丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性.方法 用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切含有HCV C区、E2区模拟表位和NS3～NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达.以100 μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果.结果 所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达.该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组.结论 已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答.

腺病毒5型E1A基因对乳腺癌细胞化疗药敏感性的影响

目的 探讨E1A基因对乳腺癌细胞化疗药敏感性的影响.方法 双酶切质粒pUC119-E1A,获得E1A基因,连接入pEGFP-C1载体,构建真核表达质粒pEGFP-E1A.经脂质体介导转染人乳腺癌细胞系SK-BR-3细胞株,经筛选获得稳定表达E1A基因的转染细胞.RT-PCR检测E1A基因的mRNA转录水平.体外观察各组细胞软琼脂集落及对抗肿瘤药物顺铂的敏感性.结果 RT-PCR结果显示,只有重组质粒pEGFP-E1A转染的细胞在约380 bp处有一特异性扩增条带,与未转染组和空载体转染组相比,转染E1A基因后,SK-BR-3肿瘤细胞在软琼脂中形成的集落明显变小,集落形成率明显降低,对顺铂的敏感性明显提高.结论 已成功构建E1A基因表达质粒,并稳定表达了E1A基因,表达产物明显抑制乳腺癌细胞的生长,有效提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,为其临床应用提供了理论和实验依据.

狂犬病病毒糖蛋白真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 构建狂犬病病毒糖蛋白基因的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达.方法 培养狂犬病病毒, 提取负链RNA,采用RT-PCR的方法扩增糖蛋白基因,并将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(A)上,通过脂质体介导的方法,转染COS-7细胞,用ELISA及间接免疫荧光法检测狂犬病病毒糖蛋白在COS-7细胞中的瞬时表达.结果 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(A)/G,转染COS-7细胞后,在其培养上清中未检测到狂犬病病毒糖蛋白的表达.间接免疫荧光试验表明,pcDNA3.1(A)/G能有效地表达狂犬病病毒糖蛋白于转染的COS-7细胞膜上.结论 真核细胞表达载体pcDNA3.1(A)/G能够在COS-7细胞中表达狂犬病病毒糖蛋白,为开发狂犬病病毒糖蛋白基因工程疫苗奠定了基础.

重组hTRAIL腺病毒载体的构建及鉴定

目的 构建表达hTRAIL基因的重组腺病毒载体.方法 以重组质粒pThioHisA-TRAIL中提取的TRAIL基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-CMV-TRAIL,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-TRAIL,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长TRAIL基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-TRAIL).氯化铯密度梯度离心法纯化Ad-TRAIL病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测TRAIL基因在293细胞中的转录.以Ad-TRAIL转染YTMLC细胞,采用免疫荧光法和流式细胞术检测TRAIL基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒颗粒数为2.77×1012VP/ml,感染性滴度为109.5(3.2×109)CCID50/ml.经RT-PCR扩增出约843bp的基因片段,与目的片段大小一致.流式细胞术和免疫荧光法均检测到TRAIL在YTMLC细胞中的表达,表达产物主要存在于细胞质中.结论 已成功构建了表达hTRAIL重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.

传染性法氏囊病病毒疫苗株B87基因组A节段的克隆和序列分析

目的 获得传染性法氏囊病病毒疫苗株B87 A节段全长cDNA,并对其进行序列分析.方法 使用蛋白酶K、酚/氯仿抽提法提取病毒基因组,用LiCl分级沉淀方法纯化病毒基因组dsRNA,通过RT-PCR一步扩增获得A节段的全长cDNA.将其克隆至pGEM-T载体上,测序,并用DNAStar软件进行序列分析.结果 测序结果表明,克隆的B87株A节段全长为3 260 bp,与Gt株的同源性高为99.5%,与其他毒株的核苷酸同源性介于95.2%～99.4%之间,与Ⅱ型毒株OH仅为84.0%.结论 通过对20株IBDV编码氨基酸序列的分析、比较,推测A片段上7个独特的氨基酸位点可能与毒力相关.

细胞培养用牛血清现状与进展

牛血清用于细胞培养已超过50年,虽然其污染外源因子的风险不能完全排除,但是至今许多贴壁细胞系和原代细胞还需采用添加牛血清的培养基进行大规模培养.本文综述了牛血清的基本营养成分、生长因子和其他功能性成分以及牛血清中常见的外源病毒及应检测的病毒种类,并比较屠宰法和供体牛法获取血清的优缺点.

含前S基因的重组乙型肝炎疫苗研究进展

含乙型肝炎病毒前S抗原成分的新型重组乙肝疫苗具有更强的免疫原性,可使乙型肝炎疫苗无应答者产生抗体.本文介绍了前S蛋白的分子生物学活性,并对含前S基因的乙型肝炎疫苗的研究进展作一综述.

