首页 > 文献资料
-
致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测
目的建立多重PCR体系,实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf(epf*)和sly的同步检测.方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列,设计和合成4对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,并对72株种属背景明确的实验菌株(其中猪链球菌48株、阴性对照株24株)及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析.结果48株猪链球菌中,c加2检出率为33 3%(16/48)、mrp检出率为29.2%(14/48)、epf检出率为25%(12/48)、epf*检出率为6.3%(3/48)、sly检出率为54.2%(26/48),上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符;24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性.结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测,特异性和敏感性好,为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段.
-
猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白引起血小板聚集的机制研究
目的 研究猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)引起血小板聚集的作用机制,为猪链球菌临床救治提供科学依据与理论基础.方法 镍柱亲和层析法纯化MRP-N、MRP-C蛋白,通过血小板聚集仪、血栓弹力图仪以及扫描电子显微镜观察MRP蛋白引起血小板聚集的情况.结果 猪链球菌2型野生株可以引起血小板的聚集,而突变株ΔMRP则不能;MRP-N蛋白可以引起血小板的聚集,而MRP-C蛋白则不能;β2整合素受体抑制剂(GPRP)能显著抑制MRP引起的血小板聚集.结论 MRP是猪链球菌2型引起血小板聚集的关键因子,MRP通过β2整合素受体途径引起血小板的聚集.
-
四川资阳猪源猪链球菌病病原的分离与鉴定
目的四川省部分地区发生的不明原因的猪源人畜共患病病原菌的分离与鉴定.方法采用普通RT-PCR和实时荧光PCR相结合的方法对流感和尼帕病毒的RNA进行检测,在Vero细胞和SPF鸡胚同时进行病毒分离,用血清平板对病料进行细菌分离,同时用革兰染色、生化试验、血清凝集试验和PCR进行鉴定,并对分离到的细菌进行药敏试验.结果排除了流感病毒和尼帕病毒感染的可能性.从病料组织中成功分离到3株链球菌,证实为猪链球菌Ⅱ型.通过对其毒力因子进行鉴定,结果发现溶菌酶释放蛋白(MRP)和细胞外蛋白因子(EF)均为阳性.进一步的药敏试验证实:分离菌株对氨苄青霉素、先锋霉素Ⅵ、羧苄青霉素、复方新诺明、头孢呋肟等抗菌药高度敏感.结论病原为猪链球菌Ⅱ型.
-
猪链球菌2型毒力因子多重PCR检测方法的建立与应用
猪链球菌2型是一种重要的人兽共患传染病,该病已成为严重影响各国养猪业发展的一种重要疫病,同时也是公共卫生防疫的重点[1-2].不同猪链球菌2型菌株的致病力不同,可分为高致病性毒株、低致病性毒株、不致病性毒株3种,这种致病力差异与各菌株的毒力因子直接相关,猪链球菌的毒力因子较为复杂,已知的毒力因子有溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外蛋白因子(EF)、溶血素(SLY)、荚膜多糖(CPS)、IgG结合蛋白、毒力相关序列、黏着素等,不同地区分离的猪链球菌菌株,其毒力因子出现的概率也不一样,尚缺乏统一的评价标准[3-7].
-
猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白功能性片段的原核表达及其免疫保护性
目的 表达猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的功能性片段(tmrp),并检测其对小鼠的免疫保护性.方法 将构建的重组克隆载体pMD-tmrp经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将切下的目的基因tmrp亚克隆至原核表达载体pGEX-3X中,转化E.coliBL21(DE3),鉴定正确后,用IPTG诱导,谷胱甘肽亲和层析纯化GST-tmrp,免疫BALB/c小鼠,测定其免疫保护率.结果 阳性工程菌经IPTG诱导,表达了可溶性目的蛋白,相对分子质量约为73 000.0.8 mmol/L IPTG,37℃,pH7.2诱导4 h,表达量高,为25.36%.经亲和层析纯化,融合蛋白纯度达93.7%.免疫BALB/c小鼠后,免疫保护率可达60%.结论 已成功获得了具有免疫活性的GST-tmrp.
-
猪链球菌2型主要毒力因子研究进展
猪链球菌2型的毒力因子主要包括荚膜多糖(CPS)、溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外因子(EF)、溶血素(HLY)以及多种具有毒性作用的蛋白片段.荚膜多糖是猪链球菌2型抵抗巨噬细胞吞噬的重要物质,也是猪链球菌进行分型的标志.溶菌酶释放蛋白和细胞外因子多出现于高致病力的毒株中,MRP和EF阳性菌株一般具有较高的毒力.溶血素具有较强的细胞毒性作用,其对微血管内皮细胞的破坏作用有利于细菌在组织内的扩散.其他多种毒力因子虽也具有致病作用和免疫原性,但还有待于进一步研究.由于猪链球菌2型致病机理复杂,毒株表型多样,尚未发现可区分毒力株、弱毒力株和无毒力株的标志性因子.对猪链球菌2型的毒力因子进行深入研究,对于阐明猪链球菌2型的致病机理,寻找到快速有效的诊断治疗方法以及疫苗的构建都有重要意义.
-
猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达
目的: 克隆及表达猪链球菌2型(S.suis 2)人源分离株Habb截短溶菌酶释放蛋白(MRP)基因.方法: 根据S.suis 2 mrp基因的序列设计引物, 克隆和分析江苏海安患者分离株Habb截短mrp基因(tmrp), 构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp.在大肠杆菌中诱导带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的融合蛋白tMRP-GST表达;经亲和层析法纯化后, 用凝血酶酶切去除重组蛋白中的GST, 制备纯化的截短MRP(tMRP)抗原.用Western blot检测重组抗原的活性.结果: 序列分析表明, 获得的tmrp基因长957 bp;原核表达的融合蛋白tMRP-GST的相对分子质量(Mr)约61 000;凝血酶处理的tMRP抗原的Mr约为35 000.Western blot分析显示, MRP-GST、 tMRP蛋白均可与MRP多克隆抗血清发生特异性反应.结论: 成功地克隆人源分离株Habb截短的mrp基因, 并在原核系统实现高效表达, 制备的纯化抗原tMRP具有良好的抗原性, 为开展相关免疫学研究奠定了基础.
