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2-甲氧基雌二醇诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡和P53基因表达的研究
目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡及其机制.方法:采用MTT法检测2-ME2对CEM细胞增殖的影响;DNA Ladder法检测2-ME2对CEM细胞凋亡的影响;RT-PCR法和West-ern blot法分别检测2-ME2对CEM细胞P53基因mRNA和蛋白表达的影响.结果:2-ME2能明显抑制CEM细胞增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;2 μmol/L 2-ME2作用CEM细胞24,48和72 h后,DNA Ladder法检测出DNA密度梯度片段;2μmol/L 2-ME2处理细胞24,48和72 h后,CEM细胞P53基因和蛋白表达均下降,并呈时间依赖关系.结论:2-ME2抗白血病作用主要通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调P53基因及蛋白表达有关.
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2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡机制的研究
为了研究2-甲氧基雌二醇(methoxyestradio1,2-ME)诱导骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞凋亡的机制,将不同浓度的2-甲氧基雌二醇分别与MUTZ-1细胞在体外培养,同时设二甲亚砜和空白对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定2-ME对MUTZ-1细胞的生长抑制率,瑞氏-姬姆萨染色后观察2-ME引起细胞的形态学改变,流式细胞术分析细胞周期和凋亡率的变化,贝克曼全自动生化分析仪(synchron clinical system LX20)检测培养上清液中乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LD)的变化,DNA凝胶电泳验证2-ME诱导的细胞凋亡.结果表明:2-ME对MUTZ-1细胞的增殖具有明显的抑制作用,该细胞凋亡率明显升高,并呈现时间和剂量依赖性,经统计学处理与对照组相比较有显著性差异(P＜0.05).4 μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞12小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征;2-ME作用24小时后MUTZ-1细胞出现G2/M期阻滞;培养上清液中LD含量与对照组相比明显升高,差异具有显著性(P＜0.05);4 μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞48小时后,DNA凝胶电泳可见明显的DNA梯形条带.结论:2-ME对骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1有较强的抗肿瘤效应,可能与细胞G2/M期阻滞引起的细胞凋亡有关;2-ME是一种有发展潜力的治疗骨髓异常综合征的药物.
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Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用
本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇(2-ME)谤导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞凋亡的机制.用2-ME预处理MUTZ-1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1(mcl-1)和bcl-2相关X蛋白(bax)mRNA的表达.结果表明:与时照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl-1 mRNA表达下降(P<0.05),且mcl-1 mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关(r=-0.992,P<0.01),而bax mRNA表达没有明显变化(P>0.05).结论:2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDS细胞凋亡.
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2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖与凋亡的影响
为了探讨2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系增殖及凋亡的影响,并观察其与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠等药物联合时的协同作用,采用台盼蓝染色法检测细胞活力,应用BrdU掺入法检测浆细胞标记指数(PCLI),DNA片段原位末端标记(TUNEL法)检测凋亡细胞.药物协同作用判断标准按金氏公式计算Q值.结果表明,7株骨髓瘤细胞系NCI-H929、HS-sultan、KM3、SK0-007、CZ-1、U266、LP-1经1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时后细胞活力明显受抑制,呈现时间剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).各细胞系对2-甲氧基雌二醇敏感性不同,其IC50介于(20.8±0.27)μmol/L与(34.1±0.57)μmol/L之间.1、4、8、12、16 μmol/L 2-甲氧基雌二醇分别作用12、24、36和48小时可诱导骨髓瘤细胞系凋亡,凋亡率介于9%-33%之间,呈现时间和剂量依赖性,经统计学分析,差异显著(P＜0.05).经12 μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用24小时后浆细胞标记指数(PCLI)由作用前平均(30.14±4.28)%下降到作用后的(14.71±6.27)%,差异显著(P＜0.05).2-甲氧基雌二醇与药物联合作用后计算Q值介于1.13-1.43之间,具有协同作用.结论:2-甲氧基雌二醇可抑制骨髓瘤细胞生长,并可诱导骨髓瘤细胞凋亡,与地塞米松、反应停、三氧化二砷、唑仑膦酸钠联合使用具有协同作用.
