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蟾酥对白血病多药耐药细胞CEM/VCR逆转作用的研究
目的 研究蟾酥逆转白血病多药耐药细胞CEM/VCR的作用机制.方法 光镜下观察不同浓度长春新碱(VCR)作用于CEM/VCR细胞和蟾酥处理的CEM/VCR细胞后细胞形态学变化;Western blot检测上述两组细胞P53、Bcl-XL、Bak蛋白的表达.结果 光镜下见各实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩、破损,甚至出现细胞碎片,染色质凝聚成块,似凋亡小体等特征,细胞的这种变化蟾酥处理的实验组更为明显.Western blot结果显示,与对照组比较:各实验组能下调Bcl-XL蛋白的表达,并随药物浓度的升高、作用时间的延长,Bcl-XL蛋白的表达呈下降趋势;各实验组能上调Bak、P53蛋白的表达,且与随药物浓度增加和作用时间的延长呈正比关系,与对照组比较有显著差异(P ＜0.05或P＜0.01).结论 蟾酥逆转白血病CEM/VCR细胞多药耐药的作用机制可能与下调Bcl-XL蛋白和上调Bak蛋白的表达,使Bcl-XL/Bak的比值下降,以及上调P53蛋白的表达,促进CEM/VCR细胞凋亡有关.
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蟾酥逆转白血病多药耐药细胞CEM/VCR的作用及其机制研究
目的 研究蟾酥对白血病多药耐药细胞CEM/VCR是否具有逆转作用,并探讨其逆转作用的可能机制.方法 采用MTr比色实验检测长春新碱(VCR)作用于CEM/VCR细胞和蟾酥处理的CEM/VCR细胞的不同时段的抑制率及半数抑制浓度(IC50);免疫印迹法检测各组P-gp、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 VCR对蟾酥处理的CEM/VCR细胞的抑制率明显高于对CEM/VCR细胞的抑制率(P＜0.05或P＜0.01);蟾酥处理组可将VCR对白血病CEM/VCR细胞作用24、48、72h的IC50值由27.14、16.34、10.01 μg/ml分别降至16.89、6.357、2.224μg/ml,其逆转倍数分别为1.61倍,2.57倍,4.50倍.免疫印迹结果显示,各实验组与对照组比较能下调P-gp、Bcl-2和上调Bax的表达(P＜0.05或P＜0.01),凋亡相关蛋白的这种变化蟾酥处理组更为显著(P＜0.05或P＜O.01).结论 蟾酥能够逆转CEM/VCR细胞的多药耐药性.其机制可能是通过下调P-gp的表达,增强CEM/VCR细胞对VCR的敏感性;同时还与下调Bcl-2和上调Bax的表达,促进CEM/VCR细胞凋亡有关.
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蟾酥对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR抑制作用的研究
目的 研究蟾酥对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色实验检测蟾酥对多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制率;光镜、电镜技术观察蟾酥对CEM/VCR细胞作用后的细胞形态学变化;利用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 蟾酥能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,药物在低浓度0.00896 μg/ml作用CEM/VCR细胞24h即具有显著抑制效应,抑制率为31.67％,药物浓度增大到700μg/ml,作用时间延长至72h时,抑制率高达81.63％,说明抑制率与药物作用浓度及作用时间呈正比关系.蟾酥作用于CEM/VCR细胞24、48及72h的IC50分别为3.32836,1.74344及0.67074 μg/ml;光镜、电镜下见实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩,甚至破损,染色质明显浓缩、聚集,边聚于核膜下,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;流式细胞术证实蟾酥能诱导CEM/VCR细胞凋亡,随着蟾酥剂量的增大和作用时间的延长凋亡率也增大.结论 蟾酥能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,诱导CEM/VCR细胞凋亡可能是其抑制机制之一.
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白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR抑制作用的研究
目的 研究白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色实验检测白花蛇舌草对多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制率;光镜、电镜技术观察白花蛇舌草对CEM/VCR细胞作用后的细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测白花蛇舌草诱导CEM/VCR细胞凋亡作用.结果 白花蛇舌草水提物能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,药物在低浓度20μg/ml作用CEM/VCR细胞24h即具有显著抑制效应,抑制率为23.66％,抑制率与药物作用浓度及作用时间呈正比关系,药物作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为264.70±4.21 μg/ml,浓度为500μg/ml时的抑制率达60.46％;光镜、电镜下见实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩,甚至破损,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示,实验组各条带中出现明显的DNA梯形凋亡条带,且随着药物浓度的加大、作用时间延长,凋亡梯形条带越清晰,凋亡越明显.结论 白花蛇舌草能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,诱导细胞凋亡可能是其抑制机制之一.
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长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的建立及其生物学特性
目的 建立白血病多药耐药细胞株CEM/VCR,探讨其生物学特性.方法 以白血病CEM细胞为亲本细胞,通过逐步增加长春新碱的浓度联合大剂量间断冲击诱导方法建立对长春新碱耐药的白血病CEM/VCR细胞株.MTT实验检测耐药细胞株对常用化疗药物阿霉素(ADM)、阿糖胞苷(Ara-C)、表柔比星(EPI)、长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)及门冬酰胺酶(L-ASP)的耐药性,计算出CEM和CEM/VCR细胞的半数抑制浓度(IC50)和耐药倍数(RI);光镜下观察其细胞形态学变化,绘制细胞生长曲线,并计算细胞倍增时间;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR半定量检测MDR1 mRNA的表达.结果 历时14个月,传代110代,成功建立可操作的、重复性好的CEM/VCR耐药细胞株,该细胞株能够在含0.01μg/mL VCR条件下长期生存.ADM、Ara-C、EPI、VCR、DNR及L-ASP作用CEM细胞72h的IC50分别为(0.009 9±0.001 8)、(0.0097±0.001 7)、(0.011 8±0.005 1)、(0.002 7±0.000 3)和(0.0 085±0.000 9)μg/mL及(7.679 4±0.058 3)u/mL,而作用CEM/VCR细胞株72h的IC50分别为(5.597 6±0.1138)、(0.105 5±0.0041)、(0.897 9±0.069 0)、(2.5259±0.098 2)和(1.356 3±0.033 5)μg/mL及(3 354.796 5±9.012 8)u/mL,其RI分别为563.71、10.79、75.55、905.34、158.08和436.85倍,差异有统计学意义(P＜0.05),说明耐药细胞株CEM/VCR不仅对VCR耐药,还存在交叉耐药;光镜下,CEM/VCR细胞与CEM细胞相比,其体积较小;CEM细胞、CEM/VCR细胞的倍增时间分别为(25.09±0.78)h和(24.27±0.79)h,差异无统计学意义(P＞0.05);两种细胞在G0/G1期、S期的分布差异无统计学意义(P＞0.05),在G2/M期的分布差异有统计学意义(P＜0.05);耐药细胞株CEM/VCR的MDR1mRNA表达水平高于亲本细胞CEM,分别为(1.012±0.031和0.187±0.006)(P＜0.01).结论 成功建立了一株白血病多药耐药细胞株CEM/VCR.该细胞株可以成为研究长春新碱获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型.
