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鼠类感染淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的RT-PCR检测与N基因序列分析
目的 了解宁波市梅山口岸鼠类中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)流行情况和基因序列特征.方法 以LCMVN基因设计2对引物,采用RT-PCR方法对2012年宁波市梅山口岸捕获的鼠类样品进行LCMV检测,并对阳性样品的PCR产物进行测序及同源性和系统进化树分析.结果 共检测53份鼠类样品,其中2份小家鼠样品为LCMV核酸阳性,分离的2株LCMV与国外LCMV分离株的同源性在75％～87％之间,与WHI株同源性高(87％)并在系统发生树上属于同一组.结论 证实当地鼠类中存在LCMV流行,新检测到的2株病毒与国外LCMV分离株存在一定差异.
关键词： 啮齿动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 反转录-聚合酶链反应 序列分析 -
淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)PCR检测方法的建立与初步应用
目的 建立检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的PCR方法.方法 根据LCMV CDNA S片段的GPC和NP基因设计合成4对引物,对标准毒株进行套式PCR扩增并克隆测序,并对15份已知阳性或阴性小鼠鼠脑进行检测.结果 目的片断与LCMV cDNA序列99%同源,对鼠脑的检测结果为10只阳性,5只阴性.结论 检测小鼠鼠脑LCMV的结果准确,证明套式PCR能够应用于LCMV的实验室检测.
关键词： 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 套式PCR 小鼠鼠脑 -
套式PCR检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)方法应用
目的 检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况.方法 采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较.结果 从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在,检出率2/148;ELISA检出率5,148.结论 PCR与ELISA检测方法相结合,准确率高,证明目前小鼠中存在LCMV的感染.
关键词： 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 套式PCR检测 -
五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究
目的 评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒.方法 选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较.结果 国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差低为2倍,差异显著(P<0.05),高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01).结论 除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好.
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淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒核蛋白合成基因的表达及应用
目的用合成基因表达产物取代淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)或其他方法重组蛋白抗原,用于LCMMV感染的诊断.方法采用Prosis软件对LCMV核蛋白(Np)全长氨基酸序列进行亲疏水性分析,合成LCMVsRNA第1816～2178位核苷酸序列编码的Np第380～500位氨基酸基因,克隆在His-tagpET-28a融合表达,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,建立ELISA检测试剂.结果表达产物主要以包涵体形式存在,表达量达20%以上.表达产物经Ni-NTA-Agarose纯化后纯度达到90%以上.经检测93份人血清,有6份病毒抗体阳性,阳性率为6.5%(6/93),与全病毒抗原检测结果7.5%(7/93)相近.结论用合成基因表达产物取代LCMV抗原检测病毒抗体,不仅可以消除病毒传播可能,而且特异性强.为LCMV感染诊断及生物材料质量控制提供有效方法.
关键词： 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 合成基因 重组蛋白 -
ELISA法检测野生和驯养长爪沙鼠携带病毒情况
目的 检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据.方法 制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记.分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清,用间接ELISA进行流行性出血热、淋巴细胞脉络丛脑膜炎等人兽共患病毒及仙台病毒、鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒等啮齿类动物烈性传染病病毒抗体检测,并计算检出率.结果 兔抗沙鼠的IgG抗体ELISA法效价1:64 000以上,满足血清学检测要求.银川地区野生长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体阳性(6.0%),而呼和浩特和驯养的则未检出;但呼和浩特地区的野生长爪沙鼠有淋巴脉络丛脑膜炎病毒抗体检出(13.3%),而银川和驯养长爪沙鼠则没有.仙台病毒抗体的检出率为呼和浩特地区的低(40.0%),宁夏和驯养动物相等(53.3%).结论 两地区野生长爪沙鼠和人工驯养长爪沙鼠病毒抗体的检出种类和检出率有所不同,在制定北京市地方标准时要综合考虑.
