血清学诊断试剂奠定了基础.
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出血性大肠杆菌O157:H7感染和免疫的动物模型
出血性大肠杆菌O157:H7是危害严重的肠道致病菌.对于该菌感染和免疫动物模型的研究,受到该领域众多研究者的关注.本文对近年来国内外家兔、小鼠、猪和反刍动物等O157:H7感染和免疫动物模型的研究进行了综述.
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重组酵母疫苗载体技术的应用
治疗性疫苗在感染性疾病和肿瘤防治方面的应用已成为当前疫苗研究的热点.重组酵母疫苗载体技术为新型的治疗性疫苗技术,主要诱导抗原特异性T细胞免疫,从而增强保护性细胞免疫反应.利用基因工程改造的重组酵母疫苗进行恶性肿瘤和传染性疾病的治疗已成为疫苗研发的一个新方向.国内外全酵母疫苗临床前药效学、药理毒理研究和临床观察等已取得了一定进展.本文就重组酵母疫苗载体技术在疫苗研制领域的应用作一综述.
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重组人促红细胞生成素的HPLC与UPLC肽图谱分析
重组人促红细胞生成素(rHuEPO)是一种糖蛋白,相对分子质量约为30 000,目前多用于治疗贫血,其活性主要由蛋白部分决定,因此反映EPO一级结构的肽谱图通常是控制制品质量的重要标准.
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毕赤酵母表达乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化和免疫效果
目的 研究重组毕赤酵母表达的乙型肝炎病毒preS2S蛋白的纯化方法及免疫效果.方法 甲醇诱导含preS2S基因的重组毕赤酵母菌,采用蔗糖区带速率离心、Butyl-S-Sepharose 4FF疏水层析和DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析等方法,对表达产物进行纯化.纯化后蛋白经SDS-PAGE和Western blot方法鉴定,制备成疫苗,并进行效力试验.放射免疫法检测免疫小鼠血清抗体浓度,计算ED50和相对效力.ELISA法检测血清中的preS2S抗体.结果 纯化后的preS2(epi)S蛋白相对分子质量约为27 000,且能与特异性抗体结合.两批纯化蛋白制备的疫苗ED50分别为0.35和0.48 μg/ml,参比苗为0.52 μg/ml.2批疫苗的体外相对效力分别为1.5和1.1,均合格,血清抗体平均浓度为808和784 mIU/ml,参比苗为312 mIU/ml.2批疫苗免疫小鼠后均产生了preS2抗体.结论 该纯化方法实用有效,纯化后的preS2(epi)S蛋白比S蛋白具有更好的免疫原性.
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小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体试验条件的优化
目的 优化小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件.方法 用含吸附白喉类毒素的制品免疫NIH小鼠,35 d后眼眶采血,分离血清,对用小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的试验条件进行优化.结果 确定了小鼠-Vero细胞法测定白喉类毒素抗体的佳试验条件.结论 优化试验条件的小鼠-Vero细胞测定白喉类毒素抗体的方法,能客观准确地评价白喉类毒素免疫保护效力,且具有特异、灵敏、重复性好的特点.
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猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用
目的 建立猪细小病毒(PPV)PCR检测方法.方法 设计一对针对PPV的特异引物,经方阵滴定法确定PCR检测的佳条件,以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行斑点杂交鉴定.提取已知滴度的病毒培养物DNA为模板,稀释后进行PCR扩增,测定PCR方法的敏感性.采用此方法检测了180份猪各种组织样品的DNA及PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型.结果 仅PPV野毒株和北京分离株AV7909能够扩增出一条531 bp的片段,测序结果证明为PPV的特异片段.该方法所能检测的小病毒滴度值为0.398 TCID50,可以检测出PPV-猪组织混合感染PK-15细胞模型中0.500 TCID50的感染量.180份组织样品均未检出PPV.结论 该方法具有良好的特异性和敏感性.
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人用冻干无佐剂狂犬病疫苗的临床观察
目的 观察人用冻干无佐剂狂犬病疫苗(武生欣宁)接种人体后的临床反应和免疫效果.方法 40名健康者分别于0、3、7、14和28 d接种疫苗,观察接种者副反应,并于接种后采血,用快速荧光灶抑制试验检测血清中和抗体水平.结果 第1针和第2针接种后副反应率分别为2.5%和7.9%,后3针副反应率为0.免疫前抗体均为阴性,接种后第7天抗体阳转率为76%,第14天抗体水平GMT为9.42 IU/ml,阳转率100%,第28天抗体水平GMT为9.83 IU/ml,阳转率100%.结论 人用冻干无佐剂狂犬病疫苗反应轻微,效果良好.
