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芹菜素抗肺癌SPC-A1细胞增殖和诱导凋亡作用
目的:探讨芹菜素对人非小细胞肺癌SPC-A1细胞增殖和凋亡的影响.方法:体外常规培养人肺癌细胞株SPC-A1细胞,用5～ 80 μmol·L-1不同浓度芹菜素作用SPC-A1细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶(PI)双标记染色法检测细胞凋亡率.结果:芹菜素对SPC-A1细胞增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,芹菜素干预24,48,72 h的IC50值分别为319.02,37.23,18.59 μmol·L-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见芹菜素给药后出现细胞数逐渐减少,凋亡细胞核固缩,染色质凝集,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示芹菜素可诱导SPC-A1细胞出现不同程度的凋亡.结论:芹菜素能抑制人非小细胞肺癌SPC-A1细胞的增殖和诱导其凋亡.
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Flavopiridol增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡作用机制研究
目的:研究夫拉平度(FP)增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导非小细胞肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用及其分子机制.方法:采用TRAIL、FP单独及联合作用的方法诱导细胞凋亡,MTT法检测各处理组细胞的增殖及活性;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关基因蛋白水平的表达;定量PCR检测TRAIL受体及髓系细胞白血病-1(Mcl-1)、Fas相关死亡结构域样IL-1β转化酶样抑制蛋白(FLIP)、X染色体连锁的细胞凋亡抑制因子(XIAP)和Livin等凋亡基因的转录水平表达变化.结果:100 nmol/L FP处理组(F)细胞存活率为(80.26±2.43)％,100 ng/mL TRAIL处理组(T)为(90.49±1.60)％,FP和TRAIL联合组(F+T)为(47.48±1.41)％,联合组的细胞存活率低于单一处理组,F=406.08,P=0.000.FP和TRAIL合用时,FLIP和XIAP分别降为对照组的4％和15％,Mcl-1与Livin的表达量甚至低于可检测水平.Caspase-3和Caspase-8的活性片段约为对照组的4倍.细胞色素c由线粒体向细胞质的释放增加约7倍,而Bcl-2家族蛋白Bcl-2、Bax、Bak和Bcl-xl的表达量基本不变.FP作用后引起DR4的mRNA表达水平(2.51±0.14)上升,P＜0.05.但FP和TRAIL单独作用并未引起Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin在转录水平的表达变化.联合组加入广谱Caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,细胞存活率由(58.26±1.75)％上升至(88.17±2.65)％,P=0.003.说明Z-VAD-FMK可明显抑制联合处理组的凋亡效应.结论:FP能显著增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡的作用,此协同促凋亡效应与抗凋亡基因Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin的蛋白水平表达降低以及Caspase活性增强和线粒体损伤有关,同时涉及内源性(线粒体)及外源性(非线粒体)凋亡信号通路的共同作用.
关键词： 夫拉平度 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 SPC-A1细胞 细胞凋亡 -
人穿孔素N端肽段的放射诱导表达研究
目的:构建人穿孔素N端(hPFN-N)的真核放射诱导表达载体,并在放射诱导条件的刺激下研究hPFN-N的表达产物(rhPFN-N)在肺癌细胞SPC-A1中的分布及其对该细胞的细胞毒性作用.方法:以克隆有hPFN全长cDNA序列的载体pcDNA3.1(+)/hPFN为模板,用PCR扩增hPFN-N,将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ Egr-1中,以重组体稳定转染SPC-A1细胞,经过X射线的放射诱导后,应用RT-PCR、细胞免疫化学法检测hPFN-N蛋白的表达,用MTT法测定该蛋白对靶细胞的杀伤活性.结果:成功构建了真核放射诱导表达载体pcDNA3.1(+)/ Egr-hPFN-N.以重组体转染SPC-A1细胞后,用RT-PCR检测到hPFN-N mRNA的表达.细胞免疫化学法检测结果呈阳性反应,MTT法检测结果为rhPFN-N对靶细胞的杀伤活力为 29.2%.结论:构建了pcDNA3.1(+)/ Egr-hPFN-N真核放射诱导表达载体,在经过X射线的放射诱导后,hPFN-N能够在SPC-A1细胞的细胞膜上大量表达,表达产物rhPFN-N对靶细胞有明显杀伤活力.
