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以重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP为载体的结合疫苗制备及免疫原性研究
目的:以重组B群脑膜炎奈瑟菌(Nesseria meningitidis,Nm)外膜蛋白fHBP(recombinant factor H binding protein,rfHBP)为载体与C群多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)共价结合制备结合疫苗并免疫小鼠,检测小鼠血清中针对B群和C群Nm的杀菌抗体,评价该重组蛋白作为结合疫苗载体的可行性及该结合疫苗对B群Nm的交叉保护性.方法:扩增fhbp并连接到pET30a(+)表达载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍亲和层析柱纯化rfHBP,CNBr活化法将rfHBP与GCMP共价结合,制备结合疫苗,免疫小鼠,间接ELISA法检测血清中GCMP抗体和rfHBP抗体滴度,TTC法检测结合物诱导的分别针对B群和C群Nm的杀菌抗体水平.结果:成功扩增fhbp并连接至pET30a(+)表达载体上,大肠杆菌中诱导表达rfHBP,纯化后与GCMP结合.结合物免疫小鼠后,检测到的针对GCMP的IgG抗体滴度与GCMP组比较有明显加强效应；三针免疫后,针对C群Nm的杀菌抗体滴度高于GCMP对照组,有统计学意义(P＜0.05)；针对B群Nm的杀菌抗体滴度与rfHBP对照组间无统计学意义(P＞0.05)；两组结合物诱导的分别针对B群Nm CMCC29361株和ATCC700111株的杀菌抗体滴度间无统计学意义(P＞0.05).结论:结合疫苗免疫小鼠后检测到的针对C群Nm的杀菌抗体高于单独GCMP组,证明该重组蛋白可作为结合疫苗的载体蛋白；且在结合过程中较好地保留了蛋白的免疫原性,对B群Nm有良好的交叉保护作用.
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不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响
目的 探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,fHBP)表达的影响.方法 运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌fHBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至pET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平.结果 替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌fHBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍.结论 替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白表达的影响大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌fHBP表达量的研究工作提供了新思路.
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H因子结合蛋白作为B群流脑候选疫苗抗原的研究进展
脑膜炎奈瑟菌表面蛋白H因子结合蛋白(fHBP),是脑膜炎奈瑟菌的外膜蛋白和重要毒力因子,能与补体调节蛋白H因子结合.结合于脑膜炎奈瑟菌表面的H因子,能下调补体系统的激活作用,使脑膜炎奈瑟菌逃避补体系统的攻击.fHBP能诱导机体产生高水平的保护性抗体,抗fHBP抗体与fHBP结合后可阻止fHBP与H因子的结合,从而使细菌易于被补体系统杀灭和清除.因此,fHBP已成为B群流行性脑脊髓膜炎理想的疫苗候选抗原之一.现就fHBP的结构、基因的表达与调节、作为B群脑膜炎奈瑟菌疫苗候选抗原的作用、应用策略、安全性和有效性等新研究进展进行综述.
