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帕金森病运动并发症发生机制中G蛋白偶联受体激酶6与N-甲基-D-天冬氨酸受体关系的研究
目的 研究G蛋白偶联受体激酶6(GRK6)在帕金森病(PD)运动并发症发生机制中与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的关系.方法 建立PD运动并发症大鼠模型,25只大鼠分为3组.异动症(LID)组10只,腹腔注射左旋多巴甲酯23 d;MK-801处理组10只,第23天左旋多巴甲酯注射前腹腔注射MK-801;PD组5只,腹腔注射0.2%维生素C液.另设假手术组5只为对照组.观察MK-801处理左旋多巴诱导的运动并发症模型大鼠的行为变化,并用免疫组织化学方法和Western印迹方法检测大鼠纹状体区GRK6蛋白的表达情况.结果 PD组大鼠长期使用左旋多巴后出现明显的异常不自主运动,与人类LID具有相似特征.免疫组化结果显示.PD组损伤侧纹状体区GRK6阳性细胞指数减少至(4.81±1.31)×103(P＜0.05),LID组损伤侧GRK6阳性细胞指数进一步减少至(3.23±0.41)×103(P＜0.01).MK-801组LID大鼠异常不自主运动评分减少,药效期延长,同时损伤侧纹状体区GRK6阳性细胞指数增多至(4.64±1.39)×103(P＜0.05).Western印迹法检测结果同免疫组化基本相符,PD组损毁侧/未损毁侧纹状体区GRK6含量比值为(83.7±2.1)%,LID组GRK6值降低为(76.8±2.2)%,而MK-801组GRK6值升高至(91.1±2.7)%(P＜0.01).结论 NMDA受体拮抗剂能逆转大鼠运动并发症的发生,其机制可能与GRK6增多,抑制了谷氨酸受体的过度活化有关.
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PTX对GPER介导的雌激素激活的子宫内膜癌细胞中PI3K/Akt信号通路的影响
目的 研究百日咳毒素(PTX)对G蛋白偶联ER(GPER)介导的雌激素激活的子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响.方法 采用免疫组化SP法检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER蛋白的表达.将不同浓度(0、0.1、0.5、1.0 μg/ml)的PTX分别处理Ishikawa和HEC-1A细胞30 min后,再予上述浓度的PTX分别联合17β雌二醇(17β-E2；1×10-6molL)共同处理HEC-1A细胞15 min、Ishikawa细胞30 min,采用蛋白印迹法检测Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER、ERα、ERβ蛋白的表达及Akt的活化状态[Akt的活化状态以磷酸化Akt(p-Akt)/Akt表示].结果(1)免疫组化法检测显示,在Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER蛋白均在细胞质中呈棕黄色阳性表达.(2)蛋白印迹法检测显示,不同浓度(0、0.1、0.5、1.0μg/ml)的PTX联合17β-E2(1×10-6 mol/L)处理后,在Ishikawa细胞中,p-Akt/Akt分别为0.74±0.54、0.34 ±0.06、0.18±0.03、0.07±0.15,GPER蛋白的表达水平分别为0.872±0.490、0.395 ±0.054、0.145 ±0.014、0.034±0.008,随着PTX浓度的增加,p-Akt/Akt、GPER蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05),且当PTX浓度为1.0μg/ml时下降显著(F=63.729,P=0.0001;F ＝160.284,P=0.0001)；而ERα和ERβ蛋白的表达水平均无明显变化(P＞0.05).在HEC-1A细胞中,p-Akt/Akt分别为0.73 ±0.09、0.26±0.14、0.11 ±0.03、0,GPER蛋白的表达水平分别为0.927±0.134、0.485±0.022、0.194±0.004、0,随着PTX浓度的增加,p-Akt/Akt、GPER蛋白的表达水平均明显下降(P＜0.05),且当PTX浓度为1.0 μg/ml时均降至0(F=1039.321,P=0.0001；F=109.646,P=0.0001)；而ERα蛋白的表达水平无明显变化(P＞0.05),ERβ蛋白呈阴性表达.结论 在子宫内膜癌HEC-1A和Ishikawa细胞中,FTX阻断GPER后,可抑制雌激素对子宫内膜癌细胞PI3K/Akt信号通路的活化作用.
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CC趋化因子受体4及其抑制剂研究进展
CC趋化因子受体4(CCR4)是G蛋白偶联受体家族成员之一,由包含7次跨膜结构域的多肽链组成,表达于多种细胞或组织中.CCR4通过与其内源性配体CCL17、CCL22及CKLF1作用介导多种炎症反应,尤其在哮喘发生和发展的病理过程中起重要作用,因此可能是某些炎性疾病、特别是哮喘的潜在治疗靶点.本文对CCR4及其抑制剂的研究进展做一综述.
