中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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PPE68/Ipr1真核共表达质粒的构建及鉴定
目的 构建结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)的真核共表达质粒,并在小鼠巨噬细胞BAW264.7中表达.方法 将结核分枝杆菌PPE68基因和小鼠Ipr1基因分别亚克隆至含多启动子的共表达载体pBudCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud68-Ipr1,转染RAW264.7细胞,通过RT-PCR及Western blot 法检测PPE68和Ipr1基因的转录和表达.结果 重组表达质粒pBud68-Ipr1经PCR、双酶切及测序证实,插入的PPE68和Ipr1基因片段序列正确;质粒转染RAW264.7细胞后,PPE68和Ipr1基因进行了转录和表达,基因编码产物相对分子质量分别为37 000和50 000.结论 已成功构建了真核共表达质粒pBud68-Ipr1,并在RAW264.7细胞中获得表达,为PPE68/Ipr1重组BCG的构建及其免疫保护作用的进一步研究奠定了基础.
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稳定表达甲型流感病毒血凝素蛋白的哺乳动物细胞系的建立
目的 建立稳定表达甲型流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)蛋白的哺乳动物细胞系.方法 PCR扩增流感病毒(A/PR/8/34)全长HA基因,并将其克隆人真核表达载体pcDNA5/FRT(pDF)中,构建重组表达质粒pDF-HA,将其与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In-CHO细胞,通过体内同源重组使目的 基因整合至宿主细胞染色体上.采用Hygromycin B持续压力筛选重组细胞系CHO-HA,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测HA蛋白的表达.重组细胞连续培养10代后,采用PCR和IFA法检测细胞中HA的基因遗传和蛋白表达的稳定性.结果 重组表达质粒pDF-HA经双酶切及测序,证实构建正确;通过Hygromycin B抗性及IFA,共筛选出20株高表达HA蛋白的重组细胞株,Western blot结果进一步证实,HA蛋白在重组细胞中获得表达,并被切割成HA1和HA2蛋白;连续培养10代后,PCR与IFA方法分别检测到重组细胞HA基因和蛋白的表达.结论 已成功建立了稳定表达甲型流感病毒HA蛋白的哺乳动物细胞系,为针对HA蛋白和流感病毒的免疫学检测以及HA蛋白的功能研究提供了靶细胞.
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碳水化合物反应元件结合蛋白对L02细胞糖脂代谢的影响
目的 探讨碳水化合物反应元件结合蛋白(Carbohydrate response element binding protein,ChREBP)在高糖诱导肝细胞脂变中的作用.方法 分别以18和25 mmol/L葡萄糖培养L02细胞,以11 mmol/L葡萄糖培养L02细胞作为对照,甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色观察细胞脂变程度;免疫荧光观察细胞ChREBP的核转位情况;RT-PCR检测细胞肝型丙酮酸激酶(Liver pyruvate kinase,LPK)基因mRNA的表达水平,Western blot分析细胞脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,高糖可使L02细胞内甘油三酯和脂滴含量增加,刺激ChREBP核转位,上调LPK基因mRNA和FAS蛋白的表达水平.结论 葡萄糖可能通过其代谢产物经ChREBP-LPK-FAS途径诱导肝细胞脂肪变性.
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RNA干扰P115基因对胃癌细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的抑制作用
目的 构建高尔基体转运蛋白P115基因shRNA表达载体,探讨P115基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)表达的影响.方法 设计4对针对P115基因的shRNA序列,构建重组表达质粒,转染高表达P115的胃癌细胞株BGC-823.RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测P115及MIF的mRNA 和蛋白的表达.结果 4个P115基因shRNA质粒经单酶切和测序证实构建正确;转染BGC-823细胞后,均能抑制P115基因的表达,其中以pGPU6/GFP/Neo-shP115-2的沉默效果好,其对P115基因mRNA表达的抑制率为75.07%,对P115蛋白表达的抑制率为70.97%;转染pGPU6/GFP/Neo-shP115-2后,MIF基因的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05).结论 P115基因沉默后,BGC-823细胞MIF的表达明显降低,提示P115可能参与调节胃癌细胞MIF的表达,P115基因可作为研究胃癌发生发展分子机理的新靶点.