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禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡
目的 研究禽流感病毒NSIA蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响.方法 将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin V FITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析.结果 NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性.随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞.Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30 000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符.结论 禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡.
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干扰素β对内皮前体细胞诱导的肿瘤血管生成作用的研究
目的:证实通过基因改造骨髓来源的内皮前体细胞(EPCs)可以使有抑瘤作用的分子靶向肿瘤部位,抑制肿瘤的生长.方法:我们用病毒载体将人干扰素β基因转入EPCs中,转入人干扰素β基因的EPCs与非小细胞性肺癌细胞SPC-A1的共培养,观察SPC-A1的死亡情况；将SPC-A1细胞与离体培养的EPCs在基因鼠中共同荷瘤测量肿瘤的生长.结果:转染了人干扰素β基因的EPCs能诱导共培养的SPC-A1细胞的死亡；当SPC-A1细胞与离体培养的EPCs在基因鼠中共同荷瘤时肿瘤的生长加速,而干扰素β抑制了EPCs的促瘤作用,并且EPCs与肿瘤细胞共同荷瘤后引起的肿瘤组织中血管密度的增加也在干扰素β的作用下受到抑制.结论:基因改造的EPCs能成为将抑瘤因子靶向肿瘤部位的传输媒介,达到抑制肿瘤的生长目的.
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Ad-ING4联合放疗抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长
目的:研究腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth family 4,ING4)联合放疗对肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用.方法:制备SPC-A1细胞荷瘤小鼠模型,随机分为PBS组、Ad组、Ad-ING4组、放疗组、Ad-ING4+放疗组.测量各组荷瘤小鼠移植瘤的体积变化,治疗15 d后摘取瘤块,称质量并计算抑瘤率；H-E染色观察瘤体组织细胞的形态学变化,免疫组化法检测瘤体组织中Bax、caspase-3、Bcl-2、VEGF等因子的表达.结果:治疗后第15天SPC-A1移植瘤体积:Ad-ING4组为(1 136.03±151.58)mm3、单纯放疗组为(1 035.67±86.27) mm3、Ad-ING4+放疗组为(743.84±109.06)mm3,联合组可有效抑制肿瘤生长(P＜0.01)；此外,联合组抑瘤率也显著高于单纯Ad-ING4组或放疗组(69.62％ vs 33.17％、35.41％,P＜0.01),呈现放疗增敏协同作用(Q=1.22).免疫组化结果显示,Ad-ING4及其联合放疗组能明显上调Bax、caspase-3等蛋白的表达,下调Bcl-2、VEGF等蛋白的表达,且Ad-ING4+放疗组对这些蛋白表达的调节作用强于Ad-ING4组、单纯放疗组(P＜0.01).结论:Ad-ING4联合放疗可有效抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长.
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Livin异构体特异性siRNA表达载体的构建及其在SPC-A1细胞中的稳定表达
目的:利用基因转染和RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术在肺腺癌SPC-A1细胞株中分别建立2种Livin异构体的基因沉默体系,旨在进一步体外观察两种异构体基因沉默诱导SPC-A1细胞凋亡效应.方法:构建Livin两种异构体小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体;以电穿孔法转染SPC-A1细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆;通过半定量RT-PCR和Western blot验证Livin异构体在SPC A1细胞中的基因沉默效率,建立高效Livin异构体基因沉默体系.结果:成功获得Livin异构体siRNA表达载体,经基因转染以及G418抗性筛选,成功建立Livin异构体特异基因沉默SPC-A1细胞克隆.结论:RNAi能高效特异阻断两种Livin异构体表达,为进一步研究其不同的抗凋亡生物学功能,探讨其作为诱导肺癌细胞凋亡治疗分子靶点以及提高肺癌细胞放化疗敏感性打下基础.