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雌激素跨膜受体GPR30及其在子宫内膜癌和卵巢癌中的研究进展
子宫内膜癌和卵巢癌均是女性生殖系统的恶性肿瘤，发病率呈逐年升高趋势，但发病机制尚未明了。近年发现，雌激素可介导新型G蛋白偶联受体30（GPR30）通过快速非基因转录途径调控肿瘤细胞增殖与凋亡，参与肿瘤发生发展。肿瘤相关成纤维细胞在肿瘤发展中的作用也不断受到重视。综述GPR30在子宫内膜癌及卵巢癌中的表达，分析探讨GPR30在妇科肿瘤发病机制中细胞增殖、凋亡等相关调控作用，以期为子宫内膜癌及卵巢癌的临床治疗提供新的靶点。
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胰岛素样因子3及其在多囊卵巢综合征中的作用
胰岛素样因子3（INSL3）既往被称为松弛素样因子，男性主要由睾丸间质细胞分泌，女性主要由卵巢卵泡膜细胞分泌。近有研究发现，多囊卵巢综合征（PCOS）患者特别是非肥胖的PCOS患者，INSL3浓度较正常人明显升高，这被认为是与黄体生成激素依赖性卵巢高雄激素血症有关。综述INSL3基因及分子结构、受体（新型G蛋白耦联受体LGR8/GREAT）在女性中的生理学作用，INSL3对PCOS患者发生和发展的重要影响。
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G蛋白偶联受体与辐射关系的研究进展
G蛋白偶联受体(GPCR)是一类细胞表面受体大家族,通过G蛋白介导其细胞作用,在介导细胞间信号转导的过程中起着十分重要的作用.研究发现,G蛋白和GPCR与辐射损伤关系密切,这些研究为充分认识辐射损伤机制及提高防治水平提供了新的观点.
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骨癌痛小鼠脊髓内皮素-1及其受体表达的变化
目的 评价骨癌痛小鼠脊髓内皮素-1(ET-1)及其受体表达的变化.方法 SPF级健康雄性C3H/HeN小鼠96只,4～6周龄,体重20～25 g,采用随机数字表法分为2组(n=48):假手术组(S组)和骨癌痛组(BCP组).BCP组采用右侧股骨远端骨髓腔接种含有1×104个/μl NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM 20μl制备小鼠骨癌痛模型;S组给予α-MEM 20μl.分别于接种前1d(T0)、接种后4、7、10、14和21 d(T1-5)时测定机械痛阈(MWT)和自发抬足次数(NSF),于T0.2.45时随机取12只小鼠处死,取腰脊髓膨大,采用Western blot法检测脊髓ET-1、内皮素A受体(ETAR)和内皮素B受体(ETBR)的表达;采用实时定量PCR法检测其mRNA的表达水平.结果 与To时比较,S组T1时和BCP组T1-5时MWT降低,NSF增加(P＜0.05);与S组比较,BCP组T2-5时MWT降低,NSF增加,T2,4,5时脊髓ET-1、ETAR和ETBR及其mRNA表达下调(P＜0.05).结论 小鼠骨癌痛的病理生理过程与脊髓ET-1及其受体表达下调有关.
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多巴胺D1受体激动剂对中枢神经系统疾病的治疗作用及其靶点通路研究进展
DA受体根据其不同信号转导机制分为:D1样受体和D2样受体.D1样受体与Gs 蛋白偶联,受刺激后能提高腺苷酸环化酶(AC)活性,升高细胞内环磷腺苷(cAMP)水平,这类受体包括D1和D5 2种亚型; D2样受体与Gi 蛋白偶联,受刺激后能降低AC的活性,降低细胞内cAMP水平,包括D2、D3、D4受体.D1受体是体内分布广泛的、受关注的多巴胺受体亚型之一,而且D1受体与阿尔茨海默症、药物依赖、帕金森病、精神分裂等中枢系统疾病关系密切.本文就 D1受体的分布、信号传导及与中枢神经系统疾病的关系进行综述.
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GalR2基因真核表达质粒的构建及鉴定
目的 构建GaIR2基因真核表达质粒,并在HeLa细胞中表达.方法 从C57BL/6J小鼠海马组织中提取总RNA,RT-PCR法扩增GalR2基因,克隆至pEGFP-C1载体中,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2.将重组表达质粒转染至HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位,RT-PCR和Western blot分别检测GalR2基因的转录及表达.结果 从C57BL/6J小鼠海马组织扩增出1 116 bp的GalR2基因;重组表达质粒pEGFP-GalR2经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;转染细胞融合基因的表达产物定位于细胞核,GalR2基因在mRNA及蛋白水平上均有表达.结论 已成功构建了GalR2基因真核表达质粒pEGFP-GalR2,并在HeLa细胞中成功表达了GalR2蛋自,为进一步探讨GalR2的生物学活性奠定了基础,也为寻找抗抑郁药物的靶点提供了新的思路.
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G蛋白偶联受体30介导的雌激素信号转导在雄性生殖系统中的研究进展
雌激素是人体内一种极其重要的类固醇激素,在心血管系统、运动系统、免疫系统和中枢神经系统等均发挥着重要的生物学作用,尤其在生殖细胞中的作用更为关键[1-4],雌激素的缺乏和过量可造成多种疾病的发生.雌激素是一种脂溶性化合物,可自由扩散进入细胞,雌激素的生理作用通过与其特异性受体雌激素受体(estrogenreceptors,ERs)结合而实现.
