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CRISPR/Cas9基因编辑系统研究进展
CRISPR/Cas9基因编辑系统被广泛应用于生物学及医学各领域.该系统可在RNA的引导下对特定DNA位点进行靶向编辑.脱靶效应和编辑效率是该系统面临的两大问题.目前已有诸多研究从减少脱靶效应和提高编辑效率的方面对该系统进行优化,将有助于其安全性的提升及应用范围的拓展.
关键词： CRISPR/Cas9 基因编辑 脱靶效应 编辑效率 -
CRISPR/Cas9系统——靶向基因组编辑的新策略
CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统.Ⅱ型CRISPR/Cas系统经人工改造为由Cas9核酸酶和特异的sgRNA构成的新型靶向基因组编辑技术,即CRISPR/Cas9系统.与锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)相比,CRISPR/Cas9系统操作简单,花费低,编辑功能更强.本文综述了CRISPR/Cas9系统的基本结构、作用机制和应用进展,并对其应用前景进行了展望.
关键词： CRISPR/Cas9系统 靶向基因组编辑 分子靶向治疗 脱靶效应 综述 -
小干扰RNA的设计
小干扰RNA(siRNA)是产生RNA干扰的功能分子,在作为基因研究工具和治疗药物方面具有广泛的前景.为了有效地沉默靶基因并减少脱靶效应,需对siRNA进行精确设计.本文从提高siRNA的沉默效率、降低siRNA的序列特异性和非序列特异性脱靶效应、siRNA进入RNA诱导沉默复合物时的序列选择倾向性、化学修饰的种类和位点选择策略、靶序列的位置和结构选择等几个方面提出并分析了设计siRNA时需要遵循的原则.
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CAR-T的临床应用及潜在安全风险分析
目的 介绍嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞疗法(CAR-T)的发展及临床应用情况,探讨疗效影响因素及潜在风险.方法 检索国内外文献资料和相关数据库,分析影响CAR-T疗效和安全性的相关因素.结果CAR-T为广大肿瘤患者提供了新的治疗选择,但其疗效受诸多因素影响,潜在安全性风险不容忽视.结论 尽管目前还存在各种问题,但CAR-T的出现已经使肿瘤的免疫治疗进入一个全新阶段,其应用前景值得期待.
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CRISPR/Cas9基因编辑系统的发展及其在医学 研究领域的应用
近年来,CRISPR/Cas9技术凭借着其操作方便、设计简单、效率高、成本低以及可同时进行多位点编辑等优势,已成为当今热的新一代基因编辑技术.CRISPR/Cas9独特的在RNA引导下对DNA进行靶向编辑的作用机制,不仅拓展了各相关领域的科研工作者们对生物体遗传调控的了解,更显示出优良的便捷性.近十年来,该系统在各生物、医学研究领域应用极为广泛,发展迅速.在医学领域,更是显示出极大的潜力.本文从CRISPR/Cas9基因编辑系统的研究历史、作用机理以及该技术在医学领域的应用等方面综述其新研究进展,为更好地应用和优化CRISPR/Cas9提供参考.
关键词： CRISPR/Cas9 基因治疗 精确编辑 脱靶效应 风险 -
RNA 干扰在肿瘤治疗中的研究进展
恶性肿瘤是威胁人类健康的一大杀手，目前所采取的手术、放化疗等治疗措施效果并不理想。本文介绍了 RNA 干扰（RNAi）的相关作用机制及其在肿瘤治疗中的应用，并叙述了 RNAi 用于治疗时的递送方式、引起的脱靶效应和免疫反应，提示 RNAi 用于治疗时存在的一些问题，通过进一步的研究，基于 RNAi 的肿瘤治疗有望成为一种肿瘤治疗新方法。
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siRNA作为小分子药物的研究现状
RNA干扰(RNAi)主要通过长度只有21～22个核苷酸的小分子干扰RNA(siRNA)与含其互补序列的基因相结合,并抑制该基因的表达,将设计过的siRNA双链作为药物,通过病毒载体表达siRNA前导序列,经细胞间的传递到达药物作用部位,从而达到基因治疗的目的.本文对以siRNA小分子为基础的药物研究进展及其应用的潜在障碍进行了综述.
