梅花鹿免疫细胞活性因子的免疫调节效应

目的研究梅花鹿免疫细胞活性因子拮抗免疫抑制作用.方法制备环磷酰胺的体外细胞抑制模型及小鼠抑制模型.采用MTT比色法观察梅花鹿免疫细胞活性因子对环磷酰胺造成体外免疫抑制及小鼠抑制模型的调节效应.结果梅花鹿免疫细胞活性因子能显著地调节环磷酰胺造成的体外抑制,对小鼠抑制模型也具有显著的调节作用.结论梅花鹿免疫细胞活性因子是一种有效的免疫调节剂.

四种金属离子亲和层析纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的效果比较

目的选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件.方法在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白.结果包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异. 结论镍离子柱纯化效果佳.

超氧化物歧化酶标准样品的研制

目的研制超氧化物歧化酶标准样品.方法从新鲜牛血中提取,用DEAE-纤维素层析法进行纯化.结果制备的超氧化物歧化酶标准样品符合GB/T15000.1～15000.5-94标准样品制备的要求.结论可作为商检、卫生、科研及工厂等部门测定超氧化物歧化酶活性及测定方法的评定.

重组人干扰素联合抗病毒眼液治疗单疱角膜炎的疗效

目的探讨干扰素α1b型滴眼液联合无环鸟苷眼液(ACV)治疗单疱角膜炎的疗效.方法对102例单疱角膜炎患者随机分为联合用药组58例,用α1b型滴眼液联合无环鸟苷眼液治疗;ACV对照组44例.结果联合用药组治愈率92.3%,平均疗程12.5d,对照组治愈率79.2%,平均疗程19d,两组比较差异有显著意义.结论干扰素α1b型滴眼液联合无环鸟苷眼液疗效优于单用无环苷眼液.

抗人淋巴细胞免疫球蛋白制品中的热原处理工艺

目的研究热原不合格的抗人淋巴细胞免疫球蛋白(ALG)半成品再制的条件.方法将热原不合格的ALG半成品通过碱、酸以及DEAE Sephadex A-50处理,并检测其热原和质量的变化.结果经处理后,细菌内毒素的含量明显降低,用家兔法和鲎试剂法检测热原均合格,制品的免疫效价仍不低于1∶4000,并且其他各项主要指标也均达到2000年版<中国生物制品规程>的要求.结论这种处理方法能有效地除去ALG制品中的热原.

P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒对人膀胱癌细胞T24生长的影响

目的探讨P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒对人膀胱癌细胞T24增殖及凋亡的作用.方法将可在真核细胞表达P53蛋白的质粒pCEP4P53和表达反义c-myc基因的质粒pCEP4ASCMH以转染试剂FuGENE6为介导,同时转染到人膀胱癌细胞T24中,经MTT检测、软琼脂集落生长、琼脂糖电泳等方法分析实验结果.结果 P53基因质粒联合反义c-myc基因质粒较单一基因质粒能更显著地抑制癌细胞的增长,并能引起癌细胞的凋亡;FuGENE6有助于提高质粒DNA的转染效率.结论 pCEP4P53基因质粒和反义c-myc基因质粒pCEP4ASCMH的协同作用,大大地促进了肿瘤细胞的凋亡,为人膀胱癌的基因治疗提供了新途径.

单纯疱疹病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备单纯疱疹病毒的单克隆抗体.方法用纯化的单纯疱疹病毒(HSV)抗原免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得两株分泌抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗,检测该单抗的特异性.结果这两种单抗与其他相关的病毒抗原无交叉反应,Western blot表明单抗均识别单纯疱疹病毒中相对分子质量50000的蛋白.结论该单抗为单纯疱疹病毒的单克隆抗体.

重组人碱性成纤维细胞生长因子工程菌高密度发酵及表达产物的纯化

目的研究重组人碱性成纤维细胞生长因子工程菌高密度发酵和表达产物的纯化工艺.方法采用适基质浓度、pH、溶氧量、培养温度等发酵表达条件及产物提纯方法.结果菌体密度A600达40.8,表达量达160mg/L.提纯的bFGF回收率为40%,生物学活性(ED50)为0.21ng/mL,比活性达4.76×106U/mg,其纯度、分子量、残余DNA等各项检测结果均符合"重组DNA制品质量控制要点".结论为hbFGF工业化生产和临床应用提供了依据.

