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短棒状杆菌化学成分分析及对骨髓瘤的抑瘤效应研究
目的 分析探讨短棒状杆菌(Cp)化学成分及抗骨髓瘤的抑瘤效果.方法 用Lowry法测定Cp的蛋白质含量;用蒽酮法测量Cp的多糖含量;用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生荧光法对Cp水解液中各种游离氨基酸种类及含量分析;小鼠腹腔注射骨髓瘤细胞,观察Cp抑制骨髓瘤及延长生存期的效果.结果 Cp中蛋白质含量为562.08±18.26 μg/mg;多糖含量为174.77±2.63 μg/mg;除色氨酸被水解而未被检出外,Cp水解液中含有17种氨基酸,其中有7种人体必需氨基酸;对骨髓瘤有明显的抑瘤效果.结论 Cp制剂中合有丰富的蛋白质、多糖成分,且具有很好的抑制骨髓瘤的效果.
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短棒状杆菌细胞壁对膀胱癌细胞抑制效果的检验
目的 检验短棒状杆菌细胞壁提取物对膀胱癌细胞的抑制效果.方法 将3组大鼠分别膀胱灌注短棒状杆菌细胞壁提取物、致癌剂MNU、0.9％氯化钠,灌注9周后提取每组的大鼠膀胱RNA,检测RNA的纯度与浓度.将提取的RNA反转录成cDNA,设计引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增大鼠干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因19(Grim19)、Stat3、β-actin基因.然后对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,用Image J软件对电泳图进行分析.结果 从短棒状杆菌提取物组、致癌剂甲基-亚硝基脲(MNU)组、0.9％氯化钠对照组的大鼠膀胱提取到的RNA浓度分别为53.3、93.4和64.9 ng/μl,OD260/OD280在2.03～2.07.琼脂糖电泳结果表明短棒状杆菌细胞壁提取物组的大鼠膀胱中Grim19基因、Stat3基因均高表达,致癌剂MUN组的大鼠膀胱Grim19基因的表达含量低,Stat3基因表达含量高.而0.9％氯化钠对照组Grim19基因、Stat3基因均正常表达.结论 在患膀胱癌的大鼠体内,膀胱内灌注的短棒状杆菌细胞壁提取物可以有效地提高抑癌基因Grim19基因的表达,同时降低癌基因Stat3基因的表达,表明短棒状杆菌细胞壁提取物是一种潜在的抗膀胱癌药物.
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短棒状杆菌胞壁肽聚糖的实验研究
目的 提取短棒状杆菌的有效成分,观察生物学效应,为研制新型治疗制剂奠定基础.方法 将短棒状杆菌77-1株用冷热外压法获得细胞壁,再经苯酚及三氯甲烷萃取肤聚糖成分.结果 提纯品经紫外吸收测定、淋巴细胞转化试验、抑瘤试验、脾激活试验、毒性试验证实,具有生物学活性及安全性.其主要成分经生化检测含有多肽及聚糖类物质.结论 短棒状杆菌的有效成分是细胞壁上的肽聚糖类物质;实验采用的提纯工艺具有可操作性和实际应用价值,为新产品开发提供了可靠依据.
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酶法处理短棒状杆菌的效果分析
目的 探讨酶法处理短棒状杆菌(Enzyme-digested Corynebacterium parvum product,ECPP)的效果.方法 采用热灭活、超声、Pronase酶消化等方法处理短棒状杆菌(Corynebacterium parvum,CP),电镜观察其结构,并测定其蛋白、多糖及核酸含量.将BALB/c纯系小鼠、青紫蓝家兔和NIH小鼠均随机分为阴性对照组(CK,0.9％ NaCl)、短棒状杆菌制剂(C.parvum product,CPP)组(1 000μg/ml CPP)、低剂量ECPP组(ECPPⅠ组,500μg/mlECPP)和高剂量ECPP组(ECPPⅡ组,1 000 μg/mlECPP),观察BALB/c纯系小鼠脾激活情况、异常毒性及血清IL-2、IFNγ及TNF-α的水平,青紫兰家兔热原反应,NIH小鼠抑瘤效果.结果 电镜观察可见,与热灭活的CP相比,ECPP细胞壁外围厚度明显变薄,细菌内部结构无明显变化;ECPP的蛋白、多糖及核酸含量较CPP均明显下降,且差异均有统计学意义(P＜0.01);ECPPⅡ组小鼠的脾激活指数为2.96,能抑制艾氏腹水瘤,存活率为80％,热原试验合格,异常毒性试验显示其体重增长较CPP组显著,能显著提高小鼠血清中IL-2、IFNγ及TNF-α3种细胞因子的水平.结论 酶法处理短棒状杆菌制剂可降低副反应,提高机体免疫功能,具有良好的抗肿瘤作用,是一种有应用前景的新免疫调节剂.
