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2-甲氧基雌二醇诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡和P53基因表达的研究
目的:研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡及其机制.方法:采用MTT法检测2-ME2对CEM细胞增殖的影响;DNA Ladder法检测2-ME2对CEM细胞凋亡的影响;RT-PCR法和West-ern blot法分别检测2-ME2对CEM细胞P53基因mRNA和蛋白表达的影响.结果:2-ME2能明显抑制CEM细胞增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为2μmol/L;2 μmol/L 2-ME2作用CEM细胞24,48和72 h后,DNA Ladder法检测出DNA密度梯度片段;2μmol/L 2-ME2处理细胞24,48和72 h后,CEM细胞P53基因和蛋白表达均下降,并呈时间依赖关系.结论:2-ME2抗白血病作用主要通过诱导细胞凋亡实现的,其机制与下调P53基因及蛋白表达有关.
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人端粒酶逆转录酶基因反义核酸对CEM细胞系端粒酶活性的影响
为了探讨人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的全硫代修饰反义寡核苷酸(antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide, ASODN)对CEM细胞端粒酶活性的影响,采用端粒酶聚合酶链反应-酶联免疫测定法检测CEM细胞的端粒酶活性,采用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERT基因mRNA的表达水平,以间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达含量的变化.结果显示: hTERT ASODN作用于CEM细胞后, hTERT mRNA表达水平明显降低; ASODN与CEM细胞共同孵育48小时,hTERT蛋白表达阳性率降为(40.43±2.07)%, 72小时hTERT蛋白表达阳性率降为(15.26±2.74)%,而hTERT正义核酸作用CEM细胞24,48,72小时,对hTERT mRNA及蛋白表达水平均无影响; hTERT基因ASODN作用于CEM细胞48,72小时,其端粒酶活性明显降低,分别与正义寡核苷酸组、空白对照组相比有显著性差异(P<0.05).结论:hTERT基因反义寡核苷酸能特异性地抑制CEM细胞的端粒酶活性.
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钙及钙加足叶乙甙在诱导人T淋巴细胞细胞株(CEM)细胞凋亡的作用
探讨钙及钙加化疗药物足叶乙甙在诱导CEM细胞凋亡中的作用,采用CEM细胞与不同浓度的钙、足叶乙甙、钙加足叶乙甙共同培养,分别测定细胞内钙变化和凋亡细胞,并作DNA凝胶电泳鉴定凋亡的存在.结果显示:各组不同时间点均有细胞凋亡发生,同时伴有细胞内钙增加.因而,钙可诱导CEM细胞凋亡,并可协同化疗药物促进细胞凋亡;细胞凋亡发生与细胞内钙浓度有关.
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江西眼镜蛇细胞毒素对白血病CEM细胞的抑制作用
目的:研究江西眼镜蛇细胞毒素对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法:以急性T淋巴细胞白血病CEM细胞作为研究对象,采用CCK-8比色试验检测江西眼镜蛇细胞毒素对CEM细胞的抑制作用;光镜下观察细胞毒素作用CEM细胞后的抑制情况和细胞形态学改变;Western blotting检测细胞毒素对CEM细胞的凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达影响.结果:江西眼镜蛇细胞毒素能明显抑制CEM细胞的增殖,抑制率与剂量成正相关;细胞毒素高浓度(2μM以上)作用下,抑制作用随时间延长呈现先增加后有所降低的趋势,佳的作用时间在24h,此时IC50为1.613μM;细胞毒素在低浓度(0.25μM以下)时,随着作用时间的延长,抑制作用迅速下降.倒置显微镜下观察到各给药组作用24h后CEM细胞数目随药物浓度的增加而减少且折光能力也逐渐降低.光镜下观察到各给药组CEM细胞体积明显缩小,胞膜皱缩,甚至还个别细胞出现核膜裂解、染色质分割成块状.Western blotting检测到眼镜蛇细胞毒素不同浓度组的Caspase-3、Caspase-8蛋白表达比对照组均有增加,以高浓度(2μM)组增加明显.结论:江西眼镜蛇细胞毒素可以抑制CEM细胞增殖,其机制可能与其诱导CEM细胞凋亡有关.
