中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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人IL-23R胞内区基因的克隆与原核表达
目的 克隆人IL-23R(hIL-23R)胞内区基因,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.方法 通过PCR获得hlL-23R基因的胞内区片段,克隆至载体pGEX-4T-1中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-hIL-23R(I),转化感受态大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot进行鉴定.结果 hIL-23R胞内区基因的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析可见约760 bp的目的片段.重组原核表达质粒经双酶切及测序证明构建正确.表达的融合蛋白相对分子质量约为55 000,在低温(20℃)、低IPTG浓度(0.5 mmol/L)诱导条件下能以可溶形式表达,可溶性蛋白的表达量约占菌体可溶件蛋白总量的16.1%,且可被兔抗GST多克隆抗体识别.结论 已成功克隆了hlL-23R胞内区基因,并在大肠杆菌中表达了可溶性的GsT融合蛋白.
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P53蛋白的原核表达及纯化
目的 构建P53基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化.方法 以pBabe-P53R质粒为模板,PCR扩增P53基因全序列,克隆至pGEX-4T-1载体中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-P53,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经不同配比的去垢剂复性后,用Glutathione Sepharose 4Bgel亲和层析纯化.结果 重组原核表达质粒pGEX-4T-1-P53经双酶切鉴定,表明构建正确.表达的GST-P53融合蛋白相对分子质量约80 000,IPTG诱导时间以1 h为宜.1%Triton X-100和1 mmol/L EDTA为蛋白复性的佳去垢剂.纯化的GST-P53融合蛋白可与羊抗人GST抗体和鼠抗人P53抗体发生特异性反应.500 ml菌液可获得1 mg纯化蛋白.结论 已成功构建了P53基因重组原核表达质粒,表达并纯化了GST-P53融合蛋白,为研究NIRF与P53基因之间的相互关系奠定了基础.
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人呼吸道合胞病毒A2株在不同细胞中的培养及其影响因素
目的 在不同细胞中培养人呼吸道合胞病毒(HRSV),并分析其影响因素,为病毒的大量增殖创造条件.方法 将HRSV A2株分别接种至人二倍体KMB17细胞、Vero细胞、人喉癌Hep-2细胞及HeLa细胞进行培养,采用微量细胞病变法检测病毒的感染性滴度,并进行间接免疫荧光试验及合胞体观察.检测吸附时间、维持液pH值和培养温度对病毒增殖的影响.结果 4种细胞中,Vero细胞对HRSV敏感,病变早、病毒感染性滴度可达6.83 IgCCID50/ml;KMB17细胞相对敏感性不高,但仍能良好增殖,病毒感染性滴度达6.13 IgCCID50/ml;Hep-2细胞及HeLa细胞介于Vero细胞和KMB17细胞之间,病毒感染性滴度也达到6.83 IgCCID50/ml.间接免疫荧光试验显示病毒在细胞浆内增殖.吸附时间对HRSV的增殖无明显影响;维持液的pH值对HRSV的增殖及病变特点均有一定的影响,在pH 7.0～7.2时可快速引起细胞产生病变,并能达到高感染性滴度;HRSV在37℃及32℃下培养均能良好地增殖.结论 HRSV A2株在KMB18、Vero、Hep-2及HeLa细胞内均可增殖,但敏感性有一定差异,且对培养条件有一定的要求.
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激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞吞饮活性及TLR4表达的双向调节作用
目的 探讨激活素A(Activin A)对巨噬细胞系RAW264.7细胞活性的调节作用及其可能的机制.方法 取对数生长期的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,加入1 μg/ml脂多糖(LPS),继续培养8 h,采用ELISA法检测细胞分泌Activin A水平;分别加入Activin A、LPS和Activin A+LPS,中性红染料法检测细胞吞饮活性;流式细胞术分析细胞表而分子MHC Ⅰ、MHCⅡ及Toll样受体4(TLR4)的表达水平.结果 LPS呈时间依赖性刺激RAW264.7细胞分泌Aetivin A;Activin A可明显促进静息RAW264.7细胞的吞饮活性,而对MHC Ⅰ、MHCⅡ及TLR4的表达水平无明显影响;Activin A和LPS共同作用,Activin A明显抑制了LPS活化的RAW264.7细胞的吞饮活性,并下调TLR4的表达.结论 Activin A 可能以自分泌/旁分泌形式参与巨噬细胞活性调节,其抑制LPS作用与TLR4表达有关.