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人Rac1基因shRNA表达质粒的构建及鉴定
目的 构建人Rac1基因shRNA表达质粒,为提高卵巢癌放化疗的敏感性奠定基础.方法 根据GenBank中登录的人Rac1基因序列,应用shRNA设计软件设计并合成用于构建shRNA表达质粒的oligo DNA,构建shRNA重组质粒.将阳性Rac1基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染卵巢癌Skov3细胞,48h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒.结果 经限制性内切酶BamH I和Pst I酶切鉴定出阳性Rac1基因shRNA重组质粒,序列比对分析结果与理论序列完全一致.RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-524的Skov3细胞Rae1基因mRNA的转录水平下降.结论 已成功构建人Rac1基因shRNA表达质粒,并筛选出有效的干扰质粒pGPU6/GFP/Rac1-524.
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大鼠活化STAT蛋白抑制剂1基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定
目的 构建大鼠活化STAT蛋白抑制剂1(Protein inhibitor of activated STAT1,PIAS1)基因重组腺病毒质粒,并进行鉴定.方法 应用RT-PCR法从大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞株中扩增全长PIAS1基因,经T-A克隆后,亚克隆至穿梭质粒pDC316中,利用同源重组将腺病毒骨架质粒Nad5/F35和穿梭质粒pDC316-PIAS1共转染293细胞,获得重组腺病毒质粒Ad5/F35-PIAS1,经包装和扩增后,获得重组腺病毒.RT-PCR检测PIAS1基因的表达;荧光显微镜观察病毒感染情况;Western blot检测PIAS1蛋白的表达;并计算重组腺病毒的滴度.结果 从AR42J细胞中扩增出1956 bp的PIAS1基因片段,重组腺病毒质粒Ad5/F35*PIAS1经双酶切鉴定证明构建正确.RT-PCR及Western blot分析显示,PIAS1基因和蛋白已在293细胞中表达;荧光显微镜观察显示,重组腺病毒的感染率达90%;病毒滴度为4.45×1010 PFU/ml.结论 已成功构建了大鼠PIAS1基因重组腺病毒质粒,为进一步研究PIAS1基因在相关疾病中的作用及其临床应用奠定了基础.
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毕赤酵母X-33糖基化突变菌株的生理特性
目的 研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Ochlp)突变株(ochl mX-33)的生理特性,为ochl mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础.方法 绘制wX-33和ochl mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美蓝染色观察其形态变化,并检测细胞的存活率.结果 与wX-33株比较,ochl mx-33株生长缓慢,生物量减少;对温度、刚果红敏感性增强;存在细胞壁分裂缺陷;在不适温度下,细胞存活率降低.结论 糖基化突变可影响毕赤酵母X-33对温度、刚果红的敏感性,使其细胞壁层甘露糖含量降低,并可使ochl mX-33株的生理特性发生很大变化.
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PLCε调节肾细胞癌血管生成的作用机制
目的 探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在PLCε-NF-κB信号通路中影响肿瘤血管生成的作用机制.方法 将PLCε-shRNA表达质粒pGenesil-PLCε转染人肾透明细胞癌786-0细胞株,沉默磷脂酶Cε(Phospholipase C epsilon,PLCε)基因的表达,采用RT-PCR及Western blot检测转染细胞中PLCε、NF-κB和VEGF基因mRNA及蛋白水平表达的变化;应用NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082处理细胞后,采用MTT法检测BAY11-7082对786-0细胞增殖的抑制作用,RT-PCR和Western blot检测VEGF基因mRNA和蛋白水平表达的变化.结果 重组质粒pGenesil-PLCε可明显抑制PLCε基因mRNA和蛋白水平的表达,抑制率分别为71.43%和50.01%,并明显下调NF-κB和VEGF基因mRNA和蛋白水平的表达;BAY11-7082可明显抑制786-0细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性;应用BAY11-7082后,VEGF基因mRNA和蛋白的表达均被明显抑制.结论 PLCε可能通过抑制NF-κB基因的表达,从而抑制NF-κB依赖性基因VEGF的表达,进而影响肾细胞癌血管生成.