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对组胺受体和抗组胺药的新认识
人体内组胺受体主要有H1、H2、H3、H4 4种类型,属于G蛋白偶联受体(GPCRs).新的研究发现,GPCRs以结构活性方式存在,抗组胺药具有负性内在活性,能够阻断组胺受体的自发活性.绝大多数抗组胺药是受体的反向激动剂,在临床上具有广泛的应用前景.
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血浆网膜素和Apelin与代谢综合征关系的研究
目的:通过观察代谢综合征(MS)患者血浆Apelin和网膜素水平,探讨该两种物质与MS的关系.方法:按2005年国际糖尿病联盟(IDF)代谢综合征诊断标准入选MS患者64例(MS组),同期入选健康者45例作为正常对照组.所有受检者均采集血压、人体质量指数(BMD、吸烟史、家族史等信息.并抽取空腹静脉血测量血糖,血脂,肝、肾功能.采用酶联免疫分析法测定血浆Apelin和网膜素含量.结果:(1)两组研究对象一般指标中,年龄、性别比例、身高均无显著性差异(P>0.05);MS组患者腹围、体重、BMI、血压、空腹血糖、血脂水平均明显高于正常对照组(P<0.05～0.01);(2)两组血浆Apelin水平无显著差别[(1.05±0.60)ng/ml比(0.90±0.31)ng/ml,P>0.05];MS组血浆网膜素水平较正常对照组明显降低[(31.73±24.66)ng/ml比(46.83±21.83)ng/ml,P<0.001];(3)相关性分析显示:血浆Apelin水平与空腹血糖呈负相关(r=-0.5852,P<0.05);血浆网膜素水平与体重呈负相关(r=-0.6079,P<0.05),血浆Apelin水平与网膜素水平呈负相关(r=-0.3354,P=0.024).结论:网膜素和Apelin可能参与代谢综合征的某些代谢过程.
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GPR30下调对子宫内膜癌细胞及裸鼠移植瘤组织 PI3K／Akt信号通路的影响
目的：探讨G蛋白偶联受体（GPR 30）下调对子宫内膜癌细胞及裸鼠移植瘤组织PI3K／Akt信号通路的影响。方法：采用免疫细胞化学SP法观察子宫内膜癌细胞系HEC-1A和Ishikawa细胞中GPR30、Akt和磷酸化Akt （p-Akt）蛋白的定位。以pGFP-V-RS（对照）和pGFP-V-RS-GPR30（干扰）分别转染两种细胞，用蛋白印迹法检测两种细胞中GPR30、Akt及p-Akt蛋白的表达水平。构建裸鼠移植瘤模型（分别接种上述4种转染细胞，共4组），用免疫组化SP法检测4组裸鼠移植瘤组织中p-Akt蛋白的表达。结果：①HEC-1A和Ishikawa细胞中，GPR30、Akt和p-Akt蛋白阳性表达均呈棕黄色，定位于细胞质。②稳定转染pGFP-VR-S -GPR30的两种细胞株中GPR30和p -Akt的表达均下调（ P＜0．05）。③与接种转染pGFP-V-RS细胞的2组裸鼠相比，接种转染pGFP-V-RS-GPR30细胞的2组裸鼠移植瘤组织中p-Akt表达降低。结论：在子宫内膜癌细胞及裸鼠移植瘤组织中， GPR30下调可能抑制了PI3K／Akt通路的活化。
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G蛋白偶联受体激酶的临床应用前景
G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)在人体多种生理和病理过程中发挥重要作用,G蛋白偶联受体激酶(G protein-coupled receptor kinases,GRKs)的功能主要是参与GPCRs的同源脱敏,终止GPCRs介导的信号转导通路.此外GRKs还通过其他多种机制调节机体的生理功能.GRKs几乎存在于所有动物细胞中,有广泛而复杂的调节网络.GRKs活性不足或亢进参与多种疾病的发生与发展,因此精确调节GRKs具有重要的临床应用价值.本文就GRKs的临床应用价值及针对GRKs调节网络及干预方法的研究的新进展作一综述.
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G蛋白偶联受体激酶在细胞迁移和细胞信号转导中的作用
G-protein-coupled receptor kinases (GRKs) are a family of serine/threonine protein kinases. The investigators pay much attention to the roles of GRKs in the signal transduction through G-protein-coupled receptors (GPCRs) with arrestin ever since a long time ago. Due to the physiological and pathological observations with the methods of deletion or overexpression, GRKs are considered as new drug targets. The kinases play a role in the pathogenesis of hypertension and cell migration through GPCRs and Hedgehog signaling pathways. As the development of research techniques, especially bioluminescence resonance energy transfer (BRET) and fluorescence resonance energy transfer (FRET), the special mechanism of GRKs for GPCRs is more evident. In this review, we discuss the recent achievement in the roles of GRKs signaling and the related newest research techniques.
关键词： G蛋白偶联受体激酶类 受体 G蛋白偶联 信号转导
