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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗生产用毒株的筛选及鉴定
目的:从临床样本中分离发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)毒株,经过充分比较研究后,确定1株适合疫苗生产的毒株.方法:使用Vero细胞从发热伴血小板减少综合征患者临床样本中分离病毒株,经噬斑纯化鉴定后进一步适应传代,比较研究各毒株在细胞中的传代适应性、免疫原性、交叉保护性以及遗传稳定性等,筛选并确定1株疫苗生产用毒株,按照要求建立三级种子库.结果:共获得7个SFTSV分离株,各分离株病毒均可以在Vero细胞中良好复制,病毒滴度均可达到7.0 lgCCID50· mL-1以上,其中AH12株滴度可达9.0 lgCCID50· mL-1.毒株适应传代后滴度稳定,灭活病毒免疫动物均可产生针对本株及其他毒株的中和抗体,其中HB29株和AH12株免疫后具有较高的中和抗体水平以及良好的交叉保护性.基于AH12株建立的三级种子库经全面检定,结果符合《中国人民共和国药典》三部(2010版)要求.结论:经过对不同SFTSV毒株的比较研究,确定AH12株为疫苗生产用毒株并成功建立三级种子库.
关键词： 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 灭活疫苗 三级种子批 毒种筛选 -
汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选
目的 将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞,并对其抗原性和免疫原性进行研究.方法 将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物,在乳沙鼠脑内连续传代,比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况;在Vero细胞中传代,比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况;利用筛选出的毒株研制Vero细胞灭活疫苗,研究疫苗的免疫原性.结果 4株病毒经乳沙鼠脑内传代,鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7.00～7.75 LgCCID50/ml和1∶320 1∶1 280;4株毒株经Vero细胞连续传5代,培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6.50～7.50 LgCID50/ml和1∶160～1∶768;疫苗免疫家兔2针后,其中出血热病毒株ZJ4与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1∶10.结论 ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞,且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性,适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株.
关键词： 汉坦病毒 细胞培养 Vero细胞灭活疫苗 毒种筛选 -
肾综合征出血热病毒高效价免疫血清抗体毒株的筛选
肾综合征出血热(HFRS)是由布尼亚病毒科汉坦病毒属引起的急性传染病.在HFRS病毒和疫苗的研究工作中,常采用间接免疫荧光抗体(IFA)技术和直接荧光抗体(FA)技术[1].