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2-甲氧基雌二醇对原代骨髓瘤细胞分化的作用
本研究观察2-甲氧基雌二醇对多发性骨髓瘤患者原代细胞诱导的分化作用.采用CD138+磁珠分离纯化7例骨髓瘤患者原代骨髓瘤细胞,通过形态观察、细胞表面标志分析和细胞分泌轻链蛋白的情况,观察2-甲氧基雌二醇对多发性骨髓瘤原代骨髓瘤细胞分化的影响.结果表明:患者原代骨髓瘤细胞经0.5 μmol/L2-甲氧基雌二醇分别作用36及72小时后,细胞形态向成熟阶段发展,表现为细胞胞核缩小,胞浆丰富,核浆比例下降,核仁减少或消失,核染色质变粗、变密.CD49e阳性细胞率由(11.02±1.75)%(DMSO对照组)增加到(23.80±1.62)%(36小时组)及(35.68±1.85)%(72小时组),差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞分泌轻链蛋白由(225.7±30.4)ng/ml(DMSO对照组)升高到(296.7±18.8)ng/ml(36小时组)及(378.9±15.8)ng/ml(72小时组),差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:较低浓度2-甲氧基雌二醇可诱导骨髓瘤患者原代骨髓瘤细胞向成熟阶段分化.
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2-甲氧基雌二醇增强骨髓瘤细胞U266对硼替佐米敏感性的相关机制研究
本研究旨在探索2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米对人骨髓瘤细胞株U266的协同抑制增殖和诱导凋亡作用及其可能机制.2-ME2、硼替佐米单用以及二者联合分别处理U266细胞,用CCK8方法检测细胞增殖活力,caspase3/7活性法检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期的变化,荧光实时定量PCR检测P21、BAX、BCL-2等mRNA水平变化.结果表明:相比于2-ME2和硼替佐米单用,2-ME2联合硼替佐米处理U266细胞后,细胞增殖明显抑制(p＜0.05),细胞凋亡增加(p＜0.05),细胞周期阻滞于G1-S期;在mRNA水平,P21及BAX表达上调,BCL-2表达下调.结论:2-ME2联合硼替佐米能更有效地抑制U266细胞增殖和诱导凋亡,具有协同作用,其机制可能与其诱导P21及BAX表达上调有关.
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2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ-1细胞诱导分化作用初探
本研究观察2-甲氧基雌二醇(2ME2)对骨髓瘤细胞是否具有直接的诱导分化作用.以自行建立的、能分泌λ轻链蛋白的骨髓瘤细胞系CZ-1细胞为研究对象,通过瑞氏染色观察其形态变化,用流式细胞术分析2ME2作用后细胞表面标志CD49e的表达率,采用免疫比浊法测定培养上清液中λ轻链蛋白浓度.结果表明:CZ-1细胞经0.1-0.5μmol/L 2ME2作用72小时后细胞形态向成熟发展,见核浆比例降低,核仁减少或消失,染色质变得更粗糙更致密;细胞表面标志CD49e表达率明显上调,并呈浓度依赖性,与对照组比较统计学意义明显;0.1和0.5μmol/L 2ME2处理72小时后,CZ-1细胞分泌λ轻链蛋白分别由29.3±2.77 μg/ml增至35.97±2.6μg/ml(P＜0.05)和增至79.67±1.88μg/m1(P＜0.01),显示浓度效应依赖关系.结论:较低浓度2ME2能促使CZ-1细胞向成熟阶段分化,2ME2这一作用的发现能为骨髓瘤的治疗提供新的有效的方法.
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2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响
本研究探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对慢性髓系白血病(CML)K562细胞caspase-3和survivin表达的影响.实验分3组:对照组,培养基中不舍2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16 μmol/L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不含RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞.应用TUNEL、流式细胞术(FCM)、半定量RT-PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平.结果表明:2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义(p均<0.01),且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关(γ=0.845,P=0.034).随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05);且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关(γ=-0.956,P-0.001).随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义(p均<0.01),且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关(γ=0.966,P=0.001).结论:2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值.