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58型人乳头瘤病毒L2蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体的制备
目的 原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavims,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体.方法 从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达,透析复性并亲和层析纯化重组蛋白,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定.结果 重组表达质粒pGEX-KGV-HPV58 L2经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量可占菌体总蛋白的15.5%;纯化的重组蛋白纯度可达95%;共获得10株抗HPV-58 L2的高效价单克隆抗体.结论 已成功原核表达、纯化了HPV-58 L2重组蛋白,并制备了单克隆抗体,为下一步HPV-58 L2蛋白抗原表位的研究以及相关预防性抗体药物和广谱重组疫苗的开发奠定了基础.
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重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin在毕赤酵母中的表达及其活性
目的 利用毕赤酵母表达系统表达BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白,并检测其生物学活性.方法 构建pPIC9K-BoNT-LH(N)-Elafin重组真核表达质粒,转化毕赤酵母GS115菌株,甲醇诱导表达,取上清,经阳离子交换层析纯化融合蛋白,并检测其反应原性、抗弹性蛋白酶活性及对SNARE蛋白复合体的裂解作用.结果 重组表达质粒pPIC9K-BONT-LH(N)-Elafin经双酶切及测序证实构建正确;表达的BoNT-LH(N)-Elafin融合蛋白相对分子质量约为110 000,纯化的融合蛋白纯度达92%,浓度为54 mg/L,反应原性良好,具有抗弹性蛋白酶活性及裂解SNARE蛋白复合体的作用.结论 已在毕赤酵母GS115中成功表达了重组融合蛋白BoNT-LH(N)-Elafin,该融合蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究其抑制气道黏液高分泌的机制奠定了基础.
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b型流感嗜血杆菌D蛋白的原核表达及纯化
目的 克隆b型流感嗜血杆菌(Haemophlilus influenza type b,Hib)D蛋白(hpd)基因,原核表达并纯化重组hpd蛋白,为下一步开发以D蛋白为基础的结合疫苗奠定基础.方法 从Hib CMCC株基因组DNA中PCR扩增hpd基因片段,克隆入载体pET-30a(+),构建重组原核表达质粒pET-30a-hpd,转化入感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经6mol/L尿素变性、DEAE阴离子交换柱纯化、透析复性后,采用Western blot法鉴定其反应原性.结果 重组表达质粒DET-30a-hpa经PCR及测序证明构建正确;表达的重组蛋白以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的40%;经一步过柱纯化可得到纯度达95%左右的重组蛋白;纯化的重组蛋白可与Hib免疫小鼠制备的抗血清发生特异性反应.结论 已成功克隆了Hib hpd基因,并在大肠杆菌中表达了重组hpd蛋白,为下一步开发以D蛋白为基础的结合疫苗奠定了基础.
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丙型肝炎病毒JFH1NS5A基因对HC-J4病毒复制和感染性的影响
目的 探讨丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)2a FL-J6JFH NS5A基因置换对1b型HC-J4复制和感染性的影响,为建立HCV 1b细胞模型奠定基础.方法 将JFH1 NS5A置换至HC-J4基因组内,构建嵌合全长基因组HC-J4/JFHNS5A.体外制备野生型HC-J4、嵌合体及FL-J6JFH的RNA转录体,脂质体介导转染Huh-7.5细胞,采用间接免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内的蛋白表达,HCV负链RNA特异性RT-PCR法和荧光定量PCR方法(FQ-PCR)检测基因复制情况.转染后不同时间收集转染细胞上清,感染naive Huh-7.5细胞,观察其感染性.