插入ISS的HBV DNA疫苗的构建及其免疫原性

目的探讨提高DNA疫苗免疫原性的有效途径.方法采用定向克隆和重组DNA技术分别构建在不同位置、含不同CpG数目的ISS的重组质粒载体pcDNA3.1+-S/CpG1、pcDNA3.1+-S/CpG2和pcDNA3.1+-S/CpG1+CpG2,通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,比较其细胞和体液免疫应答.结果通过PCR及测序证实已正确完整地插入ISS,成功构建了含ISS的重组质粒载体,pcDNA3.1+-S/CpG各组与pcDNA3.1+-S组的比较,细胞和体液免疫应答有增强的倾向.结论通过观察插入ISS对DNA疫苗免疫原性的影响,为进一步研究奠定基础.

采用一批细胞基质同时收获甲肝和麻疹病毒

目的采用一批细胞基质同时收获甲肝和麻疹病毒.方法应用甲肝L-A-1株和麻疹27D3株,间隔3周先后感染同一批人胚肺二倍体细胞2BS株,待两种病毒同时达到增殖高峰期时收获病毒液(以下简称HAM),并分别进行病毒滴定、特异性检查、猴体安全性和免疫效果试验.结果 HAM的甲肝和麻疹病毒滴度与同批单价甲肝和麻疹疫苗病毒滴度,差异均无显著意义.结论该方法用于制备甲肝-麻疹联合疫苗,操作简便,省时省力,并可显著降低疫苗生产成本.

麻疹疫苗免疫持久性研究--再免后22年追踪观察

目的研究麻疹疫苗初免后不同间隔时间再免疫的血清抗体持久性.方法采用血凝抑制试验方法检测329名观察对象血清中的麻疹抗体滴度.结果麻疹疫苗初免后,不同间隔时间再免疫,相同抗体水平者再免与不再免疫,血清抗体阴转率差异均无显著意义.再免是否成功与再免前的血清抗体水平密切相关,而且,再免成功与否对免疫持久性无显著影响.再免疫可使抗体阴转和低抗体水平者的滴度迅速提高.结论初免麻疹疫苗获得成功后,再免疫仅能暂时提高群体血清抗体滴度,但对延长抗体持久性无明显作用.

外源性p53基因增强卵巢癌细胞对化疗和放疗的敏感性

目的探讨外源性p53基因转染对人卵巢癌细胞系的化疗、放疗敏感性的影响.方法用分子克隆技术构建人野生型p53基因与真核细胞表达载体pcDNA3的重组体(pcDNA-p53),并用脂质体介导的转染技术,将其导入不表达p53的卵巢癌SKOV-3细胞中,经G418筛选,Northern blot及Western blot鉴定后,观察p53基因转染对顺铂或X线放射作用的SKOV-3细胞的集落形成的影响.结果成功地构建了人野生型p53基因与真核细胞表达载体的重组体.外源性p53基因在转染细胞中有效表达,增强了顺铂或X线放射对SKOV-3细胞集落形成的抑制作用.结论外源性p53基因能增强卵巢癌细胞对顺铂或放射的敏感性,p53基因治疗与化疗或放疗联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞.

破伤风毒素全基因片段PCR扩增、克隆和序列分析

目的对破伤风毒素全基因片段扩增、克隆和测序,以便有效利用.方法根据A、B、C 3个片段的基因序列,分别设计上游和下游引物,采用PCR扩增,并克隆3个片段,进行序列测定.结果所克隆的基因(AF389424)与GenBank中的基因序列比较变异较小,C片段基因与国内克隆株AF154828相同.结论为进一步研究、利用奠定基础.

6例溶血性输血反应的调查分析

目的防止溶血性输血反应的发生,确保输血安全.方法应用免疫血液学的检查方法.结果直接抗人球蛋白的试验:6例均呈阳性反应.其中抗IgG阳性者4例,抗体鉴定抗D抗体者2例;抗CD 1例;抗E 1例;免疫性抗A 1例;自身抗体同时存在同种弱抗S 1例.结论输血前对既往有多次输血史病人及经产妇进行血型血清学检查,以确保输血安全.

第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品协作标定

目的协作标定第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品.方法以WHO 97/592批人凝血因子Ⅶ浓制剂国际标准品为对照,采用一期法标定我国首批人凝血因子Ⅶ因家标准品,并将标准品分别置4℃、22℃、37℃保存5个月,用加速破坏试验进行稳定性考查.结果该批标准品效价为16.0IU/支,稳定性良好.其他项目均达到国家标准品要求.结论已成功研制第一批人凝血因子Ⅶ浓制剂国家标准品.