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2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡及机制研究
本研究探讨2.甲氧基雌二醇(2-ME2)对K562细胞的诱导凋亡作用及其机制.采用不同浓度2-ME2处理K562细胞,MTT法检测K562细胞的增殖活性,DNA琼脂糖凝胶电泳和AnnexinV/PI双染色法检测K562细胞的凋亡效应.流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化,RT-PCR和Western blot方法分别检测相关基因mRNA和/或蛋白的表达变化.结果表明:2-ME2抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;48小时的半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;2 μmol/L 2-ME2作用于K562细胞24、48、72小时,DNA凝胶电泳分析可见典型DNA梯形条带;AnnexinV/PI双染色法检测显示,细胞凋亡率分别为13.78%、22.32%和29.43%,而对照组凋亡率仅为1.78%(P<0.05);1、2和4 μmol/L 2-ME2分别处理K562细胞24小时,流式细胞术检测显示细胞线粒体膜电位下降;2 μmol/L2-ME2处理K562细胞24、48和72小时,K562细胞中bcr/abl、bcl-2 mRNA表达下调,而bax mRNA表达上调,Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP(116 kD)和p-Akt蛋白表达下调,胞浆Cyto-C和PARP活性片段(85 kD)表达上调.而对总Akt蛋白表达无影响.结论:2-ME2通过升高bax/bcl-2比值降低线粒体膜电位、促使细胞色素C(Cyto-c)释放入胞浆、触发K562细胞的线粒体凋亡途径,活化caspase-3,导致K562细胞凋亡并抑制其增殖;通过下调bcr/abl mRNA表达以阻断PI3K/Akt信号通路也参与了该过程.
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2-甲氧基雌二醇对脊髓损伤大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响
目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡的影响.方法:将成年雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、脊髓损伤组(n=24)、2ME2治疗组(n=24).采用改良的A1len法制作脊髓损伤模型,造模成功后1、3、7、14、21、28d应用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后连续7天对2ME2治疗组大鼠腹腔注射2ME2(24mg/kg),第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数.结果:脊髓损伤组及2ME2治疗组损伤后随时间延长BBB评分升高,其中2ME2治疗组损伤后第14、21、28天BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有显著性意义(P＜0.05).与假手术组(4.583±2.234)比较,脊髓损伤组(33.417±4.274)及2ME2治疗组(22.250±4.048)免疫荧光染色caspase-3蛋白表达阳性细胞数显著增加,2ME2治疗组caspase-3蛋白表达阳性细胞数较脊髓损伤组显著减少,差异具有显著性意义(P＜0.05).与假手术组(12.25±2.67)相比,脊髓损伤组(49.17±4.75)及2ME2治疗组(38.67±4.44)凋亡细胞数显著增多,2ME2治疗组凋亡细胞数较脊髓损伤组显著减低,差异具有显著性意义(P＜0.05).结论:2ME2改善脊髓损伤大鼠模型脊髓损后的运动功能,具有神经保护作用;2ME2降低脊髓损伤大鼠模型脊髓损后caspase-3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡.
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荧光探针JC-1检测骨髓增生异常综合征细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化
目的 探讨荧光探针JC-1在检测细胞凋亡早期线粒体膜电位(△Ψm)中的应用.方法 2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡,利用新型荧光探针JC-1标记MUTZ-1细胞,在FACS Calibur流式细胞仪(FCM)上检测细胞内JC-1荧光强度的变化;在荧光显微镜下观察和计数细胞内JC-1荧光颜色的改变.结果 对照组MUTZ-1细胞线粒体△ψm维持较高,JC-1在线粒体内形成聚合物,发出橘红色荧光;用药组MUTZ-1细胞线粒体△ψm下降,JC-1聚合物分解成单体,发出绿色荧光.MUTZ-1细胞线粒体△Ψm的下降随着时间延长而逐渐增强,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);随着药物浓度的增加,细胞线粒体△Ψm下降增强,在4 μmol/L时线粒体△Ψm下降达到大值,以后线粒体△Ψm下降趋势减缓.结论 荧光探针JC-1结合FCM和荧光显微镜可以准确、直观地检测凋亡早期线粒体△Ψm的变化,为2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡机制的研究提供了重要手段.