结果 IFA未观察到野生型HC-J4和嵌合体转染细胞内HCV蛋白的表达,但在转染后18 d内的各个时间点,均检测到HCV负链RNA,表明嵌合体和野生型HC-J4在转染细胞内呈低水平复制.转染后第9天和12天,FQ-PCR检测表明,嵌合体转染细胞内HCV RNA水平明显高于野生型转染的细胞(P<0.05).不同时间点转染细胞上清感染naive Huh-7.5细胞后.IFA均未观察到表达HCV蛋白的阳性细胞.结论 JFH1 NS5A蛋白虽然在一定程度上可提高1b型HC-J4株在体外培养细胞中的复制能力,但还不足以产生能够检测到的感染性病毒颗粒.HCV 1b细胞模型的建立尚受其他因素的影响.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D胞外区片段在哺乳动物细胞中的表达及其免疫活性
目的 在哺乳动物细胞中表达单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type-2,HSV-2)糖蛋白D(Glycoprotein D,gD)胞外区片段,并分析其免疫活性.方法 化学合成HSV-2G株gD蛋白胞外区片断的基因序列gDt,以pCEP4作为表达载体,构建N-末端带His标签的重组表达质粒pCEP4-gDt,转染至HEK293细胞进行表达.表达的蛋白采用镍离子柱亲和层析纯化,ELISA法检测目的 蛋白的抗原性.以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗血清,间接ELISA法检测效价.结果 重组表达质粒经PCR、双酶切和DNA测序证实构建正确;表达产物经Western blot分析,在相对分子质量约46 000处可见目的 蛋白条带;纯化的重组蛋白浓度约为45μg/ml,经ELISA检测证实具有良好的抗原性,免疫小鼠5周后,血清中特异性抗体效价达5×103.结论 已在哺乳动物细胞中表达了HSV-2gD胞外区片段,其具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV基因重组亚单位疫苗的研制奠定了基础.
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YKL-40转染对前列腺癌LNcap细胞增殖及侵袭活性的影响
目的 探讨外源性YKL-40基因转染对前列腺癌LNcap细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性的影响.方法 RTPCR法检测前列腺癌细胞LNcap、PC-3、DU-145 YKL-40基因内源性表达情况;用pcDNA3.1-YKL-40质粒转染LNcap细胞,分别经MTT法、Boyden小室法及黏附试验检测转染前后细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性,并进行体外药敏试验.结果 仅DU-145细胞可内源性表达YKL-40基因;pcDNA3.1-YKL-40转染的LNcap细胞在第2～5天的A490值均显著高于对照组(P<0.05),其侵袭(75.11±4.40)和迁移穿膜细胞数(133.00±5.07)及黏附率(107.57%)均显著高于对照组(P<0.05),对5-FU、顺铂和依托泊苷的IC50值分别为(31.15±0.43)、(4.15±0.13)和(55.22±0.57)μmol/L,均显著高于对照组(P<0.05).结论 YKL-40基因能促进LNcap细胞增殖,提高细胞侵袭、迁移及黏附活性,并使其对5-FU、顺铂和依托泊苷具有一定的耐药性.
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硫酸乙酰肝素与氢氧化锌联合佐剂对HBsAg诱导小鼠免疫应答的影响
目的 探讨硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)与氢氧化锌联合佐剂对HBsAg诱导的小鼠体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法 将HS与氢氧化锌按不同剂量组合,与HBsAg(2μg)混合,免疫ICR小鼠,并设阴性对照、抗原对照、铝佐剂对照、单一HS及单一氢氧化锌对照组,共23组.分别于末次免疫后4、8、12、16、20、24周采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg抗体水平;选择体液免疫效果佳的组免疫BALB/c小鼠,于免疫后8周,采用乳酸脱氢酶法检测细胞杀伤活性.结果 阴性对照组在各时间点均未检测到IgG抗体,其余各组的抗体滴度均在末次免疫后第8周达峰值,随着时间的延长,抗体水平呈下降趋势.其中第23组(100μgHS+1.0mg氢氧化锌,免疫2针)抗体水平高,且持续时间较长,末次免疫后8周,其对HBsAg的体液免疫增强效应显著优于铝佐剂和HS单一佐剂(P<0.05),优于氢氧化锌单一佐剂,但差异无统计学意义(P>0.05).联合佐剂能诱导产生特异性的CTL细胞免疫效应.结论 HS和氢氧化锌联合佐剂既能有效增强HBsAg诱导的小鼠特异性体液免疫应答,又能显著诱导CTL细胞免疫应答.