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CAR-T细胞治疗肿瘤的脱靶效应及其预防策略
嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)是单链抗体的可变区(single-chain variable fragments,scFv)和T细胞信号分子的重组融合蛋白,它使T细胞可以通过非MHC限制性方式识别特异性抗原.近的临床研究证明,CAR-T细胞在治疗B细胞肿瘤中取得了显著效果.但在目前的临床应用中存在诸多限制,尤其是当肿瘤抗原在正常组织中表达时会造成脱靶效应.本文就靶抗原的选择、脱靶效应及相应的预防策略作一综述,期望这些策略的实施,将会提高CAR-T细胞治疗的安全性及有效性,使更多肿瘤患者从中获益.
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在病原微生物中的应用
规律成簇间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)广泛存在于古细菌及细菌中是细菌在长期进化过程中形成的一种获得性免疫系统.近年来以该系统为基础,经过人工改造形成的一种新型基因编辑技术—CRISPR/Cas9在基因工程领域的应用越发广泛;该技术与前两代编辑技术相比,具有结构简单、成本低廉、实用价值较高等优点.自2012年在基因研究领域成功应用后,已成为当前关注度较高的基因编辑工具;该技术在多种真核生物的基因修饰中已得到成功应用,但在病原微生物上却报道较少.本文将从CRISPR/Cas9系统的结构、作用机制及其在病原微生物基因功能研究中的应用等几个方面进行综述为其深入研究奠定基础.
关键词： 基因编辑 CRISPR/Cas9 病原生物 脱靶效应 -
人PTEN基因RNA干扰及其RESC救援慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建人PTEN基因RNA干扰(RNAi)及其逃避RNAi策略结构(RESC)救援的慢病毒载体.方法:利用Invitrogen公司在线软件,针对已筛选确定的PTEN基因RNAi有效靶序列,设计并合成靶序列的oligoDNA,退火形成双链DNA,与经Xba I和XhoⅡ酶切后的pFLRu-GFP载体连接构建成pFLRu-U6-shPTEN慢病毒载体.在此基础上,引入外源设计的PTEN mRNA,与经EcoR I和BamH I酶切后的pFLRu-U6-shPTEN载体连接,从而产生在同一个载体内兼有人PTEN基因shRNA及其救援cDNA同时表达的RESC慢病毒载体pFLRu-U6-rrshPTEN.2者均转入到大肠杆菌XL10感受态细胞,制备质粒并用酶切及测序鉴定.分别用pFLRu-U6-shPTEN、pFLRu-U6-rrshPTEN与pCMV-dR8.2ΔR和pCMV-VSV-G质粒共转染293/包装细胞,包装产生2种慢病毒,收集病毒上清,系列稀释法检测病毒悬液的滴度.结果:氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆、酶切鉴定、U6前引物测序鉴定结果显示pFLRu-U6-shPTEN和pFLRu-U6-rrshPTEN均为阳性克隆,且2种慢病毒的滴度分别为6.6 × 105和5.6 × 105pfu/mL.结论:成功构建出人PTEN基因RNAi及其RESC慢病毒载体.有效地避免了由于脱靶效应所引起的假阳性结果对实验的干扰,为研究PTEN基因功能提供了稳定的转染细胞载体.
关键词： PTEN基因 慢病毒载体 RNA干扰 逃避RNA干扰策略结构 脱靶效应 -
急性白血病患者CAR-T治疗的护理
目的 总结CAR-T治疗急性白血病的护理配合要点,为确保临床应用效果、促进新技术推广提供参考.方法 对17例复发、难治急性淋巴细胞白血病患者采用CAR-T治疗,从细胞采集、回输、回输后并发症的观察与预防处理等各阶段实施密切有效的护理.结果 5例输注后发生细胞因子释放综合征,经对症护理后好转,其余患者未发生肿瘤溶解综合征、脱靶效应、过敏反应;14例患者获得随访,治疗后半年内骨髓均处于完全缓解.结论 CAR-T治疗是急性白血病治疗的新技术,护理人员加强细胞采集阶段护理,严格遵医嘱榆注和观察,早期观察及预防细胞因子释放综合征、肿瘤溶解综合征等并发症,可减轻患者痛苦,保障治疗效果.