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17β-雌二醇和2-甲氧基雌二醇对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1/一氧化氮体系的影响
目的：探讨17β-雌二醇（E2）及2-甲氧基雌二醇（2ME）对慢性低氧性肺动脉高压大鼠体内内皮素-1（ET-1）/一氧化氮（NO）体系的影响。方法：雌性SD大鼠48只，按随机数字表法平均分为6组（各组n=8）：假手术组、去势组、低氧组、去势+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组。去势组行卵巢切除术；非去势组打开腹腔找到卵巢后不做处理直接还纳缝合。术后去势+低氧+E2组皮下注射E2[20μg/（kg·d）]，去势+低氧+2ME组皮下注射2ME[240μg/（kg·d）]，其他组皮下注射生理盐水（0.1 ml/d）。低氧组大鼠置于低氧箱内饲养，非低氧组大鼠呼吸正常空气。连续饲养8周以建立低氧性肺动脉高压模型。分别测定血清ET-1、NO水平、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性及肺组织内皮素A受体（ETAR）、内皮素B受体（ETBR）、eNOS 表达变化。结果：低氧组、去势+低氧组大鼠肺小动脉管壁增厚，管腔变窄明显，平均肺动脉压（mPAP）显著高于假手术组（P均<0.01）；E2和2ME干预组大鼠上述形态学及mPAP改变相对较轻。与假手术组相比，去势组和低氧组血清ET-1和肺组织ETAR mRNA及蛋白水平均明显升高，ETBR mRNA及蛋白水平明显下降（P均<0.01）；去势+低氧组以上指标变化更显著；E2和2ME干预后血清ET-1和肺组织ETAR表达明显下降，但仍高于假手术组，同时ETBR 表达明显上升，但仍低于假手术组（P均<0.01）；且去势+低氧+2ME组血清ET-1水平低于去势+低氧+E2组（P<0.05）。与假手术组相比，去势组肺组织eNOS蛋白水平明显下降（P<0.01）；低氧组血清NO水平及肺组织eNOS蛋白水平明显下降（P<0.05或P<0.01）；去势+低氧组血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS mRNA和蛋白水平均明显下降（P均<0.01）；去势+低氧+E2组和去势+低氧+2ME组上述指标较去势+低氧组均明显上升（P<0.05或P<0.01），但仍低于假手术组（P均<0.05）。结论：E2及2ME均能显著降低血清ET-1水平，减少肺组织ETAR表达，增加ETBR的表达，升高血清NO水平、eNOS活性及肺组织eNOS表达，通过改善ET-1/NO体系平衡部分逆转肺动脉高压。
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2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡的机制研究
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562细胞的凋亡诱导效应及其作用机制.方法 使用不同浓度2-ME(0,5,10,20,40 μmol/L)作用于K562细胞,48 h后用流式细胞术检测2-ME作用后K562细胞的凋亡率的变化;用western blot方法检测2-ME作用48 h后K562细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达.结果 (1)2-ME在5～40 μmol/L浓度范围内作用48 h对K562细胞有凋亡诱导作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),这种作用呈剂量依赖关系;(2)2-ME作用48 h后,K562细胞Bcl-2蛋白的表达较对照组减少,差异有显著性(P<0.05),而Bax和Caspase-3表达较对照组增高,差异有显著性(P<0.05).结论 2-ME可能通过线粒体途径诱导K562白血病细胞凋亡.