水痘-带状疱疹免疫球蛋白研究进展

水痘-带状疱疹免疫球蛋白来自于含有高滴度抗水痘-带状疱疹病毒抗体的健康献血员血浆,在暴露于危险因素后的特定时间段内应用,可以有效避免罹患水痘或使水痘/带状疱疹症状减轻,特别是对免疫低下或免疫缺陷的人群具有重要意义.本文就水痘-带状疱疹免疫球蛋白的生产、应用、检测方法以及研究新方向等进行了简要综述.

在无血清无蛋白培养基中培养Vero细胞

目的 开发在无血清无蛋白培养基(PF)中培养Vero细胞的技术.方法 在DMEM/F12培养基中添加酵母提取物和大豆水解物,配制成无血清无蛋白培养基.使用配制好的无血清无蛋白培养基,分别在玻璃、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和聚苯乙烯(PS-TC)培养面上培养Vero细胞,观察细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线,以含血清培养基BM为对照.结果 与BM培养基比较,在玻璃培养面上,PF培养基不支持Vero细胞生长和分裂;在PVB培养面上,PF培养基支持Vero细胞生长,但不支持分裂;在PS-TC培养面上,PF培养基支持Vero细胞的生长和分裂.结论 在PS-TC培养面上,PF培养基适合培养Vero细胞.

抗氧化低密度脂蛋白单克隆抗体制备方法的研究

目的 研究抗氧化低密度脂蛋白(OxLDL)单克隆抗体的制备方法.方法 采用小鼠体内法制备抗OxLDL单克隆抗体时,腹水中抗体经SuperoseTM 6 HR10/30凝胶柱进行一步纯化;采用细胞培养法时,分别对杂交瘤细胞生长特性和抗体表达条件进行研究,细胞培养上清中抗体经Streamline SPXL阳离子扩张柱床层析和QXL阴离子交换层析纯化.结果 小鼠体内法制备的抗体纯度为95.7%,回收率为65.4%;细胞培养上清中得到的抗体纯度为94.7%,回收率为47.8%.结论 已建立了2种抗OxLDL单克隆抗体的制备方法,为OxLDL酶联免疫检测试剂盒的研制奠定了基础.

流感疫苗中裂解剂TritonN-101残余量的快速检测方法

目的 快速、准确地检测流感病毒裂解疫苗和亚单位疫苗中裂解剂Triton N-101的残余量.方法 采用紫外吸收与Lowry蛋白测定相结合的方法.首先绘制裂解剂和蛋白标准曲线,将Lowry法测得的样品蛋白质含量代入蛋白标准曲线的回归方程中,得出样品中蛋白对应的紫外吸收值,再用蛋白样品测得紫外吸收值减去蛋白吸收值的差,代入裂解剂标准曲线,得出裂解剂浓度,并对该法进行精密度和准确度验证.结果 经精密度和准确度的验证,该法符合实验要求.结论 所采用的方法快速、简便,适用于疫苗生产过程中裂解剂Triton N-101残余量的检测.

SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应

目的 评价SV40灭活疫苗免疫恒河猴后的抗体反应.方法 用SV40灭活疫苗经肌肉注射免疫0.5～1周岁的恒河猴,分别于第1次和第2次免疫后2周,检测血清中和抗体效价,免疫18个月后检测SV40基因组成分.结果 免疫的12只恒河猴在第1次免疫后2周,血清抗体全部阳转,平均抗体滴度为1:16,第2次免疫2周后血清抗体滴度明显增长,平均达到1:64～1:128.用PCR方法未检测到SV40基因组成分.结论 SV40灭活疫苗可以有效诱导恒河猴产生特异性抗体反应.

H5N1人用禽流感疫苗免疫原性检测方法的建立

目的 确定人用禽流感疫苗免疫原性检测方法.方法 用禽流感病毒R1203株制备疫苗,以不同剂量免疫家兔,检测血清中的血凝抑制抗体和中和抗体,并进行交叉血凝抑制试验、交叉单向免疫扩散试验和交叉中和试验.结果 R1203株疫苗接种家兔1针后14 d,中和抗体和血抑抗体滴度均较低;第2针后14 d均明显升高.血抑抗体量-效反应不明显,而中和抗体量-效反应明显.交叉血凝抑制试验显示,异型之间普遍有交叉反应,滴度大部分不低于1:40.单向免疫扩散试验显示异型之间无交叉反应.禽流感疫苗抗血清不能中和人流感病毒,但能中和同型病毒(R1194),滴度可达1:240.结论 中和抗体能正确反映疫苗的免疫原性;检测中和抗体的方法可用于禽流感疫苗的效力试验.

冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的 观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下的稳定性.方法 将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2～8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性.结果 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2～8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准.结论 冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2～8℃条件下,其质量稳定.

重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗免疫原性比较

目的 比较重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗的免疫原性.方法 用载体疫苗和DNA疫苗分别免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISPOT法检测小鼠的体液免疫和细胞免疫水平.结果 两种疫苗的血清抗体水平分别为135和104 mIU/ml,百万淋巴细胞中SFC数目分别为550和314,载体疫苗均优于DNA疫苗.结论 重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗较DNA疫苗具有更高的免疫原性.

