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载诺帝脂质微泡的制备及特性的实验研究
目的 制备载诺帝(去甲二氢愈创木酸)脂质微泡并测定其包封率、载药量及观察其体内超声显像效果.方法 采用机械振荡法制备载诺帝脂质微泡,测定其粒径大小、分布和Zeta电位、包封率、载药量;超声造影观察其在兔肝内的显像效果.结果 载药脂质微泡的浓度为(2.53±0.52)×10~9个/ml,粒径为(2.61±0.32)μm,Zeta电位为+(17.52±2.04)mV;脂质微泡诺帝的包封率(27.1±2.01)%,载药量为(10.9±0.90)%;微泡经外周静脉注射后,兔肝可见良好、持续的增强显像效果.结论 采用机械振荡法可以成功制备携带诺帝的脂质微泡,微泡可以通过肺血管床,符合静脉注射要求,在家兔体内获得了良好的显像效果.
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超声辐照载诺帝脂质微泡对血管内皮细胞增殖的影响及体外内皮细胞三维成型的抑制作用研究
目的 探讨超声辐照载诺帝脂质微泡对正常血管内皮细胞增殖的影响及体外内皮细胞三维成型的抑制作用研究.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并且进行内皮细胞体外三维培养.将细胞分5组,即对照组,载诺帝微泡组,诺帝溶液组,超声辐照诺帝溶液组,超声辐照载诺帝脂质微泡组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同处理组对细胞生长的影响.比较不同处理组对内皮细胞三维培养的影响.结果 在诺帝浓度为200 μmol/L时,超声辐照载诺帝微泡组对细胞增殖抑制作用强于其他处理组及对照组；在三维培养3、5、7、9d后观察发现,超声辐照载诺帝微泡组对体外管腔形成的抑制作用更显著,差异有统计学意义.结论 超声辐照载诺帝脂质微泡造影剂对人脐静脉内皮细胞的生长和体外管腔形成有明显抑制作用.
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诺帝诱导人胶质瘤细胞系CHG-5分化的蛋白质表达图谱的建立及差异蛋白质组分析
目的 建立诺帝诱导人胶质瘤细胞系CHG-5分化的蛋白质表达图谱并比较其表达差异.方法 分别用100μmol/L、200μmol/L诺帝诱导CHG-5细胞分化,观察处理后24h、48h、72h细胞的形态改变;分别提取200μmol/L诺帝处理后的CHG-5细胞和对照组细胞总蛋白,进行双向电泳,所获蛋白表达图谱用PDquest 7.1软件比较其蛋白质表达差异,选取部分高表达的差异蛋白进行质谱分析.结果 100μmol/L和200μmol/L诺帝处理后均可明显诱导CHG-5细胞分化,以72h时细胞分化为明显.双向电泳发现诱导分化后细胞出现了18个差异蛋白点,其中9个蛋白点表达上调,9个蛋白点表达下调,并获得差异蛋白的分子量、等电点等信息.对其中部分高表达的差异蛋白点成功地进行了质谱鉴定.结论 诺帝诱导人胶质瘤细胞系CHG-5分化时蛋白质组改变涉及到细胞增殖、凋亡、基因转录、蛋白表达调控等各个方面.
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诺帝对CXCR4介导的人恶性胶质瘤细胞钙流和白细胞介素8分泌的抑制作用
目的 观测诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系U87细胞趋化因子受体CXCR4活化后钙流变化及白细胞介素8(IL-8)产生的影响.方法 采用Fluo-4/AM标记钙离子、激光共聚焦显微术观测CXCR4被其配体间质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)活化后U87细胞钙流的变化,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8的含量;以CXCR4抑制剂AMD3100为对照,用自行合成的化合物诺帝顸处理U87细胞,再用SDF-1α刺激,观测二者对CXCR4活化后引起的钙流变化和IL-8分泌的影响.结果 25～100ng/ml SDF-1α可不同程度地引起U87细胞胞内钙流增加和IL-8分泌量增多,与对照组(无SDF-1α刺激)相比均有显著统计学意义(P<0.05);用1～10μmol/LAMD3100或25～100μmol/L诺帝预处理细胞,再用SDF-1α刺激,上述效应受到抑制.结论 诺帝可抑制CXCR4活化引起的钙流和IL-8产生,这可能是其抗胶质瘤血管生成机制之一.