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2-甲氧基雌二醇对瘢痕疙瘩成纤维细胞活性及Bcl-2和Bax表达水平的影响
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对瘢痕疙瘩成纤维细胞活性及细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达水平的影响.方法 对6例胸部瘢痕疙瘩患者经手术切除的瘢痕疙瘩组织行成纤维细胞原代培养,取第3代细胞分为对照组(K组)、DMSO对照组(CTL组)及实验组(2ME2组),分别用常规培养基、含有0.7‰DMSO的培养基、含有6.975μmmol/L 2ME2+0.7‰DMSO的培养基进行培养,培养24 h后通过CCK8细胞活性试验和蛋白质印迹(Western Blot)法检测细胞活性及Bcl-2、Bax蛋白的表达水平.结果 细胞培养24 h后,2ME2组可见细胞凋亡形态,细胞膜内陷,细胞质成分减少.2ME2组的细胞活性为(50.40％±5.59％),明显低于K组的(99.12％±7.39％)和CTL组的(98.67％±3.78％),差异均有统计学意义(P﹤0.001).Western Blot结果显示,2ME2组的Bcl-2蛋白表达水平为(0.11±0.04),高于K组的(0.06±0.02)和CTL组的(0.07±0.01),差异均有统计学意义(P﹤0.05);2ME2组的Bax蛋白表达水平为(2.64±3.12),高于K组的(0.40±0.47)和CTL组的(0.54±0.50),差异均有统计学意义(P﹤0.05);2ME2组的Bcl-2/Bax比值为(0.08±0.06),明显低于K组的(0.61±0.62)和CTL组的(0.53±0.48),差异均有统计学意义(P﹤0.001).结论 2ME2能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,提高Bcl-2和Bax的表达水平,降低Bcl-2/Bax的比值,促进细胞凋亡.
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2-甲氧基雌二醇静脉乳剂性质及初步安全性评价
目的:评价2-甲氧基雌二醇静脉乳剂的性质及初步的安全性,为进一步临床研究奠定基础.方法:依据相关指导原则对2-甲氧基雌二醇静脉乳剂的理化性质、稳定性、体外释药、溶血性及过敏性进行研究.结果:理化性质及稳定性符合<中华人民共和国药典>对静脉乳剂的要求,2-甲氧基雌二醇静脉乳剂体外释放度在30 h达(92.6±4.2)%,溶血度小于5%,无过敏反应.结论:2-甲氧基雌二醇静脉乳剂性质稳定,无溶血性及过敏反应,体外释药显示有一定的缓释作用,具有临床应用前景.
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新生血管抑制剂3-(4-羟基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羟基香豆素及其类似物的合成研究
为探索新生血管抑制剂2-甲氧基雌二醇的非甾体模拟物,首先设计并合成了3-(4-羟基苯基)-4-甲基-6-甲氧基-7-羟基香豆素(2a),并通过一条简易方便的路线进一步完成了2a 3-苯环对位含不同取代基的类似物的合成,以研究该类化合物的新生血管抑制活性以及该特殊位点对活性的影响.初步的生物活性测定显示,化合物2a和2d(IC50=61.0和76.7μM)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)具有抑制活性,同时该类化合物3-苯环对位上取代基团体积的大小对生物活性有着重要影响.
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2-甲氧基雌二醇联合环磷酰胺对小鼠晚期乳腺癌模型的抑瘤作用
目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)和环磷酰胺(CTX)对小鼠晚期乳腺癌模型的抑瘤作用及两者结合的疗效.方法:将BALB/c 4T1乳腺癌模型小鼠,随机分为生理盐水对照组、2-ME2组、CTX组、2-ME2+CTX联合组,观察肿瘤生长情况;给药21d后,处死小鼠并分离瘤组织和双肺,计算抑瘤率和肺转移率;免疫组化SP法检测瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达以及微血管密度(MVD).结果:2-ME2+CTX联合组的抑瘤率高于2-ME2组、CTX组,差异有统计学意义(P＜0.05);2-ME2+CTX联合组小鼠肺脏转移灶数目明显低于2-ME2组及CTX组,差异有统计学意义(P＜0.05);2-ME2+CTX联合组移植瘤MVD及HIF-1α、VEGF蛋白表达明显低于2-ME2组和CTX组(P＜0.05).结论:2-ME2联合CTX应用对小鼠乳腺癌的疗效优于单用CTX或2-ME2;在抑制小鼠乳腺癌移植瘤血管新生方面,2-ME2、CTX具有协同作用.
