您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
主要结构蛋白文献资料
-
人乳头瘤病毒16型L1蛋白VLP的原核表达及纯化
目的 在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白病毒样颗粒(VLP),并进行纯化,为研制宫颈癌疫苗提供新的思路.方法 以HPV16基因组DNA为模板,PCR扩增HPV16 L1基因的编码区,定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)编码区下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,采用GST纯化柱纯化重组融合蛋白,并用凝血酶切去GST标签,冉经S100分子筛纯化,浓缩后,电镜观察纯化蛋白的VLP形态.结果 重组表达质粒经双酶切和测序,证明构建正确.表达产物的相对分子质约为80 000,主要以可溶性形式存在.Western blot显示,目的蛋白可与小鼠抗HPV16 L1抗体发生特异性反应.纯化蛋白的纯度约为95%,在电镜下可见直径约为50～60 nm的VLP.结论 已成功地在大肠杆菌中表达了可溶性的HPV16 L1蛋白VLP,并进行了纯化,为宫颈癌疫苗及血清学诊断试剂的研制奠定了基础.