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以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株
目的 以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株,为以Vero细胞为基质生产流感疫苗奠定基础.方法 以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株,与WHO推荐的2007～2008年度北半球流感疫莳生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF鸡胚和Vero细胞,用抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)抗体筛选重配病毒,在Veto细胞连续传12代,采用血凝抑制试验和RT-PCR鉴定病毒型别.将重配病毒经Vero细胞大馈培养,重配前的病毒经鸡胚大量培养,分别经甲醛火活,制备灭活疫苗,免疫ICR小鼠,检测其免疫原性.结果 获得了1株Vero细胞适应的高产H1N1流感病毒株,连续传9代后,病毒血凝滴度维持在512,免疫原性与重配前的毒株相比,差异无统计学意义.结论 通过流感病毒Vero细胞适应株与流行株的重配和抗体筛选,可以获得H1N1流感病毒Vero细胞适应株.
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B族链球菌表面免疫原性蛋白的黏膜免疫效果
目的 探讨B族链球菌(GBS)表而免疫原性蛋白(sip)的黏膜免疫效果.方法 表达及纯化两种不同标签的Sip(Gp-Sip和pET-Sip),质谱分析法鉴定纯化蛋白.用Gp-Sip免疫BALB/c小鼠,pET-Sip检测免疫小鼠血清及阴道黏膜萃取液中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的调理吞噬活性.结果 经质谱分析和蛋白质库比较证实,纯化的Gp-Sip和pET-Sip为B族链球菌Sip的可能性分值分别为177和92.ELISA检测结果显示,Sip+CT经鼻内及直肠两种途径黏膜免疫后,均可诱发小鼠产生高水平的血清IgG及阴道黏膜IgA抗体,鼻内免疫效果优于直肠;不同剂量的Sip+CT鼻内免疫后,均可在血清及阴道黏膜中检出高水平的IgG和IgA抗体,组间比较差异无统计学意义;CT和CpG-ODN1826鼻内免疫均可促进Sip产生较好的黏膜免疫效果,二者之间差异无统计学意义.Sip抗血清可明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用.结论 Sip具有较好的黏膜免疫原性,鼻内黏膜免疫效果优于直肠,CT和CpG-ODN1826两种佐剂均可有效提高Sip的免疫原性.
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应用AdMax系统构建携带HCV核心基因Core的重组腺病毒载体
目的 应用AdMax系统构建携带丙型肝炎病毒(HCV)核心基因core的重组腺病毒载体,为进一步研究防止HCV感染的基因疫苗和基因治疗奠定基础.方法 RT-PCR法从丙型肝炎患者血清中扩增HCV Core基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-Core,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pAd-Core,经HEK293细胞扩增后,离子交换柱层析法纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度,并计算比活性及单细胞产量.结果 重组腺病毒pad-Core感染的HEK293细胞经PCR检测,可扩增出HCV核心基因Core片段,经测序证明,其插入序列与设计的HCV Core基因序列一致.扩增纯化后,重组腺病毒的比活性达0.034 IU/VP,单细胞产量可达2.63×104VP/细胞.结论 已成功构建重组腺病毒载体pAd-Core,为Core基因在腺病毒介导下的基因免疫和基因治疗的研究奠定了基础.