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山豆根水提物对白血病CEM细胞生长抑制及其机制研究
目的 研究山豆根水提物对白血病CEM细胞的生长抑制及其可能机制.方法 以人类T淋巴细胞白血病CEM细胞作为研究对象,采用MTT实验检测山豆根对CEM细胞的抑制率；光镜、电镜技术观察CEM细胞形态结构的改变；琼脂糖凝胶电泳检测山豆根水提取物对CEM细胞的诱导凋亡作用.结果 山豆根水提物能明显抑制CEM细胞的生长,药物浓度在0.019 mg/ml作用48 h后,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为9.728mg/m];光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩、聚集,边聚于核膜下呈典型的凋亡特征；琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带.结论 山豆根水提物对白血病CEM细胞的生长具有明显的抑制作用,抑制白血病CEM细胞生长的机制之一是诱导CEM细胞凋亡.
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白花蛇舌草水提物抗白血病CEM细胞的增殖作用及机制
目的 观察白花蛇舌草水提物对CEM细胞增殖影响及其机制.方法 对CEM细胞进行细胞培养.采用台盼蓝拒染法,镜下计数活细胞数,绘制生长曲线,检测白花蛇舌草水提物对CEM细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草水提物对CEM细胞的诱导凋亡作用.结果 白花蛇舌草水提物终浓度0.64,3.2,16μg/ml均显著抑制CEM细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性.琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡条带,而空白对照组没有出现梯形条带.结论 白花蛇舌草水提物对CEM细胞生长具有显著抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是其主要机制之一.
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白花蛇舌草对白血病CEM细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究
目的 研究白花蛇舌草对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色实验检测白花蛇舌草对CEM细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡形态结构的改变;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 白花蛇舌草能明显抑制CEM细胞的生长,药物浓度在0.025 6 μg/ml即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.128 μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;流式细胞术证实白花蛇舌草能诱导CEM细胞凋亡,凋亡率也呈剂量和时间依赖性.结论 白花蛇舌草对白血病CEM细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一.
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附子水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的实验研究
目的 研究附子水提物对白血病CEM细胞增殖的影响及其可能机制.方法 应用不同浓度的附子水提取物作用于白血病CEM细胞24、48、72h后,经MTT试验计算其抑制率;镜下观察CEM细胞形态改变;DNA凝胶电泳检测CEM细胞凋亡情况.结果 附子水提物对白血病CEM细胞具有较强的增殖抑制作用,其抑制作用呈现出时间和剂量依赖性,与对照组比较存在极显著性差异(P＜0.01).附子水提物作用CEM细胞24、48、72h后的半数抑制生药浓度(IC50)分别为1.74,0.15和0.04mg/ml.实验组镜下CEM细胞体积缩小,胞膜皱缩,膜表面微绒毛发生缺失或脱落,胞浆浓缩,细胞核固缩,染色质边集、凝聚,附在核膜周边,出现新月形、圆形等凋亡小体的特征性改变.凝胶电泳见附子提取物处理组出现了明显的DNA梯形条带.结论 附子水提物具有抑制白血病CEM细胞的增殖作用,其抑制机制可能是通过诱导细胞凋亡而实现的.
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肿节风水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的机制
目的 探讨肿节风水提物诱导CEM细胞凋亡作用的机制.方法 用浓度不同的肿节风水提物对CEM细胞发生作用24、48、72h后,采用逆转录PCR技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax和p53的表达,研究肿节风诱导白血病CEM细胞凋亡的机制.结果 肿节风水提物能降低CEM细胞bcl-2基因的表达,并随药物浓度的升高、作用时间的延长,bcl-2基因的表达逐渐下降,作用48、72h后,与对照组比较有显著差异(P＜0.05);同时能增强bax和p53基因表达,且随用药浓度的加大和作用时间的延长呈正比关系,与对照组比较有显著差异(P＜0.05).结论 肿节风水提物诱导白血病CEM细胞凋亡的机制与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达,使bcl-2/bax的比值下降,同时还与上调p53基因的表达有关.