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人肺腺癌细胞SPC-A1对氨基硅烷纳米Fe3O4内吞途径及机制的初步研究
目的:探讨氨基硅烷纳米Fe3O4进入到人肺腺癌细胞SPC A1的内吞途径及其机制.方法:在不同温度及细胞松弛素B处理前后对人肺腺癌细胞SPC-A1进行培养,通过透射电镜动态观察细胞对氨基硅烷纳米Fe3O4的不同内吞情况.结果:氨基硅烷纳米Fe3O4颗粒与SPC-A1细胞在低温条件混合培养时可阻断氨基硅烷纳米Fe3O4颗粒进入细胞质,而以静电作用的方式吸附于SPC-A1细胞膜表面.然而,当处于37℃条件培养时可激活细胞内吞作用,纳米颗粒首先进入细胞表面包被小窝、通过内吞体进入溶酶体.但经采用细胞松弛素B处理后,可导致37℃培养的SPC-A1细胞无法内吞纳米颗粒.结论:氨基硅烷纳米Fe3O4系通过细胞吞噬途径而进入细胞质,Fe3O4纳米颗粒有可能作为一种研究细胞内吞的示踪剂.
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人穿孔素C端肽段的放射诱导表达
目的 观察克隆的人穿孔素(perforin,PFN)羧基端肽段在肺癌细胞SPC-A1中的放射诱导表达及其对该细胞的杀伤活性.方法 用PCR方法获取hPFN-C基因片段,将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Egr-1,脂质体介导转染SPC-A1细胞.放射诱导表达后,RT-PCR、免疫细胞化学方法检测该基因片段在SPC-A1中的表达.MTT法检测该基因片段的表达产物对SPC-A1细胞的杀伤活性.结果 成功获取hPFN-C基因片段,构建了放射诱导表达的真核表达载体,转染SPC-A1细胞后,免疫细胞化学法证实目的蛋白出现在细胞质中,而未照射的细胞则没有hPFN-C基因表达. MTT法检测显示,与对照组相比,有hPFN-C 表达的SPC-A1细胞存活率仅为0.657.结论 成功构建hPFN-C基因片段的放射诱导表达载体,它在SPC-A1细胞中获得可控性表达,其表达产物对该细胞具有较强的杀伤活性.
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2-甲氧基雌二醇对4T1、SPC-A1和PC-3细胞的生长抑制作用
目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对多种肿瘤细胞的生长抑制作用.方法:以鼠乳癌4T1细胞株、人肺腺癌SPC-A1细胞株、人前列腺癌PC-3细胞株为研究对象,采用SRB法考察2-ME对多种肿瘤细胞的生长抑制作用,并联合维拉帕米,利用协同指数探讨影响2-ME抗癌作用的因素.结果:2-ME对4T1、SPC-A1和PC-3细胞有不同程度的抑制作用,IC50分别是6.11、1.89和5.12 μmol/L;联合维拉帕米后,抑制率高于单独用药组(P<0.01,IC50分别降低至2.01、0.57和2.77 μmol/L,协同指数0.77～0.43.结论:2-ME对3种细胞都有一定的生长抑制作用,维拉帕米对2-ME有明显的增效作用.