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低剂量2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞中PRDM1基因两种同源异构体表达的影响
目的 探讨低剂量2-甲氧基雌二醇(2ME2)诱导骨髓瘤细胞分化过程中对PRDM1基因两种同源异构体(包含PR结构域的PRDM1α和缺失PR结构域的PRDM1β)表达的影响.方法 以人骨髓瘤细胞系NCI-H929、RPM18226、KM3和LP-1细胞作为研究对象,采用实时定量RT-PCR方法 检测低剂量2ME2(终浓度0.5μmoL/L)作用前后PRDM1α和PRDM1β的表达情况.结果 0.5μmoVL2ME2处理后.在4个MM细胞系中均出现PRDM1基因表达上调,两种同源异构体的表达水平随着2ME2作用时间的延长均有不同程度的增加,并且PRDM1α/PRDM1β比值显著上升,在NCI-H929细胞PRDM1α/PRDM1β比值由基础值1.461±0.033上升至作用72 h时的2.663±0.381(P<0.01),RPMl8226细胞由1.929±0.334上升至2.727±0.362(P<0.05)、KM3细胞由1.471±0.012上升至4.367±0.243(P<0.01)、LP-1细胞由1.660±0.042上升至3.059±0.167(P<0.01).结论 低剂量2ME2诱导骨髓瘤细胞发生分化的同时上调PRDM1α和PRDM1β的表达,但是具有潜在抑癌作用的PRDM1α上调程度更加显著,因而PRDM1α/PRDM1β比值随着2ME2作用时间的延长显著上升,与细胞分化程度呈正相关,并且与PRDM基因家族的正、负作用机制相符合.
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2-甲氧基雌二醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及对端粒酶活性的影响
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞凋亡及其对细胞端粒酶活性表达的影响,以及细胞凋亡和端粒酶活性之间的相关性.方法 采用不同浓度的2-ME处理MUTZ-1细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的改变;用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性变化.结果 1、2和4 μmol/L 2-ME分别作用MUTZ-1细胞12 h,流式细胞术检测出G0/G1期和S期细胞逐渐减少,G2/M期细胞明显增多(P＜0.05),细胞被阻滞于G2/M期;1和2 μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞12 h,两组凋亡率均无明显增加(P＞0.05);1、2和4μmol/L 2-ME作用MUTZ-1细胞36 h时,凋亡率为(12.87±0.86)%～(21.82±1.71)%,2-ME诱导细胞凋亡具有时间和剂量依赖性;2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡的同时伴随着端粒酶活性下调,且随着2-ME浓度增加和作用时间延长,端粒酶活性抑制作用增强;端粒酶活性下调与G2/M期细胞数呈负相关(r=-0.979,P=0.021),与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.970,P=0.030).结论 2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡并抑制其端粒酶活性可能是其抗肿瘤的机制之一.
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高剂量二甲氧基雌二醇对炎症的保护作用
[目的]利用重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠模型研究二甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2MEO)的抗炎作用,并分析和预测其潜在的抗炎作用分子机制.[方法]本研究通过对建立的SAP大鼠模型来评价2MEO的抗炎活性,结合分子对接和蛋白质结构分析等方法预测其抗炎作用机制.[结果]2-MEO组,胰腺的炎性改变较SAP组都有一定的减轻.在术后6h,高剂量2-MEO组的血淀粉酶较SAP组显著降低(P＜0.05),高剂量2-MEO组术后6h肺的干湿比显著高于SAP组(P＜0.05).分子对接预测了2MEO对糖皮质激素受体配体结合结构域(GR-LBD)具有潜在的亲和能力.IL-12在肺泡灌洗液和腹水中的表达,高剂量2-MEO组显著低于SAP对照组(P＜0.05).[结论]高剂量的2-MEO表现出一定的炎症保护作用,可能通过识别和激活糖皮质激素受体,调节炎症相关细胞因子表达,发挥抗炎作用.