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IL-27p28基因多态性与中国朝鲜族人群哮喘的相关性
目的 探讨IL-27p28基因启动子区g.-964 T>C、第2外显子区g.2905T>G和第4外显子区g.4730T>C 3个位点的多态性与中国朝鲜族人群哮喘的相关性.方法 选取32例中国朝鲜族哮喘患者(病例组)和93名中国朝鲜族正常人(对照组)作为观察对象,采用PCR法扩增IL-27p28基因g.-964 T>C、g.2905T>G和g.4730T>C位点基因片段,单碱基延伸法进行基因分型,分析病例组和对照组的基因型频率及等位基因频率.结果 病例组和对照组的基因型分布均符合Hardyweinberg平衡定律(P>0.05).g.-964位点的基因型频率及等位基因频率在病例组和对照组之间的分布差异有统计学意义(P<0.001);g.2905和g.4730位点的基因频率及等位基凼频率在病例组和对照组之间的分布差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-27p28基因多态位点g.-964 T>C可能与朝鲜族人群哮喘易感性相关,g.2905T>G和g.4730T>C多态性与朝鲜族人群哮喘未发现有相关性.
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口服轮状病毒减毒活疫苗Rotarix的现状及研究进展
轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内导致婴幼儿重症腹泻的重要病原.由于当前尚无治疗RV感染的特效药物,因此,开发安全、有效的疫苗具有重要意义.G1型RV流行范围较广,本文主要对目前国内外上市的3种RV疫苗中的GIP[8]型Rotarix疫苗的情况作一综述.
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寄生虫低温保存的研究现状
传统的寄生虫保存方法有体外培养和动物转种,这些方法操作繁琐,成本较高,而且易发生遗传漂变、人为差错或混淆等问题.低温保存寄生虫可克服传统保存方法的弊端,并可保持寄生虫原有的生物学特性.本文就低温保存寄生虫的种类及主要影响因素作一综述,为寄生虫低温保存的研究提供参考.
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治疗性疫苗的研究进展
治疗性疫苗不仅具有预防性疫苗的间接靶向特异性和长效性等特点,而且还具有治疗性药物的疗效,尤其对一些目前尚无特效治疗药物的传染性疾病及肿瘤等可以起到治疗作用.近年来,治疗性疫苗的研究已取得了全面的进展.本文就治疗性疫苗的意义、作用机理及研究进展作一综述.
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猪肺炎支原体环介导等温扩增检测方法的建立
目的 建立检测猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.方法 根据GenBank中登录的猪肺炎支原体的核苷酸序列,设计4条特异性引物,用外引物进行PCR反应,对内外引物浓度、dNTP+和MgSO4浓度及Bst DNA聚合酶用量等进行优化,建立猪肺炎支原体LAMP检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证.结果 内外引物浓度分别为0.5和0.20 pmol/μl,dNTP+浓度为0.5 mmol/L,MgSO4浓度为3.75 mmol/L,Bst DNA聚合酶用量为8.0和9.6 U时,LAMP反应效果较好;应用该方法检测多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、肺炎双球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和链球菌均呈阴性;当猪肺炎支原体的拷贝数低于3时,检测不到该病原体.结论 已建立了猪肺炎支原体LAMP检测方法,该方法特异性较好,敏感性较高.
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磺胺二甲嘧啶完全抗原的制备及鉴定
目的 制备磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine,SM2)完全抗原,并进行鉴定.方法 采用重氮化偶联法制备SM2免疫抗原(SM2BSA)和检测抗原(SM2OVA),定性和定量分析偶联后的完全抗原.并制备SM2单抗.结果 经1%琼脂糖凝胶电泳和10%SDS-PAGE分析表明,完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA偶联成功;SM2与载体蛋白BSA和OVA的分子结合比分别为23:1和17:1;SM2-BSA和SM2-OVA的蛋白浓度分别为3.24和2.29 mg/ml;完全抗原SM2-BSA能刺激小鼠产生高效、特异的抗SM2抗体;SM2单抗与OVA和BSA无交叉反应.结论 已成功制备了完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA,为下一步建立灵敏度更高、特异性更强、操作更简便的免疫学检测方法奠定了基础.