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甲基化抑制剂对CEM细胞EphB4基因表达及细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5 -aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对人急性淋巴细胞白血病细胞株CEM中抑癌基因EphB4的转录调控作用及对CEM细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据.方法 采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测EphB4基因甲基化水平,荧光定量PCR法(QPCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后EphB4基因mRNA及蛋白表达水平；MTS法检测不同剂量(1.0、2.5、5.0 μmol/L)的5-aza-CdR作用于CEM细胞0h、24h、48 h、72 h、96h对CEM细胞存活率的影响,流式细胞仪分析5 -aza-CdR作用96h对CEM细胞周期及凋亡的影响.结果 CEM细胞中存在EphB4基因的甲基化,甲基化水平为31.4％；不同浓度5-aza-CdR作用后CEM细胞甲基化水平均下降.5-aza-CdR作用使CEM细胞中EphB4基因的mRNA和蛋白表达上升；5-aza-CdR明显抑制CEM细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关.5-aza-CdR 处理96h后,早期凋亡由4.1％上升为24.8％.用药96 h后,CEM细胞G1期由62.4％降至46.8％,G2期由2.1％升至16.2％,细胞阻滞于G2期.结论 特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使CEM细胞中沉默的EphB4基因重新表达,并可抑制白血病细胞增殖和诱导其凋亡.
关键词： 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 Ephb4基因 增殖 凋亡 CEM细胞 -
长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的建立及其生物学特性
目的 建立白血病多药耐药细胞株CEM/VCR,探讨其生物学特性.方法 以白血病CEM细胞为亲本细胞,通过逐步增加长春新碱的浓度联合大剂量间断冲击诱导方法建立对长春新碱耐药的白血病CEM/VCR细胞株.MTT实验检测耐药细胞株对常用化疗药物阿霉素(ADM)、阿糖胞苷(Ara-C)、表柔比星(EPI)、长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)及门冬酰胺酶(L-ASP)的耐药性,计算出CEM和CEM/VCR细胞的半数抑制浓度(IC50)和耐药倍数(RI);光镜下观察其细胞形态学变化,绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR半定量检测MDR1 mRNA的表达.结果 历时14个月,传代110代,成功建立可操作的、重复性好的CEM/VCR耐药细胞株,该细胞株能够在含0.01μg/mL VCR条件下长期生存.ADM、Ara-C、EPI、VCR、DNR及L-ASP作用CEM细胞72h的IC50分别为(0.009 9±0.001 8)、(0.0097±0.001 7)、(0.011 8±0.005 1)、(0.002 7±0.000 3)和(0.0 085±0.000 9)μg/mL及(7.679 4±0.058 3)u/mL,而作用CEM/VCR细胞株72h的IC50分别为(5.597 6±0.1138)、(0.105 5±0.0041)、(0.897 9±0.069 0)、(2.5259±0.098 2)和(1.356 3±0.033 5)μg/mL及(3 354.796 5±9.012 8)u/mL,其RI分别为563.71、10.79、75.55、905.34、158.08和436.85倍,差异有统计学意义(P＜0.05),说明耐药细胞株CEM/VCR不仅对VCR耐药,还存在交叉耐药;光镜下,CEM/VCR细胞与CEM细胞相比,其体积较小;CEM细胞、CEM/VCR细胞的倍增时间分别为(25.09±0.78)h和(24.27±0.79)h,差异无统计学意义(P＞0.05);两种细胞在G0/G1期、S期的分布差异无统计学意义(P＞0.05),在G2/M期的分布差异有统计学意义(P＜0.05);耐药细胞株CEM/VCR的MDR1mRNA表达水平高于亲本细胞CEM,分别为(1.012±0.031和0.187±0.006)(P＜0.01).结论 成功建立了一株白血病多药耐药细胞株CEM/VCR.该细胞株可以成为研究长春新碱获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型.