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人颗粒溶素活性肽和小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建及鉴定
目的 构建含人颗粒溶素(GLS)活性肽和小鼠单链白细胞介素-12(mIL-12)基因的重组卡介苗(BCG),并鉴定其向真核细胞递呈质粒的能力.方法 以分子生物学方法构建含相对分子质量为9 000的颗粒溶素活性肽基因和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM9,以电转化的方式将pBM9质粒转入BCG,构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定;将重组菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR检测重组菌向真核细胞递呈质粒的能力.结果 重组BCG可扩增出与GKS基因和mIL-12基因相符的目的条带.重组BCG感染RAW264.7细胞96 h后,经RT-PCR可扩增出267 bp的GLS基因条带和1 632 bp的mIL-12基因条带.结论 已成功构建含GLS和mlL-12基因的重组BCG,该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带的目的基因.
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人溶菌酶基因的原核表达及其生物学活性
目的 在大肠杆菌中表达人溶菌酶(hLYZ)基因,并检测其生物学活性.方法 将人溶菌酶基因克隆至带有GST融合标签的原核表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌BL21(DE3),终IPTG诱导表达.表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定,并用溶壁微球菌比浊法检测酶活性,热激法检测其生物学活性.结果 经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组表达质粒pGEX-4T-hLYZ构建正确.SDS-PAGE显示,在相对分子质量约40 000处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的46.5%,目的蛋白在裂解沉淀中占17.0%,在裂解上清中占58.3%,主要以可溶形式表达.纯化后,重组蛋白纯度可达95%以上,且具有良好的反应原性.重组hLYZ酶活性为2 389 U/mg,对金黄葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性重组人溶菌酶,且具有较高的生物学活性.
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人乳头瘤病毒16型L1蛋白VLP的原核表达及纯化
目的 在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白病毒样颗粒(VLP),并进行纯化,为研制宫颈癌疫苗提供新的思路.方法 以HPV16基因组DNA为模板,PCR扩增HPV16 L1基因的编码区,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)编码区下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用GST纯化柱纯化重组融合蛋白,并用凝血酶切去GST标签,冉经S100分子筛纯化,浓缩后,电镜观察纯化蛋白的VLP形态.结果 重组表达质粒经双酶切和测序,证明构建正确.表达产物的相对分子质约为80 000,主要以可溶性形式存在.Western blot显示,目的蛋白可与小鼠抗HPV16 L1抗体发生特异性反应.纯化蛋白的纯度约为95%,在电镜下可见直径约为50～60 nm的VLP.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性的HPV16 L1蛋白VLP,并进行了纯化,为宫颈癌疫苗及血清学诊断试剂的研制奠定了基础.
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人CD147基因siRNA真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞中CD147基因表达的影响
目的 构建针对人CD147基因的siRNA真核表达质粒,并观察其对HeLa细胞中CD147基因表达的影响.方法 根据GenBank中登录的人CD147基因序列,设计并合成针对CD147基因的特异性小干扰片段,并将其定向克隆至带有卡那霉素抗性和增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.用脂质体将重组质粒转染至HeLa细胞中,观察其对HeLa细胞CD147基因mRNA及蛋白表达水平的影响.结果 酶切鉴定和测序结果表明,3个表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒构建正确.3个siRNA真核表达质粒对HeLa细胞CD147基因mRNA转录水平的抑制率分别为32.5%、66.8%和59.1%;对CD147蛋白表达水平的抑制率分别为28.3%、63.5%和56.2%.结论 已成功构建针对人CD147基因的siRNA真核表达质粒,其对HeLa细胞CD147基因的表达具有明显的抑制作用,为进一步研究CD147基因的功能奠定了基础.
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CXCR4在乳腺癌中的表达及乌斯他丁对其表达的影响
目的 探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性,以及乌斯他丁(UTI)对其表达的影响.方法 采用流式细胞术和RT-PCR法检测22例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231中CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达情况,以及UTI对MDA-MB-231细胞CXCR4表达的影响.结果 在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中,CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;UTI能下调CXCR4的表达,经UTI作用后,MDA-MB-231细胞的趋化活性降低.结论 CXCR4在乳腺癌中高表达,在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平可减少或抑制其转移.