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高效价麻疹抗血清的制备及检定
目的 制备高效价麻疹抗血清,用于疫苗检定中病毒鉴别、支原体检测、麻腮二联和麻腮风三联疫苗的联合滴定试验.方法 将麻疹病毒L4株于Vero细胞中传代培养,获得高滴度病毒原液,制备免疫抗原,分别经腹腔注射法、耳静脉注射法和背部皮下多点注射法免疫家兔,制备抗血清,并按规程要求对抗血清进行检定.结果 采用腹腔注射法、耳静脉注射法和背部皮下多点注射法免疫家兔所制备的抗血清的中和效价分别为1:960、1:2 560和1:3 840,经检定,3种方法制备的抗血清均达到疫苗检定的使用要求.结论 背部皮下多点注射法制备的麻疹抗血清效价高,且操作简单,可作为制备高效价麻疹抗血清的佳方案.
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狂犬病病毒核蛋白的原核表达及其免疫原性
目的 原核表达、纯化狂犬病病毒(Rabies virus,RV)核蛋白(Nucleoprotein,NP),并检测其免疫原性.方法 RTPCR扩增RV CVS-11株NP全长基因序列,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组原核表达质粒pET-30a-N,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经Ni2+柱亲和层析纯化后,进行Western blot分析,并分别以A1(OH)3和CpG1826作为佐剂经腹腔免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠的血清特异性抗体水平.结果 重组原核表达质粒pET-30a-N经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约51800,表达量约占菌体总蛋白的35%,主要以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,可与抗RV小鼠血清特异性结合,分别以A1(OH)3和CpG1826作为佐剂免疫小鼠的血清特异性抗体滴度对数的GMT值(3.81±4-0.22和3.68 4±0.20)明显高于阴性对照组(1.25±0.22),且差异均有统计学意义(P<0.01).结论 已成功表达并纯化了RV NP,其免疫原性良好,为进一步研究其功能奠定了基础.
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三七总皂甙对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(Pulmonary artery smooth muscle cell,PASMC)增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将PASMC分为5组:对照组(不给药)、bFGF组(8 ku/L)、bFGF+低、中、高剂量PNS组(bFGF 8 ku/L+300、450、600 μg/L PNS),给药24 h后,采用MTT法检测PASMC的增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blot检测细胞中胱天蛋白酶-3(caspase-3)蛋白的表达.结果 PNS干预可抑制PASMC 增殖,阻遏bFGF诱导的PASMC进入S期,提高滞留在G0/G1期细胞的比例,并使PASMC凋亡率和caspase-3蛋白表达上调,PASMC凋亡率达(18.70%±0.33%)～(28.40%±0.79%),是bFGF诱导组的10～14倍.结论 PNS能显著抑制bFGF诱导的PASMC增殖,促进其凋亡,其机制可能与其调控细胞周期转换、激活caspase-3蛋白的表达有关.
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可溶性白细胞介素-5与白细胞介素-13受体联合应用对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响
目的 观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptor α,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100 μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代.末次激发24h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平.结果 与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,8IL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01).与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻.与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01).结论 sIL-5Rα与sIL广13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症.
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一犬咬伤15人接种狂犬病疫苗的效果观察
2009年10月,北京市昌平区某镇发生一起1只藏獒咬伤多人事件,共有17人致伤,其中15人于全程接种狂犬病疫苗后采集静脉血,检测抗狂犬病病毒中和抗体,现将结果报道如下.
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重庆地区儿童中人冠状病毒流行情况分析
目的 了解重庆地区住院患儿所患急性呼吸道感染与人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43和HCoV-229E的相关性,并分析这4种HCoV的流行特征.方法 采集2007年4月～2009年3月于重庆医科大学附属儿童医院因急性呼吸道感染住院的996份患儿的鼻咽部分泌物,经RT-PCR检测排除呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)和人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)阳性标本460份,采用RT-PCR法对536份RSV和hMPV阴性标本进行HCoV检测.结果 536份标本中共检出HCoV阳性10份,阳性率为1.86%,其中HCoV-HKU1 3份(0.56%),HCoV-NL63 4份(0.74%),HCoV-OC43 3份(0.56%),HCoV-229E 0份;10例患儿中男性9例,女性1例,年龄分布为0～5个月6例(60%),6～11个月2例(20%),12～23个月1例(10%),2～3岁1例(10%);3岁以上的未发现.HCoV感染呈全年散发,其中HCoV-HKU1感染集中在冬春季,HCoV-NL63和HCoV-OC43感染集中在夏秋季.HCoV感染的临床症状表现为发热、咳嗽、痰、喘息、呕吐和腹泻;临床诊断为支气管肺炎4例,间质性肺炎3例,迁延性肺炎1例,毛细支气管炎1例、急性喉气管支气管炎1例,其中有6例合并症状性腹泻.结论 重庆地区因急性呼吸道感染住院的患儿中HCoV感染率较低,HCoV可引起下呼吸道感染和消化道感染.