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诺帝对血管内皮生长因子诱导的人脐血源性内皮祖细胞功能的影响
探讨手性化合物诺帝(Nordy)对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人脐血源性内皮祖细胞(EPCs)功能的影响及其意义.应用密度梯度离心法分离新鲜人脐血的单个核细胞,接种于EGM-2培养液中培养7～10 d获得内皮祖细胞(EPCs).分别采用MTT法、Millicell-PCF培养小室系统和Matrigel内小管形成试验检测诺帝对VEGF刺激下EPCs增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构能力的影响.结果表明,100 μmol·L-1诺帝作用24 h明显抑制EPCs增殖活性(P<0.05),诺帝(25～50 μmol·L-1)作用48～72 h也明显抑制EPCs增殖活性(P<0.05).诺帝(25～100 μmol·L-1)显著抑制VEGF诱导的EPCs迁移活性和体外形成小管样结构的能力(P<0.05).诺帝能抑制体外VEGF诱导的人脐血源性EPCs增殖、迁移和体外小管形成能力,提示其具有抗EPCs效应.
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诺帝对人恶性胶质瘤细胞U87甲酰化肽受体功能的影响
探讨手性化合物诺帝对人恶性胶质瘤细胞甲酰化肽受体(formylpeptide receptor,FPR)功能的影响及其意义.以培养的人恶性胶质瘤细胞U87为研究对象,用FPR激动剂fMLF(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine)刺激细胞,以双室跨膜迁移模型检测细胞的迁移能力、计数法测定细胞的增殖能力、分光光度法测定细胞内钙流、RT-PCR方法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)mRNA表达,以ELISA方法检测VEGF蛋白水平,并测定诺帝(25～100 μmol·L-1)处理瘤细胞后上述功能指标的变化.50 μmol·L-1诺帝能有效抑制fMLF诱导的细胞增殖、迁移(P＜0.05)和细胞内钙流,100 μmol·L-1诺帝能抑制VEGF mRNA表达,降低VEGF水平(P＜0.05).诺帝能抑制FPR介导的人恶性胶质瘤细胞增殖、迁移和VEGF产生,提示其具有抗肿瘤活性.
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诺帝对CasKi细胞增殖及中心体Aurora-A和γ-tubulin基因表达的影响
目的 探讨诺帝对CasKi细胞增殖、细胞周期及中心体Aurora-A、γ-tubulin和P53蛋白表达的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的诺帝处理CasKi细胞,MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞周期,间接免疫荧光检测中心体的变化,RT-PCR检测细胞Aurora-A基因mRNA的表达,Western blot法检测细胞γ-tubulin、Aurora-A和P53蛋白的表达.结果 诺帝能明显抑制CasKi细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,且呈明显的剂量和时间依赖性;细胞中心体内γ-tubulin荧光信号明显减弱,Aurora-A基因mRNA的表达量及γ-tubulin和Aurora-A蛋白的表达量明显下降,而P53蛋白的表达量明显升高,且呈剂量依赖性.结论 诺帝可能通过下调Aurora-A,上调P53,发挥其抑制CasKi细胞增殖、阻滞细胞周期,并阻止中心体扩增,限制细胞无序增殖的作用.
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恶性胶质瘤细胞SHG-44诱导分化后的差异蛋白质组双向电泳分析
目的用双向电泳分析诺帝诱导胶质瘤细胞SHG-44分化后的差异蛋白质组,为进一步了解这些差异蛋白质的作用打下基础.方法将诺帝诱导胶质瘤细胞SHG-44分化后的总蛋白及其相应的空白对照组细胞总蛋白进行双向电泳分离,重复3次后用PDQuest7.1软件比较分析蛋白质表达差异并获得差异蛋白质的相对分子质量、等电点等信息.结果诺帝诱导胶质瘤细胞SHG-44分化后有23个差异蛋白点,其中21个蛋白点表达下调,2个蛋白点表达上调.结论诺帝诱导胶质瘤细胞SHG-44分化后大部分蛋白质表达下调,推测诺帝诱导胶质瘤细胞SHG-44分化时蛋白表达以抑制作用为主.
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诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞凋亡的诱导作用
目的 探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2蛋白表达的影响.方法 采用自行合成的化合物诺帝(终浓度为100 μmol/L)处理A549细胞,于处理后12、24、48和72 h用细胞培养、流式细胞仪、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞凋亡和bcl-2蛋白的表达.结果 一定浓度的诺帝处理A549细胞12～48 h,均可诱导A549细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;诺帝处理A549细胞后,出现细胞bcl-2蛋白表达水平显著降低.结论 诺帝诱导了A549细胞的凋亡,其作用可能与其下调了bcl-2蛋白的表达有关.