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致病性大肠杆菌espH删除株的构建及其功能鉴定
目的 构建致病性大肠杆菌(EPEC)espH删除株,探讨espH分子的转位、定位以及在A/E损伤中的作用.方法 构建自杀质粒pcvd442-△AH::kana,通过结合传递、等位交换,抗性筛选获得espH删除株,并对删除株进行PCR鉴定;构建带HA标签的espH表达载体pTrc99a-espH:HA,转化espH删除株,感染HeLa细胞,免疫荧光技术和Western blot检测espH的转位及定位;构建espH和绿色荧光蛋白融合表达质粒p-espH-EGFP,转染HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白的分布;用espH删除株感染HeLa、Caco-2和TC-7细胞,分别用荧光显微镜技术、上皮细胞电阻(TER)检测和扫描电镜(SEM)探讨espH在基垫形成、屏障功能障碍和微绒毛脱落损伤中的作用.结果 酶切、测序及PCR鉴定表明自杀质粒pcvd442-△H::kana和espH删除株构建正确.espH依赖T3SS转位到宿主细胞,转位后,Western blot检测发现espH主要分布于细胞的可溶性成分,免疫荧光检测发现espH分布于细胞膜基垫形成处,espH与EGFP的融合蛋白分布于细胞膜.感染试验表明,espH删除株可以形成基垫,并造成Caco-2细胞屏障功能障碍和TC-7细胞微绒毛脱落损伤.结论 已成功构建了EPEC espH删除株.espH是EPEC的一个依赖T3SS转位的效应分子,转位后,蛋白分布于细胞膜基垫形成处,但未发现espH在EPEC基垫形成、屏障功能障碍和微绒毛脱落方面具有重要作用.
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人肠道病毒71型的研究进展
近年来,人肠道病毒71(EV71)感染在世界各地尤其是亚太地区呈上升趋势.EV71感染主要引起手足口病,但所敛的神经系统并发症可导致死亡或永久性肌麻痹,已引起医学界的广泛关注.本文对EV71的病原学、流行病学、分子流行病学特征及实验室检测、预防和研究方向等作一综述.
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HIV-Tat蛋白转导域的研究进展
HIV-Tat蛋白转导域具有穿膜活性,能够将与之共价连接的多肽、蛋白、核酸等生物大分子快速而高效地转导入细胞内部,且对细胞无毒副作用,在药物转运及疾病治疗等领域有着广阔的应用前景.本文对HIV-Tat蛋白的结构、穿膜机制及转导域功能的应用作一综述.
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FGF21 生物学特性的研究进展
FGF21是成纤维细胞生长因子家族的一名新成员,其氨基酸序列与其他亚家族成员之间有不同程度的同源性.FGF21在肝脏中特异性表达,能降低血糖、甘油三酯、胰高血糖素和果糖胺的浓度,改善胰岛β细胞的功能,因此有望成为治疗糖尿病、肥胖症及其他一些代谢综合症的药物.FGF21还有很多不同于其他FGFs家族的特点,如FGF21的信号传导需要βKlotho协同才能稳定结合FGFR;FGF21能通过血脑屏障等.另外,在斑马鱼体内还发现FGF21能促进造血功能.本文就FGF21的分子结构及其生物学特性的研究进展作一综述.
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冻干茶多酚脂质体的制备及其质量
目的 制备冻干茶多酚脂质体,并进行质量评价.方法 采用不同种类及浓度的冻干保护剂制备冻干茶多酚脂质体,检测其包封率和有效粒径,筛选佳冻干保护剂及其适浓度,并对冻干茶多酚脂质体的形态、结构、粒径分布、Zeta电位和稳定性等性质进行观察.结果 佳冻干保护剂为15%(w/v)的蔗糖.所制备的冻干茶多酚脂质体再分散性良好;呈圆球形或椭球形,结构为大单室脂质体;有效粒径为(170.4±3.7)nm;Zeta电位为-60.5 mV;在4℃条件下稳定性良好.结论 已成功制备冻干茶多酚脂质体,其各项质量指标良好.