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慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA的相关性
目的 分析慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA水平之间的相关性.方法 对2007年11月～2009年10月在我院感染科住院的788例慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者(本研究中将HBV-DNA滴度大于1×103拷贝/ml定义为HBV-DNA阳性)的临床资料进行回顾性分析.用Spearman秩相关分析及多重线性回归分析患者年龄及血脂与HBV-DNA的相关性.结果 Spearman秩相关分析显示,在慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者中,HBV-DNA水平与患者年龄呈负相关,与血脂中甘油三酯(TG)、总胆同醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及载脂蛋白A-I(ApoA-I)呈正相关;多重线性回归分析显示,HBV-DNA水平与患者年龄、血脂中ApoA-I存在线性依存关系.结论 慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者的HBV-DNA水平与其年龄呈负相关,与ApoA-I呈正相关.
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益赛普治疗类风湿关节炎伴冠心病的临床疗效
目的 观察TNFα拮抗剂益赛普治疗类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)伴冠心病的临床疗效.方法 选取接受慢作用药物治疗,并在整个观察期内保持不变)和60例确诊为活动期RA并发冠心病患者,随机分为慢作用药物组(30例,益赛普组(30例,在原慢作用药物治疗基础上皮下注射益赛普,每次25 mg,每周2次,持续3个月).分别于治疗前及治疗12个月后采血,应用全自动荧光偏振免疫分析法测定血清同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)水平;评价临床疗效;经胸超声心动图测定冠状动脉血流储备(Coronary flow reserve,CFR);应用高分辨率B超对所有观察对象的肱动脉进行扫查,测定肱动脉内皮依赖性血管舒张率(Flow-mediated dilation rate,FMD);并记录12个月内发生的心血管疾病、不良反应以及肝肾功能的变化.结果 益赛普组治疗后与治疗前比较,患者的血清HCY水平显著下降(P<0.05),CFR和FMD显著升高(P<0.05);慢作用药物组治疗后与治疗前比较,HCY、CFR和FMD均有所下降,但差异无统计学意义(P>0.05);与慢作用药物组比较,经益赛普治疗后,患者血清HCY水平显著下降(P<0.05),CFR和FMD显著升高(P<0.05);益赛普组临床症状缓解有效率明显高于慢作用药物组(P<0.05);12个月内,益赛普组主要心血管疾病发生率与慢作用药物组比较明显降低(P<0.05);两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05).结论 益赛普可以明显缓解RA患者的临床症状,延缓冠心病的进展,减少心血管危险疾病的发生.
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脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及多克隆抗体的制备
目的 构建人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)基因重组原核表达质粒,表达重组蛋白,制备人LP-PLA2多克隆抗体.方法 从分化的THP-1细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增LP-PLA2全长编码基因,插入原核表达载体pCold TF中,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG低温(15℃)诱导表达,表达的重组蛋白经Ni-Sepharose 6FF亲和层析及DEAE-Sephadex离子交换层析后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定抗血清效价,Western blot法检测多抗的反应原性.结果 重组表达质粒pCold TF-LP-PLA2经双酶切及测序证实构建正确;TF-LP-PLA2获得可溶性表达,相对分子质量约为93 000;纯化的重组蛋白纯度可达90%,可与市售兔抗人LP-PLA2抗体反应;制备的抗血清效价达1:5.12×106以上,反应原性良好.结论 已成功原核表达了重组LP-PLA2蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为下一步制备单克隆抗体及建立LP-PLA2免疫检测方法奠定了基础.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