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诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响
目的 探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响.方法 采用自行合成的化合物诺帝(终浓度为100 μmol/L)处理A549细胞,处理后12、24、48和72 h,用细胞培养、流式细胞仪检测、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞的影响.结果 诺帝可使A549细胞增殖受抑制,对细胞周期抑制作用主要表现于G1→S期;诺帝处理后,A549细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显减弱.结论 诺帝对A549细胞的增殖有显著抑制作用,这种作用与其抑制PCNA有关.
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诺帝滴眼液对大鼠角膜碱烧伤的治疗作用
目的 前期研究证实诺帝滴眼液能有效抑制大鼠角膜新生血管(corneal neovascu-larization,CNV),在此基础上进一步探讨诺帝滴眼液对大鼠角膜碱烧伤的综合疗效,并探索其有效浓度的佳值,为将来诺帝滴眼液应用于临床奠定理论基础.方法 建立大鼠碱烧伤模型,分为空白对照组、1 g·L-1地塞米松组、0.25 g·L-1和1 g·L-1诺帝滴眼液治疗组.定量分析CNV生长、角膜混浊程度以及角膜上皮愈合情况的变化,HE染色及电镜观察炎症,性角膜的组织学形态.结果 0.25 g·L-1和1 g·L-1诺帝滴眼液治疗组CNV生长、角膜混浊程度及角膜上皮缺损均小于空白对照组(P<0.01);治疗组间比较,1 g·L-1诺帝滴眼液抑制CNV效果佳(P<0.05);1 g·L-1诺帝治疗组与地塞米松组抑制CNV程度无明显差异(32.97%±5.76%、29.53%±7.63%,P>0.05),但1 g·L-1诺帝治疗组角膜上皮愈合优于地塞米松组(0.37±0.37)mm(P<0.05).结论 诺帝滴眼液能够有效抑制炎症性角膜新生血管的生长,减轻角膜混浊,并能促进角膜上皮愈合.其中以1 g·L-1浓度效果佳.
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诺帝抑制糖尿病大鼠视网膜毛细血管基底膜增厚的体视学观测
目的 检测诺帝对糖尿病大鼠视网膜毛细血管基底膜增厚的影响及意义.方法 采用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(10只)、生理盐水注射组(10只)和诺帝注射组(10只),另取10只正常大鼠作为正常对照组.其中,诺帝注射组在出现糖尿病表现后按27 mg·kg-1腹腔注射诺帝溶液(隔日1次),生理盐水注射组只在同期注射等量生理盐水,糖尿病组和正常对照组不予任何处理.注射后1个月、3个月分别取视网膜制片,通过PAS染色、透射电镜观察视网膜毛细血管形态的改变,对视网膜毛细血管基底膜行超微结构体视学定量.结果 糖尿病组和生理盐水注射组大鼠3个月视网膜制片PAS染色可见毛细血管壁着色区增厚,其余各组大鼠PAS染色均未发现明显异常改变.糖尿病组、生理盐水注射组、诺帝注射组和正常对照组视网膜毛细血管基底膜平均体积(×106 nm3)在1个月时分别为:1.22±0.11、1.20±0.09、0.92±0.14、0.62±0.08;在3个月时分别为:2.15±0.48、2.14±0.44、1.33±0.34、0.88±0.17.糖尿病组和生理盐水注射组大鼠在1个月和3个月时,毛细血管基底膜平均体积均较同期正常对照组增加(P＜0.01).诺帝腹腔注射明显减轻糖尿病大鼠视网膜毛细血管基底膜增厚(与无诺帝处理的糖尿病组大鼠和生理盐水注射组大鼠比较差异有显著性,P＜0.01).结论 诺帝能抑制糖尿病大鼠视网膜毛细血管基底膜的增厚,提示诺帝可能对糖尿病视网膜病变具有一定的抑制作用.
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诺帝抑制糖尿病大鼠视网膜增生性胶质反应
目的检测诺帝对实验性糖尿病大鼠视网膜胶质细胞反应的影响,并探讨其可能的意义.方法采用链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(10只)、诺帝治疗组(10只)和正常对照组(10只),其中诺帝治疗组在出现糖尿病表现后按27 mg·kg-1腹腔注射诺帝溶液(隔日1次),糖尿病组只在同期注射等量生理盐水,正常对照组不给予任何药物.注射后1个月、3个月后取视网膜制备切片,采用免疫组织化学方法定量检测视网膜中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性反应及其分布.结果腹腔注射后1个月,各组大鼠视网膜GFAP阳性反应多局限在内界膜,阳性面积无显著性差异(P＞0.05);在注射后3个月糖尿病组大鼠GFAP阳性反应增强,贯穿于视网膜全层,阳性反应面积与对照组和诺帝处理组相比,差异有统计学意义(P＜0.01),而诺帝处理组与对照组大鼠视网膜表达的GFAP仍多局限在内界膜,两者相比差异无明显统计学意义(P＞0.05).结论诺帝可抑制实验性糖尿病大鼠视网膜GFAP阳性反应,提示诺帝在一定程度上可减轻视网膜增生性胶质细胞反应,有利于抑制大鼠糖尿病视网膜病理过程.