梅花鹿鹿茸活性多肽的提取及免疫功效的初步研究

目的 提取并分离纯化不同加工方法处理的梅花鹿鹿茸活性多肽(PAP),并对其免疫功效进行初步研究.方法 以不同工艺处理的鹿茸为原料,应用分子排阻层析和离子交换层析提取鹿茸活性多肽,通过淋巴细胞增殖、细胞因子产生等试验,检测PAP对淋巴细胞的免疫功效.结果 所提取的梅花鹿鹿茸活性多肽蛋白含量分别为:冻干茸9.20 mg/ml;冷冻鲜茸1.30 mg/ml;热炸茸1.10 mg/ml.鹿茸多肽可以促进小鼠T、B淋巴细胞的增殖,活化巨噬细胞分泌IL-12,对机体有免疫增强作用.结论 梅花鹿鹿茸活性多肽对机体的细胞免疫有显著增强作用.

新生牛肝活性肽对小鼠血清中ALT和AST酶活力的影响

目的 观察新生牛肝活性肽对四氯化碳引起的小鼠化学性肝损伤的保护作用.方法 采用四氯化碳致小鼠化学性肝损伤模型,设新生牛肝活性肽低、中、高剂量组、模型对照组和正常对照组,分别灌胃给药,观察各组小鼠肝损伤情况.结果 新生牛肝活性肽高剂量组可有效降低模型小鼠血清中ALT,但AST降低不明显.结论 新生牛肝活性肽对化学性肝损伤具有辅助保护作用.

重组人干扰素α2b阴道泡腾片抗豚鼠单纯疱疹病毒性阴道炎的疗效

目的 观察重组人干扰素α2b阴道泡腾片对单纯疱疹病毒性阴道炎动物模型的疗效.方法 采用单纯疱疹病毒感染建立豚鼠实验性阴道炎模型,并分别用重组人干扰素α2b阴道泡腾片600、3 000和15 000 IU /只进行治疗.以阿昔洛韦(无环鸟苷)和干扰素α2b栓剂15 000 IU/只作为对照.对治疗前后豚鼠阴道外观及组织切片进行评分.结果 应用重组人干扰素α2b阴道泡腾片对豚鼠实验性单纯疱疹病毒性阴道炎进行治疗后,豚鼠阴道外观病变与组织切片病变评分均显著降低,其中15 000 IU/只效果好.同样剂量的α2b泡腾片药效优于栓剂.结论 重组人干扰素α2b阴道泡腾片对实验性单纯疱疹病毒性阴道炎有明显的疗效.

免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人的免疫激活作用

目的 评估免疫细胞素 Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人体内免疫作用.方法 33位黑色素瘤病人用一种人源化抗神经节苷脂GD-2的单抗与IL-2融合的免疫细胞素进行治疗,按每天0.8、1.6、3.2、4.8、6.0、7.5 mg/m2 静脉滴注,连续3 d为一疗程,病情稳定或缓解后,在第5周接受第2疗程治疗.观察病人外周血单核淋巴细胞抗体依赖的细胞毒性、自然杀伤细胞活性、IL-2的体外增殖以及IL-2可溶性受体的变化.结果 Hu14.18-IL-2能诱导病人淋巴细胞的吞噬作用, 增强外周血中自然杀伤细胞的杀伤能力和数目,使血清中IL-2受体复合体的可溶性受体α链水平上升.结论 免疫细胞素Hu14.18-IL-2对黑色素瘤病人具有免疫激活作用.

国产水痘减毒活疫苗在免疫损害病人中的应用

目的 观察国产Oka株水痘减毒活疫苗在急性白血病、实体肿瘤和接受免疫抑制剂治疗的免疫损害病人中的反应原性和抗体应答.方法 国产Oka株水痘减毒活疫苗接种于3种免疫损害病人,用ELISA法检测免疫前和免疫后抗体水平,并观察副反应情况.结果 接种疫苗的3种病人均无异常反应发生,仅有少数病人在观察期内有中强程度发热,其中以实体肿瘤病人略多.3种病人接种前多数抗体阳性,经疫苗免疫后,抗体滴度均有不同程度上升,正在使用免疫抑制剂者抗体滴度上升不明显.结论 免疫损害病人接种国产水痘减毒活疫苗是安全有效的.

人类免疫缺陷病毒抗体快速检测试剂的临床评价

目的 评价人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体快速检测试剂检测全血、血清或血浆样品中HIV抗体的敏感性及特异性.方法 从不同地区及不同人群中收集全血样品493份,并分离血清,用考核试剂分别检测同一人的全血及血清样品;同时从不同地区及不同人群中收集HIV抗体阳性和阴性血清/血浆样品共1175份,用考核试剂和参比试剂同时检测.结果 考核试剂检测493份全血和血清样品的结果一致,HIV抗体阳性为99份;与参比试剂相比,考核试剂检测血清/血浆样品的敏感性为100%,特异性为99.92%.结论 该考核试剂与参比试剂的质量相当.

文稿中数字用法的要求