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国内外卡介菌的分子遗传学特性
目的 比较我国生产用卡介菌上海菌株与国际常用卡介菌亚株(巴斯德1173 P2株、法国F6株、丹麦1331株、丹麦2株、日本172株、Connaught)在分子遗传学上的差异.方法 应用PCR和多重PCR方法,对国内外不同卡介菌的各缺失区(RD1、RD2、RD8、RD14、RD16、nRD18、RDDenmark/Glaxo)、插入序列IS6110拷贝数及基因座SenX3-Regx3串联重复序列拷贝数进行检测.结果 我国生产用卡介菌上海菌株(BCG Chinese)缺失RD1和RD2,不缺失RD8、RD14、RD16、nRD18及RDDen-mark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有3个串联重复序列,PCR产物为353 bp;巴斯德1173 P2株缺失RD1、RD2、RD14和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;法国F6株缺失RD1、RD2和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦1331株缺失RD1、RD2及RDDenmark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦2株与丹麦1331株相似,只是SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列和3个串联重复序列并存的现象;日本172株只缺失RD1,RD16只显示401 bp的产物,含有2个IS6110插入序列;Connaught株缺失RD1、RD2、RD8及nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有1个串联重复序列.结论 我国生产用卡介菌上海菌株与国外其他卡介菌业株在分子遗传学特性上有一定的差异.
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禽流感病毒抗原-抗体复合物的制备及其免疫原性
目的 制备禽流感病毒抗原-抗体复合物,并检测其免疫原性.方法 以H5亚型禽流感病毒的HA蛋白为抗原,其病毒的高免卵黄为抗体,将抗原与抗体按不同比例混合,制备禽流感病毒抗原抗体复合物.免疫1日龄SPF仔鸡,进行保护力试验;于免疫后不同时间检测血清HI抗体水平,并与H5亚型油乳剂灭活疫苗进行比较.结果 抗原与抗体比例为1:0.6的抗原-抗体复合物在免疫仔鸡15 d后,其诱导的平均抗体水平达6.5 log2,与H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(6.2 log2)相比,差异无统计学意义;在等量病毒攻击后,二者对仔鸡的保护率相同(93.3%).结论 制备的禽流感病毒抗原-抗体复合物具有良好的免疫原性,为研制禽流感新型复合物疫苗提供了依据.
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生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗
目的 建立利用生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的新工艺.方法 以Vero细胞作为乙型脑炎病毒增殖的细胞基质,使用微载体Cytodex-Ⅰ在15 L生物反应器中进行高密度培养,采用2.5～4.5 g/L的载体浓度培养乙型脑炎病毒,制备3批纯化乙型脑炎疫苗并进行检定.结果 随着微载体浓度的增加,细胞密度升高.采用2.5～4.5 g/L微载体培养的病毒收获液的平均滴度为7.38～7.56 lgPFU/ml,收获量高可达到12～15个有效罐体积.制备的3批疫苗各项质量指标均符合<中国药典>三部(2005版)相关要求.结论 已建立了15 L生物反应器制备Veto细胞乙型脑炎纯化疫苗的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础.
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低血清培养Vero细胞和流感病毒条件的优化
目的 优化低血清培养Vero细胞和流感病毒的条件,为开发Vero细胞流感疫苗奠定基础.方法 分别在DMEM/F12和SLM-199培养基中,添加不同浓度的血清,培养Vero细胞,观察细胞连续传代的生长状态;接种流感病毒后,检测病毒培养液不同pH值、不同浓度TPCK-胰酶和病毒不同接种量对病毒血凝效价的影响.结果 用SLM-199在1.0%血清浓度下培养的Vero细胞接种流感病毒血凝效价较高,病毒培养液pH值为7.2,TPCK-胰酶含量为1.0 μg/ml,接种病毒MOI为1.0时,72 h收获的病毒血凝效价高.结论 已筛选出低血清培养Vero细胞和流感病毒的适宜条件.