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诺帝滴眼液抑制碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管分子机制的初步研究
目的 初步探索0.1%诺帝滴眼液对角膜新生血管(corneal neovascularization,CRNV)抑制作用的分子机制.方法 建立大鼠碱烧伤角膜新生血管模型,分空白溶液组、0.1%诺帝滴眼液组、0.1%地塞米松滴眼液组.采用免疫组化及RT-PCR法检测VEGF、flk-1蛋白及mRNA表达.结果 治疗组及地塞米松组VEGF蛋白表达少于空白溶液组(P<0.05).7 d、14 d VEGF mRNA抑制率分别为:治疗组58.60%,74.60%;地塞米松组76.88%,80.95%.flk-1 mRNA抑制率:治疗组66.27%,69.63%;地塞米松组72.16%,74.81%.结论 0.1%诺帝滴眼液明显降低角膜VEGF和其受体flk-1 mRNA蛋白表达,通过下调VEGF受体量,间接减少VEGF受体后信号转导及效应蛋白合成,抑制了CRNV的发生.
关键词： 诺帝 角膜新生血管 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体 -
诺帝抑制胃癌细胞系SGC-7901血管生成因子表达的实验观察
目的探讨诺帝(Nordy)对胃癌细胞血管生成因子VEGF、Ephrin B2及其受体Eph B4表达的影响及其意义.方法采用细胞培养、透射电镜、免疫细胞化学和图像分析等方法观测诺帝作用前后人胃腺癌细胞系SGC-7901细胞形态及VEGF、Ephrin B2和Eh B4蛋白表达的变化.结果100μmol/L诺帝处理48h后,胃癌细胞核异型性降低,细胞器减少;VEGF、Ephrin B2和Eph B4蛋白表达水平降低.结论诺帝可抑制胃癌细胞VEGF、Ephrin B2和Eph B4蛋白表达,此作用可能是诺帝抗血管生成作用的重要分子基础.
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诺帝对人卵巢癌细胞3AO和SKOV3增殖、周期及Aurora-A表达的影响
目的 探讨抗肿瘤新药诺帝(Nordy)在体外对卵巢癌细胞(3AO黏液性癌,SKOV3浆液性癌)生长的抑制作用及对细胞周期的影响,同时对卵巢癌细胞株中Aurora-A的mRNA和蛋白过表达的抑制作用进行研究.方法 MTT法检测诺帝对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR和Western blot检测Aurora-A的mRNA和蛋白表达情况;流式细胞术分析细胞周期.结果 经诺帝作用后Aurora-A的mRNA及蛋白的表达水平显著下降(P<0.01);诺帝能明显抑制3AO、SKOV3细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期(P<0.05).结论 诺帝对卵巢癌3AO、SKOV3细胞的生长具有明显抑制作用,可以阻滞细胞周期.在诺帝多环节的抑癌机制中,抑制癌细胞株Aurora-A的异常高表达,阻止中心体的异常转变可能是其机制之一.
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诺帝抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS的表达及意义
目的检测诺帝对实验性糖尿病大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的影响,探讨诺帝抑制糖尿病视网膜病变的可能机制.方法采用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(5只×2)、诺帝治疗组(5只×2),另取10只正常大鼠作为正常对照组,其中,诺帝治疗组在出现糖尿病表现后按27 mg/kg腹腔注射诺帝溶液(隔日1次),糖尿病组和正常对照组只在同期注射等量生理盐水.注射后1、3个月取视网膜制备切片,采用免疫组织化学方法半定量检测视网膜中VEGF和iNOS阳性反应及其分布.结果正常对照组大鼠视网膜VEGF和iNOS呈极微弱的表达.1个月时,糖尿病组VEGF和iNOS阳性反应增强,其阳性反应面积较正常对照组显著增加(P＜0.01);诺帝治疗组大鼠视网膜VEGF和iNOS阳性表达面积较糖尿病组明显减少(P＜0.01).在3个月时,糖尿病组VEGF和iNOS阳性表达较1个月明显增加;诺帝治疗组较糖尿病组VEGF和iNOS表达明显减少,阳性表达面积在两组间有非常显著的差异(P＜0.01).结论诺帝明显抑制实验性糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS阳性反应,提示诺帝可能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF和iNOS的产生,从而缓解大鼠糖尿病视网膜病变.