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短棒状杆菌氨基酸含量分析
目的分析短棒状杆菌(Corynebacterium parvum,Cp)的氨基酸组成及含量.方法用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生荧光法,分析Cp水解液中各种游离氨基酸种类及含量.结果除色氨酸被水解而未被检出外,Cp水解液中含有17种氨基酸,其中有7种人体必需氨基酸.结论对Cp的氨基酸组成及含量进行了分析,为进一步研究其应用提供了依据.
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酶法处理短棒状杆菌对荷瘤鼠脾细胞免疫功能的影响
目的 探讨酶法处理短棒状杆菌(Enzyme-digested Corynebacterium parvum product,ECPP)对荷瘤鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响.方法 将NIH小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(NS)、荷瘤对照组(CK)、阳性对照组(CPP)、低剂量ECPP组(ECPPⅠ,500 μg/ml ECPP)和高剂量ECPP组(ECPPⅡ,1 000 μg/ml ECPP).除NS组经腹腔注射0.2 ml 0.9％ NaCl外,其他4组小鼠均经腹腔注射0.2ml艾氏腹水瘤(Ehrlich ascites carcinoma,EAC)细胞悬液(5.0×106个/ml),接种次日,每组小鼠腹腔注射相应药物(注射体积均为0.25 ml),每次间隔1d,连续5次,停药次日,颈椎脱臼处死小鼠,检测腹水量；3H-TdR法检测脾淋巴细胞转化能力；流式细胞术分析T淋巴细胞亚群及NK细胞活性；RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFNγ、TNF-α基因mRNA的转录水平.结果 与CK组相比,各给药组均能明显降低小鼠腹水量(P＜0.01),CPP组和ECPPⅡ组间差异无统计学意义(P＞0.05),ECPPⅡ组降低腹水的能力明显高于ECPPⅠ组(P＜0.01)；与NS、CK及ECPPⅠ组相比,ECPPⅡ组可明显提高T、B淋巴细胞的转化能力,增加脾CD4+、CD8+及NK细胞数量(P＜0.01),而与CPP组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；与NS、CK和ECPP Ⅰ组比较,ECPPⅡ组IFNγ、TNF-α基因mRNA转录水平明显提高(P＜0.01),与CPP组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECPP能显著提高荷瘤鼠脾细胞的免疫功能.
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短棒状杆菌有效成分的分离及其作用
目的减轻短棒状杆菌全菌体制剂接种后的局部疼痛等副作用.方法采用超声破碎、蛋白水解及脱脂的方法提取了细胞壁,通过脾激活试验及抑瘤试验,检测纯化的短棒状杆菌细胞壁活性对家兔股四头肌的局部刺激作用及热原反应.结果纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.8,能抑制艾氏腹水瘤的生长,生存率达到80%;家兔股四头肌肌肉注射后未见局部充血坏死;家兔热原试验未见明显发热.结论纯化的短棒状杆菌细胞壁不仅保留了全菌体制剂所具有的活性,而且明显减轻了局部的刺激作用.
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无细胞短棒状杆菌纳米级制剂抗肿瘤作用及机理研究
目的:研究无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)体内抗肿瘤作用及机理.方法:小鼠腹腔注射NCPP与短棒状杆菌制剂(CPP)14 d后测定脾指数.小鼠腹腔注射艾氏腹水癌细胞,于注射癌细胞前1 d及注射后次日起,连续(间隔1 d)腹腔注射NCPP与CPP 5次,计算小鼠存活率.小鼠腹腔注射NCPP和CPP 10 d后测定腹腔巨噬细胞(Mψ)吞噬率、吞噬指数、过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)水平、脾脏自然杀伤(NK)细胞杀伤率及T细胞增殖指数.结果:NCPP组和CPP组与对照组相比:均有明显的抑瘤作用;脾指数均大于2.0;腹腔Mψ吞噬率、吞噬指数、产生过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)水平均有显著性提高(P＜0.01);脾脏NK细胞杀伤率均有明显提高(P＜0.05);脾脏T细胞增殖指数均无明显差异.上述所有实验中,NCPP和CPP 2组间均无明显差异.结论:NCPP具有与CPP相同的脾激活及抑瘤作用,其机理主要是通过激活Mψ及NK细胞吞噬、杀伤功能所致.