聚乙二醇修饰重组人IFNα2b体外理化性质的初步研究

目的分析聚乙二醇(PEG)化学修饰重组人IFNα2b(PEG-IFNα2b)的体外理化性质,并与修饰前IFNα2b进行比较.方法将IFNα2b与PEG-IFNα2b进行胰酶消化和56℃保温实验,不同时间取样测其抗病毒活性.IFNα2b的抗体与IFNα2b和PEG-IFNα2b做双相琼脂扩散.结果修饰后的IFNα2b的抗胰蛋白酶降解及抗热能力均明显优于未修饰的IFNα2b,抗原性亦明显下降.结论对PEG-IFNα2b的体外理化性质进行初步分析,为研究和开发长效干扰素提供理论依据.

转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验

目的探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应.方法采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞.将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞.转染成功的树突状细胞与外周血T淋巴细胞共培养,激活特异性CTL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-TdR掺入法观察CTLS对瘤细胞的特异性杀伤效应.结果树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血T细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义(P<0.01).结论体外诱导扩增的DC能够转染IgVH1核酸质粒,体外激活T淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应.

分泌型rhGM-CSF/IL-2融合蛋白表达载体的构建

目的将GM-CSF基因与IL-2基因通过一中间接头G-G-G-S-G-G-S-G连接到一起,并在E.coli中分泌表达具有更高GM-CSF和IL-2生物活性的融合蛋白分子.方法在引物设计中,通过选择密码子,在Linker的中前部设计了一个BamHI酶切位点,GM-CSF的下游引物和IL-2的上游引物均起始于该位点.然后通过PCR、酶切、连接等一系列分子克隆的方法,构建融合蛋白的克隆及表达载体.结果经EcoRI/SaII双酶切鉴定,克隆载体pUC19GM-CSF/L/IL-2及表达载体pBVGMCSF/L/IL-2中均插入了正确的外源片段.结论克隆及表达载体的成功构建,为进一步表达融合蛋白及活性研究打下了基础.

APS作为重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗佐剂的安全性及免疫效果

目的探讨黄芪多糖(APS)作为重组(CHO细胞)乙肝疫苗免疫佐剂的可行性.方法 APS与重组(CHO细胞)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)混合制成疫苗,进行了动物毒性试验、过敏试验及效力试验.结果该佐剂毒性轻微,无过敏反应,同一剂量组动物血清抗-HBs阳转率高于Al(OH)3对照组.结论 APS是一种很有潜力的疫苗佐剂.

重组人促红细胞生成素纯化工艺

目的建立适合大规模生产重组人促红细胞生成素(EPO)的纯化工艺.方法采用无血清培养分泌rEPO工程菌,收集培养上清,经离心、超滤、离心交换层析、分子筛层析纯化.结果所纯化的rEPO纯度达99%以上,比活性为1.3×105IU/mg,活性回收率为47%,相对分子质量为40 000,等电点为3.5.免疫印迹证明具有天然EPO的免疫原性.结论该纯化工艺简便,时程短,重复性好,适合于大规模生产.

新型乙型肝炎疫苗的研究进展

曾在国内外广泛用于乙型肝炎预防的血源性乙型肝炎疫苗(PDV)因血源供应有限及具有潜在危险性,已逐步被基因工程疫苗所取代.近年来,一些新型治疗性疫苗也相继用于慢性乙型肝炎的治疗研究.本文将对预防性及治疗性乙型肝炎疫苗的研究进展作一综述.

应用Vero细胞生产乙型脑炎减毒活疫苗

乙脑减毒活疫苗副反应小,注射针次少,但乙脑减毒活疫苗在生产过程中由于使用地鼠肾细胞,存在动物源性的各种污染和变化因素不易控制.所以我们尝试使用传代细胞制备乙脑活疫苗.方法是将乙脑SA14-14-2毒株接种于长成致密单层的Vero细胞瓶中,加入无血清维持液,35℃培养,于3、5、7和9d各收取病毒液,离心弃沉淀,上清以0.22μm滤器过滤.

应用鲎试剂法检测人用纯化狂犬病疫苗的内毒素

为了解人用狂犬病疫苗中内毒素的含量,我们应用鲎试剂法对纯化地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗进行了检测,现将结果报道如下.

我国麻疹疫苗免疫持久性研究取得重大进展

WHO生物制品标准化委员会第51次年会介绍

WHO生物制品标准化委员会(ECBS)于2001年11月26～30日在日内瓦召开,参加会议的有来自美国FDA的CBER、英国NIBSC、荷兰RIVM、墨西哥NIH、比利时、俄国、加拿大和中国等国家的标委会委员和专家,以及WHO生物制品安全和质量保障处的Griffiths博士、Wood博士、血液制品安全和质量保障处的Padilla博士等有关专家共33人,其他国际组织代表6人和WHO官员10人.中国药品生物制品检定所周海钧名誉所长和雷殿良副所长作为专家参加了本次会议.