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毕赤酵母X-33文献资料
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毕赤酵母X-33糖基化突变菌株的生理特性
目的 研究毕赤酵母X-33野生型菌株(wX-33)和X-33α-1,6甘露糖基转移酶(Ochlp)突变株(ochl mX-33)的生理特性,为ochl mX-33株进一步糖基化的研究奠定基础.方法 绘制wX-33和ochl mX-33菌株的生长曲线,进行温度敏感性及刚果红敏感性试验,美蓝染色观察其形态变化,并检测细胞的存活率.结果 与wX-33株比较,ochl mx-33株生长缓慢,生物量减少;对温度、刚果红敏感性增强;存在细胞壁分裂缺陷;在不适温度下,细胞存活率降低.结论 糖基化突变可影响毕赤酵母X-33对温度、刚果红的敏感性,使其细胞壁层甘露糖含量降低,并可使ochl mX-33株的生理特性发生很大变化.
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BPI23-haFGF融合蛋白在毕赤酵母X-33中的分泌表达及活性鉴定
将BPI23-haFGF融合基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,构建出含BPI23-haFGF融合基因的重组质粒pPICZαA-BPI23-haFGF.通过电击将经Sac Ⅰ酶切线性化的pPICZαA-BPI23-haFGF质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并通过抗性与表型筛选、PCR鉴定获得高效的工程菌.收集表达上清进行SDS-PAGE 和Western blot分析,结果表明,在43 KD有与预期大小相符的条带,占上清总蛋白的50%以上.亲和层析纯化后的融合蛋白BPI23-haFGF纯度约90%,体外活性实验结果,纯化产物具有杀死革兰氏阴性菌及促进NIH3T3细胞增殖的双重功能.
关键词： BPI23-haFGF融合基因 毕赤酵母X-33 分泌表达 活性鉴定