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RNA干扰对肝癌细胞乙酰肝素酶表达的影响
目的 观察RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞株Hepal-6中乙酰肝素酶(HPSE)表达的抑制作用.方法 设计针对小鼠肝癌细胞Hepal-6 HPSE mRNA的小干扰RNA(siRNA),以阳离子脂质体LipofectamineTM 2000包埋后转染该细胞株,转染48 h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测Hepal-6细胞HPSE mRNA及蛋白质表达的变化.结果 siRNA各组与正常对照组和阴性对照组比较,HPSE mRNA和蛋白质的表达均受明显抑制(P<0.01),并且呈剂量依赖性.结论 HPSE siRNA可显著抑制小鼠肝癌细胞Hepal-6中HPSE mRNA和蛋白质的表达.
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用于器官移植的基因修饰猪的研究进展
器官的严重短缺是开展移植手术面临的主要难题.经过基因修饰改造的低免疫源性猪有望成为合适的异种器官移植供体.人工核酸内切酶介导的基因组编辑技术,包括ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9技术,极大地促进了异种器官移植的发展,并且可用于高效定向的遗传改造.目前,基因修饰猪的研究正在朝临床应用的方向飞速发展.本文综述了利用基因组编辑技术培育的基因修饰猪的研究进展.
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CRISPR/Cas9系统的脱靶效应及其介导的非编码RNA编辑在人类癌症中的应用
成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR蛋白9(Cas9)系统作为细菌对抗外源入侵DNA的防御机制已经被成功开发应用于真核生物基因组编辑,该系统具有高效准确且可以编辑任意DNA位点的特点,同时也存在较为严重的脱靶效应.癌症目前对于人类依然是严峻挑战,癌症治疗过程中的不良反应使患者十分痛苦,CRISPR/Cas9系统可能实现在基因水平治疗癌症.本文旨在探讨CRISPR/Cas9系统的脱靶效应,为肿瘤治疗的深入研究提供新思路.
关键词： 肿瘤 CRISPR/Cas9系统 脱靶效应 非编码RNA -
第三代基因组编辑技术--CRISPR/Cas9的研究进展
规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)是细菌和古细菌为应对病毒和质粒的攻击演化而来的获得性免疫防御机制。Cas9蛋白可在sgRNA 的指导下对靶基因进行位点专一的双链断裂,细胞借助同源重组机制或非同源末端连接机制对断裂的 DNA 进行修复。CRISPR/Ca59技术简单、高效、精准,可进行多重靶向修饰,已成为继锌指核酸酶及TALE 核酸酶之后的第三代基因组靶向修饰工具,并显示出巨大的优势及广泛的应用前景。本文就对CRISPR/Cas9技术的发展、生物学机制、应用前景尤其是在单基因遗传病基因治疗方面的研究进行阐述,以期为相关领域的研究提供参考。
关键词： CRISPR/Cas9 基因组编辑 脱靶效应 基因治疗 -
CRISPR技术:一个新型基因编辑工具所引发的革命
作为目前受欢迎的基因编辑工具,成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)技术正在基础生物学研究、医学、生物技术等多个领域引起一场新的变革.该文先简单介绍了CRISPR-CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,Cas)系统的发展历史,然后重点介绍了CRISPR工具箱中经典的CRISPR-Cas9工具、后续的CRISPR-FnCas9/RCas9工具以及新兴的CRISPR-Cas13和CRISPR-Cas12a工具,后对这场技术革命背后值得思考的问题进行了评论.
关键词： CRISPR-Cas系统 基因编辑 脱靶效应