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短棒状杆菌菌体细胞与细胞代谢产物生物学活性的比较
欲提高短棒状杆菌制剂的临床应用效果,为该产品进一步精制奠定基础,进行了短棒状杆菌有效成份的研究.在适宜的培养基中,以厌氧法培养短棒状杆菌,分别收获菌体及培养上清,做生物学活性检测.结果显示,菌体细胞内脾激活和抑瘤试验生物学活性显著,细胞代谢产物无生物学活性.实验证实,短棒状杆菌的有效成份在菌体细胞内,与细胞代谢产物无关.
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复方苦参注射液联合短棒状杆菌局部治疗晚期肺癌恶性胸腔积液的临床研究
目的 观察复方苦参注射液联合短棒状杆菌(CP)局部治疗肺癌恶性胸腔积液的疗效.方法 治疗组胸腔内注入复方苦参注射液30 ml+CP4 ml+0.9％ NS20ml+2％利多卡因10 ml,对照组注入CP4 ml +0.9％ NS20 ml+2％利多卡因注10 ml,1次/周×4周后评价疗效、不良反应和PS评分变化.结果 胸水控制有效率、PS评分改善率治疗组(88.9％、93.3％)高于对照组(64.4％、62.2％),胸痛和恶心、呕吐发生率治疗组(33.3％、4.4％)低于对照组(60.0％、22.2％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 复方苦参注射液联合CP局部治疗肺癌恶性胸腔积液疗效好,不良反应少.
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无细胞短棒状杆菌纳米级制剂对小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响
目的:研究无细胞棒状杆菌纳米制剂(Non-cell Nano Scale Product from Corynebacterium Parvum,NCPP)对小鼠腹腔巨噬细胞(PMψ)产生一氧化氮(NO)的影响,探讨其抗肿瘤作用机制,为临床应用提供依据.方法:采用小鼠腹腔注射NCPP与短棒状杆菌制剂(Corynebacterium Parvum Product,CPP),10 d后检测NO水平发现NCPP具有与CPP相同的作用.结果:NCPP组和CPP组与对照组比较,检测结果显示,NCPP和CPP均可明显提高小鼠腹腔Mψ产生NO的水平,两组与对照组相比,有极显著性差异(P＜0.01),但NCPP和CPP两组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:NCPP与CPP具有相同作用,可激活巨噬细胞,分泌产生高水平NO以达到杀伤肿瘤细胞的目的.
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不同方法生产的短棒状杆菌生物学活性比较
提高短棒状杆菌疫苗临床疗效,解决接种后局部硬结,发烧等不良副反应.在菌体菌苗的基础上,采用超声、破碎、离心、胰酶消化脱脂的方法提取细胞壁做脾激活抑瘤试验生物学检定.结果显示,纯化的短棒状杆菌细胞壁可使小鼠脾激活指数达到4.06.能抑制艾氏腹水瘤的生长,而菌体脾指数3.18.实验证实,纯化的短棒杆菌细胞壁菌苗的活性好于菌体菌苗.
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短棒状杆菌外用制剂安全性的评价
研究短棒状杆菌外用剂型,为体外用药开辟新途径.将短棒状杆菌接种在适宜培养基上,连续扩增传代,培养终液稀释成不同浓度.依照新药管理办法,在动物体内进行各种安全性试验.结果显示:经急性毒性试验、长期毒性试验、生殖毒性试验,皮肤光敏试验、局部刺激试验等测定,在动物体内未见到毒性反应.该试验为短棒状杆菌外用制剂的开发提供了安全性依据.
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无细胞短棒状杆菌纳米级制剂抗结核作用及机理研究
目的:研究无细胞短棒状杆菌纳米级制剂(NCPP)体内抗结核作用及机理.方法:NCPP各剂量组与乌体林斯组豚鼠皮下攻击结核杆菌H37RV后,第3,10,17 d肌肉注射给药,于5,7,9周分3批处死动物,取脾查活菌分离数,并做病理镜检.另取小鼠腹腔注射NCPP 10 d后测定腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬率、吞噬指数、过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)水平及脾T细胞增殖指数.结果:NCPP 各剂量组豚鼠脾活菌数于5,7,9周时明显低于对照模型组(P＜0.05),与对照药乌体林斯组相近.亦可减轻结核特异性病理改变.此外,NCPP各剂量组小鼠腹腔Mφ上述各项指标均显著提高(P＜0.01),但脾脏T细胞增殖指数无明显变化.结论:NCPP对结核杆菌感染的豚鼠模型具有明显的免疫治疗作用,其机理主要是通过激活Mφ,且使其产生过氧化氢、一氧化氮水平明显提高,达到杀灭结核杆菌的目的.