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脱氧氟尿苷脂质体的制备
目的 建立脱氧氟尿苷(DFUR)脂质体的制备工艺.方法 采用逆向蒸发法制备DFUR脂质体,并以包封率为参考指标,进行正交试验优化该脂质体的配方.以优化的配方制备脂质体,观察其微观形态,测定粒径、包封率及稳定性,并进行体外释药实验.结果 制备DFUR脂质体的佳配方为:卵磷脂/胆固醇(摩尔比)为2:1,有机相/水相(体积比)为5:1,DFUR浓度为2 mg/ml,磷酸盐缓冲液pH值为7.0.以此配方制备,脂质体包封率可达52.15%.3批DFUR混悬液,粒径小于220 nm的粒子比率均在70%以上,显微镜下观察可见,脂质体呈球形或椭恻形,粒径范围在0.15 μm～1.00 μm之间.4℃保存49 d,脂质体的稳定性良好.其累积释放率远低于原料药浓度.结论 已建立了DFUR脂质体的制备工艺,该工艺操作简便可靠,所需设备简单,稳定性较好,可用于包埋水溶性药物.
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冰冻血小板的功能及其临床疗效
目的 观察冰冻血小板的功能及其临床疗效.方法 对血小板冰冻前后的回收率、黏附率、聚集率和血小板第3因子(PF3)活性进行检测,并比较新鲜机采血小板与冰冻机采血小板临床应用的疗效.结果 冰冻血小板的回收率为70.93%±15.23%,黏附率、聚集率和PF3活性与新鲜机采血小板差异无统计学意义,且临床疗效良好.结论 冰冻血小板的功能没有变化,对因血小板减少所致的出血具有良好的止血作用.
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乳腺浸润性导管癌中CD44v6分子的表达及其临床意义
目的 检测乳腺浸润性导管癌中CD44v6分子的表达,探讨其与乳腺浸润性导管癌各临床病理特征的相关性、对预测乳腺浸润性导管癌患者预后的意义以及新辅助化疗对CD44v6分子的影响.方法 用免疫组化染色法检测90例乳腺浸润性导管癌化疗前后及10例癌旁非肿瘤乳腺组织中CD44v6的表达,并对所有乳腺浸润性导管癌患者进行随访.结果 乳腺浸润性导管癌组织中,CD44v6阳性表达率为81.1%(73/90),明显高于癌旁非肿瘤乳腺组织(0/10);CD44v6的表达与组织学分级、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移及转移个数呈正相关,而与患者的年龄、月经状况、ER、PR、CerBb-2、P53之间无显著相关性;CD44v6阴性组的总体生存率明显高于CD44v6阳性组,且CD44v6阳性表达越强,患者总生存率越低;Cox比例风险模型多因素分析显示,CD44v6为影响预后的独立因素;介入化疗组和静脉化疗组化疗前后CD44v6的表达差异均无统计学意义.结论 CD44v6分子在乳腺浸润性导管癌的诊断中具有较强的特异性;CD44v6分子可作为预测乳腺浸润性导管癌预后的指标之一,但不能作为判断新辅助化疗疗效的指标.
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抗黄曲霉毒素B1重链IgG2b亚型单克隆抗体的制备及应用
目的 制备抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的重链IgG2b亚型单克隆抗体,并建立黄曲霉毒素B1的间接竞争ELISA检测方法.方法 采用AFB1-BSA偶联物为免疫抗原,AFBI-STI偶联物为检测抗原,利用间接竞争ELISA筛选分泌抗AFB1单抗的细胞株,并对抗体进行鉴定.结果 筛选到1株能分泌特异性抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其染色体数目为(90±10)条;所分泌的单抗亚类重链为IgG2b,轻链为λ;间接ELISA检测该株杂交瘤细胞分泌上清效价在1:12 800～1:25 600,纯化腹水效价为1:105～1:106.传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;建立的间接竞争ELISA检测方法的低检出限为0.001 ng/ml,校正曲线的线性范围为0.005～5 ng/ml,IC50为0.01 ng/ml;与AFB1的结构类似物AFM1和化学结构有差异的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的交叉反应率分别为1.4%和<1%.结论 所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体具有高度特异性和稳定性,可应用于间接竞争ELISA检测方法.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
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