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18C型肺炎球菌荚膜多糖的水解及水解片段的特性
目的 探索不同乙酸水解条件对18C型肺炎球菌多糖的水解效果.方法 选择60℃和92℃2种温度,以不同乙酸浓度和不同时间对多糖进行水解,用层析法检测相对分子质量,免疫双扩散法和ELISA抑制法分别检测活性.结果 0.2 mol/L乙酸92℃水解16 h,水解程度趋于稳定,相对分子质量可达57 000;1.0 mol/L乙酸60℃水解40 h,水解程度趋于稳定,相对分子质量可达235 000;用1.0 mol/L乙酸在不同温度下水解时,随着温度升高,水解程度增加,而在92℃不同乙酸浓度对水解程度几乎无影响.上述条件所得水解片段均保留了抗原性,但随着相对分子质量的降低,抗原性有所减弱.结论 在不同条件下,乙酸能将18C型肺炎球菌荚膜多糖水解为不同大小的片段,且未破坏抗原决定簇的基本结构.
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A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制
目的 研制A、C、W135、Y群脑膜炎球菌四价多糖疫苗,并采用新方法去除细菌内毒素.方法 经细菌培养后,分别提取A、C、W135和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖,纯化后,采用超速离心和层析技术相结合去除内毒素,按一定的配比制成四价多糖原液,加入保护剂,制成冻干疫苗,并进行检定.结果 所研制的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗各项指标均达到了质控标准,内毒素含量小于10 EU/μg,具有良好的安全性及有效性.结论 已成功制备了A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗.
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阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体的构建
目的 构建阿尔采默病治疗性疫苗原核表达载体.方法 选择Aβ42的B细胞优势表位的15个氨基酸基因序列,与趋化因子BCA-1基因连接,克隆至经突变改造的原核表达质粒pRSET/no His中,经酶切和DNA测序鉴定重组质粒.结果 酶切鉴定及DNA测序确定已将BCA-1/Aβ1-15克隆到表达载体pRSET/no His中.结论 已成功地构建了Aβ42亚单位疫苗的原核表达质粒.
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不同浓度抗菌素对血浆纤维蛋白原的影响
目的 研究4种常用抗菌素的浓度对血浆纤维蛋白原的影响.方法 采用凝固法,以加入抗菌素后血浆中纤维蛋白原的凝固时间为指标,观察不同浓度的头孢哌酮钠、氯霉素、乳酸环丙沙星和硫酸庆大霉素对血浆纤维蛋白原的影响.结果 随着氯霉素、硫酸庆大霉素和乳酸环丙沙星浓度的降低,血浆中纤维蛋白原的凝固时间延长;而随着头孢哌酮钠浓度的降低,凝固时间反而缩短.随着氯霉素、硫酸庆大霉素、乳酸环丙沙星浓度降低,血浆中纤维蛋白检出率升高;随着头孢哌酮钠浓度降低,血浆中纤维蛋白原检出率亦降低.结论 头孢哌酮钠、氯霉素、乳酸环丙沙星、硫酸庆大霉素等抗菌素及其浓度变化对血浆中纤维蛋白原的凝固时间和检出率有显著影响.
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重组人骨形态发生蛋白-7复合体对牙槽骨再生的影响
目的 观察基因重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)与明胶海绵的复合体对犬牙槽骨再生的影响.方法 犬拔牙创内植入rhBMP-7与明胶海绵的复合体,以自然愈合拔牙创为对照.于术后2、4、8周分别将犬处死,取拔牙创处牙槽骨标本,行X线和组织学切片检查,观察成骨情况及牙槽骨萎缩情况.结果 X线及组织学切片显示实验侧成骨速度及成骨质量明显优于对照侧.结论 rhBMP-7与明胶海绵复合体是一种可促进牙槽骨再生的新型生物复合材料.
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快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用
目的 建立检测呼吸道合胞病毒(RSV)的快速细胞培养法,并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断.方法 采用自制的抗RSV的单克隆抗体,经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV,并与病毒分离培养比较,再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较,探讨其临床实用性.结果 57份咽拭标本中,1份快速细胞培养法及直接涂片法检测均为阳性,阳性率1.8%,未分离到病毒.108份鼻咽分泌物中,快速细胞培养法检出21份阳性,阳性率19.4%.直接涂片法检测出14份阳性,阳性率13%,病毒分离培养法检出阳性12份,阳性率11%.快速细胞培养法与其他两种方法相比,阳性检出率差异有显著意义.自制试剂盒与进口试剂盒检出40份鼻咽分泌物标本,阳性率均为35%.结论 将直接涂片法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是对RSV感染进行早期诊断的实用方法.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