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黄芩苷体外诱导人肺癌SPC-A1细胞凋亡的研究
目的：研究黄芩苷对人肺癌SPC-A1细胞增殖的影响并探讨其作用机制。方法采用不同浓度的黄芩苷处理细胞后，MTT法测定黄芩苷对细胞增殖的影响；Hoechst 33258荧光染色法观察胞膜有泡状突起，细胞核凝集，PI染色法检测细胞周期，Rhodamine123结合流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。结果黄芩苷能抑制人肺癌SPC-A1细胞生长且呈浓度时间依赖关系；随药物浓度及作用时间变化，黄芩苷能明显诱导细胞凋亡，细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高；同时线粒体膜电位下降。结论黄芩苷能诱导人肺癌SPC-A1细胞凋亡且呈量效时效关系，其作用可能与线粒体通路有关。
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丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制
目的 探讨丙戊酸钠对人肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 采用MTT法及克降形成抑制实验观察丙戊酸钠对肺癌SPC-A1细胞的增殖抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞早期凋亡水平,Wcstern blotting检测细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1及Caspase-9,Caspase-3表达的改变.结果 不同浓度的丙戊酸钠作用于肺癌SPC-A1细胞48h,均能显著抑制细胞增殖,SPC-A1细胞的IC50为1.8 mmol/L;丙戊酸钠能显著抑制SPC-A1细胞克隆形成,且导致显著的细胞凋亡,8 mmol/L的丙戊酸钠作用细胞48 h,细胞早期凋亡率达60.44％,细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl,Bcl-2,Mcl-1表达减少,Caspasc-9,Caspase-3蛋白酶切活化.结论 丙戊酸钠通过诱导细胞凋亡,显著抑制肺癌SPC-A1细胞的增殖.
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舟山黄海葵粗提物抗人肺癌SPC-A1细胞的活性研究
目的：研究舟山黄海葵（黄海葵）粗提物体外抗人肺癌SPC-A1细胞的活性。方法：通过反复冻融、丙酮沉淀等方法制备黄海葵粗提物。以质量浓度分别为0（空白对照）、0.625、1.25、2.5 mg/ml的黄海葵粗提物作用于SPC-A1细胞24、48、72 h后，采用MTT法测定细胞活力，计算增殖抑制率、半数抑制浓度（IC50）；24 h后分别通过HE染色、AO/EB荧光染色观察SPC-A1细胞形态学变化。结果：MTT法测定结果表明，黄海葵粗提物对人肺癌SPC-A1细胞具有显著的增殖抑制作用，随着黄海葵粗提物质量浓度的增加以及作用时间的延长，其对SPC-A1细胞的抑制率逐渐增高；作用24、48、72 h后的IC50分别为1.81、1.32、1.18 mg/ml；HE、AO/EB染色结果显示，相较于空白对照组，加药组细胞出现了细胞形态缩小、胞质内出现空泡、核固缩和核消失等明显的凋亡形态学改变。结论：舟山黄海葵粗提物对人肺癌SPC-A1细胞的增殖具有抑制作用。
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金龙胆草总皂苷诱导Hela细胞和SPC-A1细胞凋亡的研究
目的:研究金龙胆草总皂苷对宫颈癌(Hela)细胞和肺癌(SPC-A1)细胞增殖的影响.方法:采用MTT法检测金龙胆草总皂苷对Hela细胞和SPC-A1细胞生长的影响；琼脂糖凝胶电泳法检测药物作用后细胞DNA变化;Western blot法检测药物对半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)含量的影响.结果:10-3～10-7 mol·L-1金龙胆草总皂苷对Hela细胞和SPC-A1细胞的生长抑制有明显的剂量和时间依赖性,并诱导细胞发生凋亡；DNA凝胶电泳呈凋亡特有的梯状带；Caspase-3含量在药物作用前后有变化.结论:金龙胆草总皂苷是通过诱导Hela细胞和SPC-A1细胞凋亡而抑制其生长的.
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p16基因转染对肺癌细胞SPC-A1的抑制作用
目的探讨抑癌基因p16对肺癌细胞SPC-A1的抑制作用.方法以Escort脂质体介导p16基因转染肺癌SPC-A1细胞,MTS法测定OD值,计算细胞生长抑制率, 描绘p16基因转染后SPC-A1细胞增殖曲线.结果 p16基因转染对SPC-A1细胞具有明显抑制作用(P<0.05),细胞抑制率为23.18%,细胞增殖曲线较SPC-A1细胞明显降低.紫杉醇对SPC-A1细胞亦有明显抑制作用,抑制率为对37.12%.结论 p16基因转染对肺癌SPC-A1细胞具有明显抑制作用.