关键词： 糖尿病视网膜病变 血管内皮细胞生长因子 一氧化氮合酶 诺帝 -
诺帝滴眼液对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用
目的观察自制诺帝滴眼液(Nordy eye drop)对Long-Evans大鼠角膜碱烧伤后新生血管(CRNV)有无抑制作用及其对正常角膜有无毒副作用.方法采用0.025%、0.1%两个不同浓度诺帝滴眼液滴眼21 d,通过裂隙灯、光镜、电镜观察检测诺帝滴眼液的毒副作用.建立角膜碱烧伤后角膜新生血管模型,0.025%、0.1%两个不同浓度诺帝滴眼液4次/d滴眼治疗,0.1%地塞米松磷酸钠滴眼液作为阳性对照、空白溶液作为阴性对照,观察诺帝治疗效果.结果诺帝滴眼液滴眼21 d后观察正常大鼠,无畏光、结膜充血等刺激症状,组织学检查显示结构正常,未见炎性细胞浸润.大鼠角膜碱烧伤后1 d时仅见角膜缘血管网扩张,3 d时新生血管长入,7～14 d达高峰,14 d时治疗组和地塞米松组新生血管开始退化;比较各组CRNV面积与角膜面积的比值,治疗组和阳性对照组均小于阴性对照组并有非常显著性差异(P＜0.01),治疗组与阳性对照组间、0.025%与0.1%治疗组间均无显著性差异(P＞0.05).结论 0.025%、0.1%的诺帝滴眼液局部滴眼无明显毒副作用,并且对CRNV有显著抑制作用.
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携带诺帝的聚乙烯醇颗粒治疗兔VX-2肝移植肿瘤的疗效研究
目的 探讨经导管肝动脉注射携带诺帝的PVA颗粒治疗兔VX2肝移植肿瘤的短期疗效.方法 采用开腹直接种植法制备兔VX2肝移植肿瘤模型;随机选出30只VX2瘤兔进行介入治疗,分为对照组(注射生理盐水5ml)、TACE组(注射碘化油乳剂0.2ml/kg+顺铂1mg/kg)、实验组(注射携带诺帝的PVA颗粒1mg/kg)三组,每组10只;术前1d及术后1、3、7d观察血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及肌酐(Cr)水平的变化,术前及术后7、14d分别行CT扫描,测量肿瘤大小计算肿瘤体积增长率、统计转移部位;术后7d采用ELISA方法检测血清VEGF蛋白含量.结果 TACE组、实验组术后1、3d血清ALT、AST显著升高,两组无明显差异,但与对照组相比有显著性差异(P＜0.01),两组术后1、3d血清Cr没有显著性差异;ALT、AST、Cr术后7d基本降至术前水平;TACE组、实验组术后14d肿瘤体积增长率均小于对照组,差异显著(P=0.000),同时实验组肿瘤体积增长率低于TACE组,也有显著性差异,转移部位少于TACE组;术后7d血清VEGF蛋白含量以TACE组高,与对照组、实验组相比,具有显著性差异;实验组高于对照组,也有显著性差异.结论 携带诺帝的PVA颗粒短期内具有一定的抑制肿瘤生长效果,可为临床治疗肿瘤提供一种新的思路.
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诺帝抑制人恶性胶质瘤细胞CXCR4表达及功能活性
背景与目的:抑制血管生成将为胶质瘤的治疗提供新的希望,本研究观测我室自行合成的化合物诺帝(Nordy)对人恶性胶质瘤细胞系U87细胞CXCR4表达及其功能活性的影响.方法:通过免疫荧光标记,激光共聚焦扫描显微术观测诺帝对U87细胞CXCR4表达的影响;采用鬼笔环肽(Phalloidin)-FITC标记丝状肌动蛋白(F-actin),并通过激光共聚焦扫描显微术观察诺帝对CXCR4活化引起的F-actin聚合的影响;分别采用趋化试验和酶联免疫吸附试验(EUSA)检测诺帝对CXCR4活化引起的细胞迁移活性增加和血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响.结果:25～100 ìmol/L诺帝处理12 h可明显降低U87细胞中CXCR4的表达;用诺帝预处理细胞后,再加热间质细胞衍生因子(SDF-1á),结果发现诺帝可显著抑制CXCR4活化引起的U87细胞迁移活性增加、肌动蛋白聚合和促血管生成因子VEGF分泌.结论:抑制人恶性胶质瘤CXCR4的表达及功能活性可能是诺帝抗癌效应的机制之一.
关键词： 神经胶质瘤 趋化因子受体CXCR4 侵袭 血管内皮生长因子 诺帝