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长春新碱对白血病CEM细胞生长抑制及诱导凋亡作用的研究
目的 探讨长春新碱 (vincristine,VCK)对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法采用MTT比色试验检测长春新碱作用于CEM细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术检测凋亡率、细胞周期分析探明细胞凋亡的可能机制.结果长春新碱能显著抑制CEM细胞的生长,其抑制作用具有一定的时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为0.16μg/mL;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;随药物浓度增加和时间延长,CEM细胞凋亡率增大,同时G2/M期细胞减少,S期细胞相对增多.结论长春新碱对白血病CEM细胞具有显著的抑制作用,其机制可能主要是抑制细胞有丝分裂时纺锤体形成,阻滞细胞分裂,从而诱导细胞凋亡.
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5-Aza-CdR对CEM细胞生长抑制的实验研究
目的:观察不同剂量5-氮杂-2 '-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)在体外作用48 h 对人急性淋巴细胞白血病CEM细胞生长的影响.方法:用MTS法及流式细胞仪分析5-Aza-CdR对CEM细胞的生长抑制情况.结果:1.0、2.5、5.0μmol/L的5-Aza-CdR处理CEM细胞48 h,对CEM细胞的抑制率分别为1.6％、5.6％、7.5％,5.0 μmol/L有明显抑制作用(P＜ 0.01); 5-Aza-CdR可使CEM细胞凋亡率增加,且作用呈浓度依赖性,1.0、2.5、5.0μmol/L组细诱导胞早期凋亡率分别为4.8％、8.2％、13.8％.结论:5-Aza-CdR能抑制CEM细胞生长,并且可诱导其凋亡.
关键词： 细胞凋亡 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 CEM细胞 生长抑制 -
肿节风对白血病CEM细胞的抑制作用
目的:研究肿节风水提物对白血病CEM细胞的抑制作用及其机制.方法:以白血病CEM细胞作为研究对象,采用MTT比色试验检测肿节风水提物对CEM细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察肿节风水提物作用CEM细胞后其形态的改变;DNA琼脂糖凝胶电泳检测肿节风水提取物对白血病CEM细胞的凋亡作用.结果:肿节风水提物能明显抑制CEM细胞的生长,生药浓度在1.79mg/ml作用24h后,即具有显著的抑制作用,抑制率随剂量的加大和时间的延长而增强,作用48h的半数抑制生药浓度(IC50)约为24.2mg/ml;与对照组相比,实验组光镜、电镜下可见细胞体积缩小,胞浆浓缩、细胞膜皱缩,核解聚、染色质明显浓缩、聚集,边聚于核膜下,甚至形成凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带.结 论:肿节风水提物对白血病CEM细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导细胞凋亡可能是其抑制白血病CEM细胞生长的机制之一.
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MAPK信号转导系统在地塞米松诱导的CEM细胞增殖及凋亡中的作用
目的:探讨MAPK信号转导系统在地塞米松对CEM细胞增殖及凋亡中的作用.方法:台盼蓝拒染法测定增殖率;形态学及流式细胞仪解析细胞凋亡.结果:单用DEX培养24h-72h,细胞的增殖率分别为62.3%、35.5%、11.6%;SB203580预处理后,细胞的增殖率和单用DEX时相比分别升至82.8%、54.7%和48.1%(P＜0.05);PD98059 预处理后,,细胞的增殖率分别降至52.3%、19.8%和7.1%(P＜0.05);SP600125预处理后,细胞的增殖率分别降至51.2%、19.5%和6.9%(P＜0.05).5ìmol/L DEX处理CEM细胞36h时,亚二倍体细胞为26.2%,显著高于对照组(P＜0.01).SB203580预处理后,亚二倍体细胞由26.2%降至7.1%(P＜0.01);PD98059预处理后,亚二倍体细胞升至38.6%(P＜0.05),SP600125预处理后,亚二倍体细胞升至32.3%(P＜0.05).结论:MAPK信号转导通路参与地塞米松诱导的CEM细胞增殖及凋亡,表现为p38MAPK阻断增殖、促进细胞凋亡,ERK和JNK促进增殖、减少细胞凋亡.
关键词： MAPK信号转导系统 增殖 凋亡 地塞米松 CEM细胞
